酶聯(lián)免疫或化學(xué)發(fā)光免疫分析的對(duì)象包括有酶、蛋白、抗體、多肽、抗原、核酸、糖、脂質(zhì)等物質(zhì)，其中酶、蛋白、抗體或多肽均屬于蛋白類分子，需要使用蛋白緩沖液來保護(hù)蛋白。

1. 生物緩沖液，包括有Tris-HCl緩沖液、Tricine緩沖液、PB磷酸緩沖液、CB碳酸緩沖液等，其中Tris的緩沖體系應(yīng)用較為普遍，緩沖能力比較強(qiáng)，同時(shí)對(duì)蛋白有良好的溶解性，為蛋白提供合適的pH環(huán)境。

2. 鹽類，主要是氯化鈉，調(diào)節(jié)蛋白緩沖液的離子強(qiáng)度（類似鹽濃度）。通常配制時(shí)，需較少的離子強(qiáng)度防止蛋白沉淀；但需要將蛋白脫離出來時(shí)，應(yīng)增加離子強(qiáng)度，否則蛋白難以沉淀脫離完全。對(duì)于有些蛋白，兩性離子的鹽類有助于蛋白結(jié)合。

3. 表面活性劑：吐溫20、Triton X-100等，改變緩沖溶液表面張力，增加試劑相容性。

4. 有時(shí)還需要添加糖類如蔗糖、海藻糖等，惰性蛋白如Casein（酪蛋白），防腐劑如疊氮鈉、卡松（異噻唑啉酮混合物）等。

蛋白緩沖液選擇優(yōu)化

雖然蛋白緩沖液的基本組成類似，不過沒有通用的緩沖液，不同的系統(tǒng)必須分別優(yōu)化。不同的蛋白其合適的pH值、親水性、溶解性、穩(wěn)定性都有差異。另外，蛋白在緩沖液中越不穩(wěn)定，蛋白結(jié)合力越強(qiáng)。當(dāng)緩沖液pH與蛋白等電點(diǎn)相同時(shí)，蛋白最不穩(wěn)定，容易聚集沉淀。

蛋白緩沖液的穩(wěn)定作用

蛋白緩沖液中添加有糖，對(duì)包被蛋白的穩(wěn)定性有重要作用，減緩蛋白老化作用，并增加親水性；添加的表面活性劑也是增加蛋白的親水性，惰性蛋白也具有保護(hù)作用。在蛋白結(jié)合包被步驟中，需用沉淀劑（醇）降低蛋白的穩(wěn)定性，也可潤濕膜，減少膜帶有的靜電。

這里的蛋白在緩沖液中的穩(wěn)定與不穩(wěn)定是特定的，改變緩沖液的部分條件以優(yōu)化不同的蛋白處理步驟，前提都是不能使蛋白變性或失活。德晟是生物緩沖劑廠家，生產(chǎn)有Tris、Bicine、MOPS等多種緩沖劑。