沙塵試驗(yàn)箱不密封怎么辦？

做液相色譜的同學(xué)基本都會(huì)碰到分叉峰，

很多時(shí)候，

這都意味著硬件或者方法某些地方可能出現(xiàn)問題。

今天我們就一起看看導(dǎo)致峰分叉的原因，

以及如何解決這個(gè)問題。

首先，我們需要判斷，

這到底是一個(gè)峰，還是兩個(gè)峰?

a圖主峰前面有一個(gè)肩峰，

這到底是峰形不好，

還是另外一個(gè)化合物沒分開呢?

判斷方法

降低該成分在樣品中的濃度

b圖是降低該成分濃度后，

進(jìn)樣后得到的色譜圖。

如果這是一個(gè)峰，

那肩峰也應(yīng)該響應(yīng)變小，

但是這個(gè)例子里，

肩峰沒有變小，

這應(yīng)該是另外一個(gè)化合物。

這時(shí)候，我們就要考慮如何改變方法

將這兩個(gè)東西分開。

如果所有峰的峰形都不好

一般來說，

一個(gè)樣品都會(huì)出多個(gè)峰。

峰形不好，絕大多數(shù)時(shí)候

在每個(gè)峰上面都會(huì)出現(xiàn)。

比如像下面這樣：

a圖是所有峰都拖尾，

b圖是所有峰都有肩峰，

也可以說峰分叉，

這種情況一般都是色譜柱頭塌陷

或者柱頭的篩板被堵導(dǎo)致的。

為什么會(huì)導(dǎo)致峰形問題呢？

請看下面的圖

a圖是正常的柱頭，

b圖是篩板被堵的柱頭。

正常情況下，

所有樣品分子都是均勻通過色譜柱，

形成一個(gè)對稱的峰形。

堵塞的情況下，

有一部分樣品分子進(jìn)入色譜柱就會(huì)受到阻擾，

導(dǎo)致時(shí)間拖后，形成拖尾。

對于色譜柱塌陷的情況，

用同樣的方法大家也不難理解。

只不過這時(shí)候，

是一些樣品分子可能跑的比正常的快了一些。

如何解決這個(gè)問題呢？

1  反沖

柱出口放空，

沖20-30ml流動(dòng)相。

雖然柱子上都有表明使用方向，

但是對于硅膠基質(zhì)的色譜柱

基本都可以反沖。

將柱頭污染物

如泵密封圈的碎屑，

樣品中的污染等沖走，

就能解決問題。

當(dāng)然，還是要提倡大家注意

樣品上機(jī)之前的前處理

和及時(shí)更換磨損的泵密封圈。

有條件的還是用保護(hù)柱，

大不了就換保護(hù)柱，

也比換色譜柱強(qiáng)。

2  更換或清洗篩板

現(xiàn)在估計(jì)做這個(gè)事情的人不多，

但是誰有廢柱子，

想練練也未嘗不可。

我們一起看看一個(gè)實(shí)際的例子

根據(jù)之前說的，

可能是柱頭堵了，

或者塌陷了。

但是進(jìn)一步檢查，

發(fā)現(xiàn)另有原因。

方法用的150 mm 4.6 mm, 5 um C18 柱子，

78% 乙腈，1.5ml/min，等度方法，

進(jìn)樣10ul，100%乙腈溶解的樣品。

一般來說，

雖然10ul的純乙腈不會(huì)引起峰形不好，

但是有時(shí)候樣品溶劑的極性跟流動(dòng)相差異較大時(shí)，

的確會(huì)引起峰形的問題。

我們怎么辦呢？

01

從最容易的辦法做起，

降低溶劑乙腈的比例，

降到50%看看。

從下圖b，4min的峰可以看出，

沒啥改觀。

02

接下來反沖柱子，

結(jié)果如圖c，

基本沒變化。

算了，明天再說吧。

03

第二天來到實(shí)驗(yàn)室，

還能干嘛呢? 

更換篩板?

算了，直接換柱子吧！

結(jié)果如d，

噢，好很多噢。

之前柱子肯定有問題，扔了。

但是峰還是有點(diǎn)寬，

估計(jì)還是哪兒有問題。

手上忙，沒時(shí)間管這個(gè)。

04

幾天過后，

重新配了流動(dòng)相，

一跑，好了，如圖e。

雖然到底什么原因?qū)е轮胺逍蔚膯栴}，

已經(jīng)無從查找

（柱子扔了，舊流動(dòng)相也沒了），

但是也給我們提供了一個(gè)解決問題的步驟：

1

確定峰形問題

是所有峰都有問題，

還是就是某一個(gè)峰有問題。

如果所有峰都有問題，

基本都是色譜柱，

或者儀器管路連接的問題。

如果是某一個(gè)峰有問題，

那就要從方法上來考慮，

是否需要改變流動(dòng)相比例，

pH值，色譜柱溫度等等。

2

從最簡單的做起

從不需要換什么東西的方法做起。

比如改變樣品溶劑，

反沖色譜柱等等。

3

換東西

換保護(hù)柱，換色譜柱，

換流動(dòng)相(新配)，

一步一步的換，

有助于找到問題的根本。

4

總結(jié)經(jīng)驗(yàn)

問題解決后，

想想需不需要采取什么措施，

防止類似問題的發(fā)生，

比如說常換流動(dòng)相啦，

及時(shí)更換密封圈啦，

記錄進(jìn)樣次數(shù)

了解什么時(shí)候色譜柱就不行了啊之類的。

希望以上信息能夠讓各位同學(xué)

在碰到峰形不好的問題時(shí)，

有一些思路，

不至于手足無措。

也歡迎大家留言補(bǔ)充

上面沒有提到的可能影響峰形的可能。

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