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  w981552816 2017-11-04 00:00:00

  氨基酸離鑒定——紙層析 ，實(shí)驗(yàn)?zāi)?掌握氨基酸紙層析原理，析待 測(cè)品氨基酸. 二，實(shí)驗(yàn)原理 紙層析濾紙惰性支持物配層析.濾紙纖維羥基具親水性，吸附層水作固定相，機(jī)溶劑流相.機(jī)相流經(jīng)固定相，物質(zhì)兩相間斷配離. 溶質(zhì)濾紙移速度用Rf值表示: Rf=原點(diǎn)層析斑點(diǎn)距離/原點(diǎn)溶劑前沿距離 定條件某種物質(zhì)Rf值數(shù).Rf值與物質(zhì)結(jié)構(gòu)，性質(zhì)，溶劑系統(tǒng)，層析濾紙質(zhì)量層析溫度等素關(guān).本實(shí)驗(yàn)利用紙層析離氨基酸. 三，實(shí)驗(yàn)器材 (1)燒杯(5000mL):1/組 (2)微量注射器(100 L):1/ 組. (3)噴霧器:公用. (4)培養(yǎng)皿:1/組. (5)層析濾紙(22cm，寬14cm新華號(hào)濾紙):1張/組. (6)直尺，鉛筆:自備. (7)電吹風(fēng):1/組. (8)托盤，針，白線:1套/組. (9)手套:1雙/組. (10)塑料薄膜:公用. (11)燒杯:50mL，1/組. 四，實(shí)驗(yàn)試劑 (1)擴(kuò)展劑:4體積丁醇1體積冰醋酸放入液漏斗，與5體積水混合，充振蕩，靜置層，棄層水層. (2)氨基酸溶液:0.5%已知氨基酸溶液3種(賴氨酸，苯丙氨酸，纈氨酸)，0.5%待測(cè)氨基酸液1種. (3)顯色劑:0.1%水合茚三酮丁醇溶液. 實(shí)驗(yàn)試劑 五，實(shí)驗(yàn)操作 檢查培養(yǎng)皿否干燥，潔凈;若否，其洗凈并置于干燥箱內(nèi)120℃烘干. (1)平衡:剪塊塑料薄膜鋪?zhàn)烂妫瑢游龈谆驘糜谒芰媳∧?，再盛約20mL展層溶液燒杯置于倒置層析缸或燒杯，用塑料薄膜密封起，平衡20min. (2)規(guī)劃:帶手套，取寬約14cm，高約22cm層析濾紙張.紙端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃條平行于底邊直線A，直線做4記號(hào)，記號(hào)間間隔2cm，原點(diǎn)位置.另距左邊緣1cm處畫條平行于左邊緣直線B，B線A，B兩線交點(diǎn)原點(diǎn)標(biāo)明刻度(厘米單位)，參見左圖. (3)點(diǎn):用微量注射器別取10mL左右氨基酸品(每取前都要用蒸餾水洗滌微量注射器，免交叉污染)，點(diǎn)四位置.擠滴點(diǎn)，同位置需點(diǎn)2～3，2～3mL/，每點(diǎn)完點(diǎn)，立刻用電吹風(fēng)熱風(fēng)吹干再點(diǎn)，保證每點(diǎn)紙擴(kuò)散直徑超3mm.每須點(diǎn)4，其3已知，1待測(cè)品. (4)層析:用針，線濾紙縫筒狀，紙兩側(cè) 邊緣能接觸且要保持平行，參見圖3-3.向培養(yǎng)皿加入擴(kuò)展劑，使其液面高度達(dá)1cm左右，點(diǎn)濾紙筒直立于培養(yǎng)皿(點(diǎn)端，擴(kuò)展劑液面A線約1cm)，罩燒杯，仍用塑料薄膜密封.擴(kuò)展劑升A線始計(jì)，每隔定間測(cè)定擴(kuò)展劑升高度，填入表3-1.升15～18cm，取濾紙，剪斷連線，立即用鉛筆描溶劑前沿線，迅速用電吹風(fēng)熱風(fēng)吹干. (5)顯色:用噴霧器通風(fēng)廚向?yàn)V紙均勻噴0.1%茚三酮丁醇溶液，立即用熱風(fēng)吹干，即顯各層析斑點(diǎn)，參見左圖. (6)計(jì)算各種氨基酸Rf值，并判斷混合品都哪些氨基酸，各自實(shí)驗(yàn)結(jié)貼實(shí)驗(yàn)報(bào)告，見表3-2. (7)層析間橫坐標(biāo)，擴(kuò)展劑升高度縱坐標(biāo)畫圖，求擴(kuò)展劑升18cm所需要間. (8)微量注射器內(nèi)外用蒸餾水清洗干凈，倒掉用展層液平衡液，培養(yǎng)皿洗凈，整理桌面儀器試劑

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