如何減少ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素?

　　ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的原理在我們平時看來覺得很簡單，無非就是固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和閉。然而，即使是平常的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能影響整個實(shí)驗(yàn)。在做完實(shí)驗(yàn)時，我們是否能獲得有用的信息，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會直接關(guān)系到結(jié)果的判斷。那么怎樣才能降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的背景因素呢，我們一起來了解。

　　洗滌很重要

　　洗滌步驟看似很無聊，其實(shí)很重要，因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

　　封閉更關(guān)鍵

　　封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長封閉時間。如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時起作用，因?yàn)楹苋菀妆幌吹?。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。蛋白封閉液則有所不同。它們與開放位點(diǎn)結(jié)合并封閉，同時穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。

　　抗體濃度須優(yōu)化

　　如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體結(jié)合會增加背景。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過多的一抗或二抗。

　　檢測試劑要適量

　　另一點(diǎn)也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液。

　　相信在注意這些細(xì)節(jié)后，我們就可以降低ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中背景因素，才可以獲得我們想要的結(jié)果信息。

　　本生(天津)健康科技有限公司由具有行業(yè)背景和豐富市場經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人士組成，于為生命科學(xué)研究領(lǐng)域提供產(chǎn)品，為廣大科研工作者提供服務(wù)。  既能滿足研發(fā)類客戶對產(chǎn)品種類、包裝的特殊要求，也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試、中試到規(guī)?；a(chǎn)各個階段的綜合需求。

　　產(chǎn)品涵蓋有熒光定量PCR耗材(八聯(lián)管,單管,96孔板,384孔板,封板膜,輔助器等)，ELISA試劑盒，移液器吸嘴，離心管，凍存管，培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，培養(yǎng)基，抗體，血清，色譜耗材，針頭過濾器及實(shí)驗(yàn)室常用耗材。  品種類超過萬種，廣泛應(yīng)用于科研院校、ZX實(shí)驗(yàn)室、分子生物學(xué)等科研領(lǐng)域。

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　　怎樣減少ELISA檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)中的誤差?

　　ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。ELISA檢測試劑盒試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。但是您知道嗎?如果您在實(shí)驗(yàn)過程中犯了以下幾個小錯誤的話也會出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)誤差的哦!下面跟隨天津本生小編來看看下：

　　1.做實(shí)驗(yàn)時少說話，防止唾液掉進(jìn)酶標(biāo)條中。

　　2.加入一抗二抗需要放入37°。

　　3.如果同時做多個板子，多個板子別羅一起;盡量少用排槍。

　　4.加樣時，由低濃度向高濃度加，這樣減少跳孔的幾率。

　　5.勤換槍頭。

　　注：

　　一、移液器的使用，加樣(抗體)等需要準(zhǔn)確定量的試劑時不使用排槍，經(jīng)驗(yàn)證明排槍很不準(zhǔn)確，極易跳孔，不要圖便宜買低檔的tips 因?yàn)镋LISA不但會放大被檢測的目的蛋白，也會放大非特異結(jié)合的雜質(zhì)蛋白。

　　二、倍比稀釋樣品時，稀釋倍數(shù)要小于10。

　　三、所有的裝跟ELISA檢測試劑盒相關(guān)試劑的容器，玻璃制品的要干烤過或者使用一次性的樹脂容器。

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