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問答社區(qū)

影響質(zhì)粒DNA提取的因素有哪些

寶貝計(jì)劃sunny 2017-11-21 21:40:35 809  瀏覽
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參與評(píng)論

全部評(píng)論(1條)

  • go小飛454 2017-11-22 12:41:26
    這個(gè)要看是用試劑盒提還是手提。 試劑盒提取的話就很方便很好操作,試劑、吸附柱什么都是商品級(jí)的,問題都不大,主要是看你培養(yǎng)的菌質(zhì)量如何,如果培養(yǎng)菌是挑取的是假陽性或者是培養(yǎng)基抗性出問題,就會(huì)因?yàn)橘|(zhì)粒沒有或者量過少而檢測(cè)不出來,其次的話就是Buffer要加的是無水乙醇,不能加錯(cuò),其他操作按說明書就沒有問題。 手提的話需要質(zhì)粒提取因素就很多了,這里有總結(jié)的很好的你可以看一下: 1、手提中主要是試劑對(duì)質(zhì)粒DNA提取的影響較大,其中溶液Ⅰ,加入的葡萄糖可以使懸浮后的大腸桿菌不會(huì)快速沉積到管子底部。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價(jià)金屬離子的螯合劑,可以YZDNase的活性和微生物生長(zhǎng)。此步驟菌體一定要懸浮均勻,不能有結(jié)塊,否則會(huì)降低抽提得率。 2、溶液II中,NaOH是Z佳的溶解細(xì)胞的試劑,不管是大腸桿菌還是哺乳動(dòng)物細(xì)胞,碰到了堿后幾乎在瞬間就會(huì)溶解,這是由于細(xì)胞膜發(fā)生了從bilaye(雙層膜)結(jié)構(gòu)向micelle(微囊)結(jié)構(gòu)的相變化所導(dǎo)致。SDS也呈堿性,但如果只用SDS,達(dá)不到徹底溶解細(xì)胞的作用,加入SDS主要為下一步做鋪墊。這一步操作要注意兩點(diǎn):diyi,時(shí)間不能過長(zhǎng),因?yàn)樵谶@樣的堿性條件下基因組DNA片斷會(huì)慢慢斷裂;第二,必須溫柔混合,不然基因組DNA也會(huì)斷裂。 3、對(duì)于溶液Ⅲ,SDS在高鹽濃度下發(fā)生沉淀,同時(shí)SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合,平均兩個(gè)氨基酸上結(jié)合一個(gè)SDS分子,所以沉淀也將溶液中的大部分蛋白質(zhì)沉淀下來。溶液中的K+置換了SDS中的Na+而形成了不溶性的PDS,高濃度的鹽使沉淀更完全。同時(shí),由于基因組DNA很長(zhǎng),容易被PDS共沉淀。2M的醋酸可以中和NaOH,因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間的堿性條件會(huì)打斷DNA。基因組DNA一旦發(fā)生斷裂,小于100kb的片斷,就不容易與PDS共沉淀。所以堿處理的時(shí)間要短,而且不得激烈振蕩,否則Z后得到的質(zhì)粒上會(huì)有大量的基因組DNA污染。這一步操作混合均勻后在冰上放置,可以使PDS沉淀更充分。

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影響擊穿電壓的因素有哪些?

影響擊穿電壓的因素:

(1)水分,水分是影響擊穿電壓最靈敏的贓物。因?yàn)樗且环N極性分子,在電場(chǎng)力作用下,很容易被拉長(zhǎng),并沿著電場(chǎng)方向排列,從而在兩極間形成導(dǎo)電“小橋”,使擊穿電壓劇降。另外,擊穿電壓的大小不僅取決于含水量,還取決于水在油中所處的狀態(tài),通常乳化水對(duì)擊穿電壓影響很大,溶解水次之。

(2)油中含有微量的氣泡,也會(huì)使擊穿電壓電壓明顯下降,因?yàn)橛椭写嬖跉馀?,則在較低電壓下氣泡便可游離,并在電場(chǎng)力作用下,在電極間形成導(dǎo)電“小橋”,使油被擊穿,降低了油的擊穿電壓。

(3)溫度對(duì)擊穿電壓的影響視油中雜質(zhì)和水分的有無而不同。不含雜質(zhì),并經(jīng)干燥無水分的油,一般溫度對(duì)擊穿電壓影響不大。但當(dāng)溫度升高到一定溫度時(shí),油分子本身因裂解而產(chǎn)生電離,且隨著溫度的升高,油品的粘度顯著減小,電離產(chǎn)生的電子和離子由于阻力變小而運(yùn)行速度加快,導(dǎo)致油品被擊穿,擊穿電壓顯著下降。

如果油中含有雜質(zhì)和水分時(shí),則在同一溫度下,其擊穿電壓比無雜質(zhì)。水分的油的擊穿電壓要低,溫度較低時(shí),油中水多呈懸浮狀,其擊穿電壓值較小,隨著溫度的升高,乳狀水逐漸變?yōu)槿芙鉅?,油品的擊穿電壓隨之上升。但如果溫度升高到一定程度,則油中水分發(fā)生蒸發(fā),在油中造成氣泡的數(shù)目便會(huì)增加,而且由于溫度升高,粘度降低,使水分、雜質(zhì)和氣泡在油中形成導(dǎo)電“小橋”,使油的擊穿電壓又很快地下降。尤其是油中雜質(zhì)和水分都存在時(shí),這種導(dǎo)電“小橋”更易形成,擊穿電壓下降更明顯。

(4)當(dāng)油中既含有游離碳,又含有水分時(shí),油的擊穿電壓隨碳微粒量的增加而下降。

(5)油老化后生成的酸等產(chǎn)物,是使水保持乳化狀態(tài)的不利因素,因而會(huì)使油的擊穿電壓下降;而干燥不含水分的油,酸等老化產(chǎn)物對(duì)擊穿電壓影響不明顯,但確能使介質(zhì)損耗因數(shù)急劇增加。這時(shí),測(cè)定油的擊穿電壓不如測(cè)定介質(zhì)損耗因數(shù)更能判斷油的老化程度的原因所在。


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影響差熱分析的因素有哪些?

差熱分析雖然廣泛應(yīng)用于熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)的研究,由于在文獻(xiàn)上對(duì)同一物質(zhì)往往給出不一致的數(shù)據(jù),使人們對(duì)差熱分析的應(yīng)用有點(diǎn)縮手不前。根據(jù)國(guó)際熱分析標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)的意見,認(rèn)為所發(fā)表數(shù)據(jù)的不一致性大部分是由于實(shí)驗(yàn)條件不相同引起的。因此,在進(jìn)行熱分析時(shí)必須嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件和研究實(shí)驗(yàn)條件對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)的影響,并且在發(fā)表數(shù)據(jù)時(shí)應(yīng)明確測(cè)定時(shí)所采用的實(shí)驗(yàn)條件。影響差熱曲線的因素比較多,其主要的影響因素大致是下列幾個(gè)方面:

①儀器方面的因素:包括加熱爐的形狀和尺寸、坩鍋大小、熱電偶位置等。

②實(shí)驗(yàn)條件:升溫速率、氣氛等。

③試樣的影響:試樣用量、粒度等。

因此,在差熱分析時(shí)應(yīng)全面考慮各方面的影響因素和實(shí)驗(yàn)條件才能獲得好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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