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  大愛鹿晗510 2018-04-16 00:00:00

  植物組織培養(yǎng)（Plant tissue culture）技術(shù)，是20世紀興起的一項植物細胞工程技術(shù)。它的基本內(nèi)容是：從外界植物體上取下任意的一個到幾個細胞或者一塊組織在全人工的離體條件下進行培養(yǎng)，經(jīng)過細胞或者組織的分裂、分化及幾何增殖達到植株的形態(tài)重建和快速繁殖的目的。 植物細胞具有全能性，即任何一個植物細胞都具有形成該植物體的能力。換言之，任何一個高度分化的細胞都具有回復到原始未分化細胞的能力，并且能分化為其他形式的高分化細胞。`這種“全能性”就是植物組織培養(yǎng)的理論基礎。我們依據(jù)植物細胞的這種特性，可以任意的使植物體的任何一個高分化的細胞經(jīng)過脫分化培（Dedifferentiationculture），形成原始干細胞團，或者稱之為愈傷組織（Cellus），將得到的愈傷組織經(jīng)過一定的的培養(yǎng)途徑，這種低分化細胞開始分化，逐步形成各種高分化細胞，這個過程稱為植物細胞的再分化（Redifferentiation）。再分化后的植物細胞即可形成宏觀形態(tài)上的芽和根，至此該種植物的離體繁殖系宣告建成。 將得到的該種植物的離體繁殖系經(jīng)過反復的分離和微扦插，即可達到幾何數(shù)級的增殖，此過程就是所謂的快速微繁殖或者快速繁殖（Rapid propagation）。植物快速繁殖通常是在離體繁殖系建成之后進行，有時也可以將愈傷組織進行快速增殖，此時通常采用液體懸浮培養(yǎng)。若該種植物能形成球狀胚體（Embryois），則又常常把快速繁殖階段選定在球胚的增殖?？傊?，只要能達到快速繁殖的目的，用作快繁的階段可以隨意選擇。 植物組織培養(yǎng)的成功與否取決于外植體的制備、無菌操作和人工培養(yǎng)環(huán)境。外植體的制備是能否建成離體繁殖系要過的diyi關(guān)。所謂的外植體是指將外界生長的植物的細胞和組織經(jīng)過一系列的無菌處理形成的有活性的無菌組織和細胞。習慣上我們經(jīng)常使用化學藥劑處理，例如、次氯酸鹽或者抗生素等。將從母株上取下的組織進行一定的剝離和分割，經(jīng)過流水沖洗數(shù)分鐘，再浸入適宜濃度的化學藥劑中一段時間，Z后經(jīng)無菌水沖洗并適當分割即成外植體。制備外植體的原則是無菌和有活性，無菌是外植體植被的要求，有雜菌帶入培養(yǎng)基會造成微生物污染，而阻滯甚至殺死外植體。有活性是外植體制備的前提，無活性的外植體的培養(yǎng)在植物組織培養(yǎng)中是無意義的。 無菌操作是貫穿于整個組織培養(yǎng)過程的一門關(guān)鍵技術(shù)，甚至可以說組織培養(yǎng)的前提就是無菌。事實上外植體的制備過程就是無菌處理過程，而其后的一系列操作都是在無菌環(huán)境下進行的，實驗室中經(jīng)常使用的無菌操作設備是超凈工作臺。超凈工作臺通常借助紫外光結(jié)合逆壓滲透的超濾風技術(shù)來滿足無菌要求。無菌操作者的操作手法和習慣也是無菌操作成功與否的關(guān)鍵，通常進行無菌操作的實驗人員也要經(jīng)過嚴密的無菌操作訓練并建立嚴格的“無菌概念”。 能否把植物組織培養(yǎng)做到滿意的人工調(diào)控，關(guān)鍵在于人工培養(yǎng)環(huán)境。人工培養(yǎng)環(huán)境是整個組織培養(yǎng)的難點和ZD，也是近百年來植物生理學家一直探討和研究的重要話題。人工培養(yǎng)環(huán)境包括能量的來源——光照，新陳代謝的保證——溫度，氣-水平衡——濕度，生物原料的來源——培養(yǎng)基。這與植物的自然環(huán)境是類似的，即光照、溫濕度和土壤。光照、溫度的選定通常依據(jù)所培養(yǎng)植物的生態(tài)習性，習慣上采用暗培養(yǎng)與光照培養(yǎng)(8h/d，3000lx)的結(jié)合，溫度在25-28度。濕度在組織培養(yǎng)中不需特意的調(diào)整，因為培養(yǎng)容器中的濕度幾乎達到.如此說來，人工培養(yǎng)環(huán)境的重難點自然而然地落在了培養(yǎng)基上。

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