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問(wèn)答社區(qū)

氣相色譜中分離度為什么隨色譜柱溫度升高而降低

時(shí)尚帽子批發(fā)8 2017-01-23 03:03:24 709  瀏覽
  •  

參與評(píng)論

全部評(píng)論(2條)

  • 夢(mèng)璃i 2017-02-05 00:00:00
    一般來(lái)說(shuō),溫度越高,分子運(yùn)動(dòng)越快,各種物質(zhì)和固定液之間的分配系數(shù)越接近,所以分離越困難

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    評(píng)論

  • 墜天使喬 2017-01-24 00:00:00
    溫度升高會(huì)降低色譜柱的分離效果

    贊(16)

    回復(fù)(0)

    評(píng)論

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ACE C18-PFP色譜柱介紹Ⅱ- 改善分離度

具有獨(dú)特選擇性的C18 鍵合相:
1.有保證的可重現(xiàn)性
2.的鍵合相穩(wěn)定性
3.疏水和五氟苯基“混合模式”的相互作用


改善色譜分離度
色譜分離的目標(biāo)是在Z短的時(shí)間內(nèi)獲得目標(biāo)組分的足夠分離度(Rs)。

1.5的分離度可以實(shí)現(xiàn)基線分離,然而對(duì)于可以在實(shí)驗(yàn)室之間易于轉(zhuǎn)換的耐用、可重法而言,理想的分離度是1.8-2.0。
分離度方程告訴我們什么變量可以影響分離度:


Rs = 目標(biāo)峰之間的分離度
N = 柱效- 由理論塔板數(shù)測(cè)定
α?= 選擇性- 兩峰的保留值比率(k值)
k =保留因子- 洗脫峰所需的柱體積數(shù)

增加分離度Rs可以通過(guò)增加N、α或k來(lái)實(shí)現(xiàn)。

然而,如圖1所示,可以看出,增加N或k以改善Rs的回報(bào)率快速下降。

例如,Rs僅隨著N平方根的增加而增加。

可以通過(guò)增加柱長(zhǎng)或降低柱填充材料的粒徑或兩者的某種組合來(lái)增加N。


無(wú)論哪種方式,系統(tǒng)背壓隨著N的增加而增加,因此通過(guò)增加N實(shí)現(xiàn)令人滿意的分離,其“成本”可能是極高的壓力。
同樣,增加保留值(k值)將會(huì)增加Rs,但回報(bào)率也快速下降。

將k增加至超過(guò)10通常是Rs與分析時(shí)間之間的不利權(quán)衡,因?yàn)橹挥蠷s的邊際收益隨著保留時(shí)間的增加而實(shí)現(xiàn)。

該效應(yīng)的圖形表示參見下述圖1。

圖1 N、α和k對(duì)分離度(Rs)的影響
對(duì)于典型的分離,其中:N = 10,000, k = 4, α= 1.1

增加N、α或k可以提高分離度(Rs)。

然而,從這些圖中可以看出,N或k的提高都會(huì)迅速降低回報(bào)率。
另一方面,提高選擇性(α)則沒有這個(gè)問(wèn)題,因此其成為開發(fā)分離方法時(shí)的Z佳優(yōu)化變量。


增加α可以增加Rs,但不同于N和k,不會(huì)受回報(bào)率下降的約束。

α的變化對(duì)壓力沒有影響,對(duì)分離時(shí)間的影響也是微乎其微的(參見圖2)。

因此,在開發(fā)分離方法時(shí),α是Z重要的變數(shù)。

優(yōu)化α可以使您在所有目標(biāo)峰之間達(dá)到滿意的分離度,同時(shí)保持系統(tǒng)背壓和分離時(shí)間在可接受范圍內(nèi)。


改善色譜分離度- 選擇性或柱效?
選擇性(α)由流動(dòng)相、溫度和固定相化學(xué)物質(zhì)控制。大多數(shù)方法開發(fā)策略將探索所有這些色譜變量。
如果使用“標(biāo)準(zhǔn)”3μm C18相沒有達(dá)到足夠的分離度,推薦優(yōu)化分離的色譜選擇性而不是分離柱效,如下述實(shí)例所示。
通過(guò)簡(jiǎn)單地將固定相化學(xué)物質(zhì)(即色譜柱)改變?yōu)榫哂刑娲V選擇性的固定相化學(xué)物質(zhì),易于在標(biāo)準(zhǔn)HPLC系統(tǒng)上獲得所需分離度,而無(wú)需昂貴的UHPLC儀器。

另外,也可以避免復(fù)雜的流動(dòng)相組分、升高的溫度和侵蝕性pH條件。


圖2利用選擇性實(shí)現(xiàn)快速、高分離度的分離


樣品:1)對(duì)乙酰氨基酚2)氫氯噻嗪3)甲基苯基亞砜4)甲基苯基砜5)阿司匹林6)非那西丁7)1,3-二硝基苯
8)1,2,4-三甲氧基苯9)苯甲酸乙酯10)尼美舒利11)布洛芬12)吲哚美辛13)甲芬那酸
色譜柱尺寸:50 x 2.1 mm 流速:0.60 ml/min 溫度:40°C 檢測(cè):UV, 254 nm 流動(dòng)相:A = 5 mM甲酸(溶于水中)以及B = 5 mM(溶于甲醇中),梯度= 在5分鐘內(nèi)3- B
比較數(shù)據(jù)不代表所有應(yīng)用。


在保持C18鍵合相的同時(shí),將粒徑從3μm減小至2μm以下,并不能顯著改善分離效果,另外也會(huì)導(dǎo)致壓力明顯增加。
ACE C18-PFP色譜柱為3個(gè)關(guān)鍵對(duì)提供了更佳的選擇性(α),因此與2μm以下的C18色譜柱相比,其可以提供的分離效果,即使2μm以下的色譜柱可以提供更高的柱效。
與使用具有高塔板數(shù)和高壓的色譜柱嘗試進(jìn)行峰分離所獲得的結(jié)果相比,利用選擇性的能力可以獲得更佳的分離效果。


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