二極管陣列檢測(cè)器，英文表述為PDA(photo-diode array)、PDAD(photo-diode array detector)或DAD (Diode array detector)，是上個(gè)世紀(jì)八十年代發(fā)展起來(lái)一種用于液相色譜檢測(cè)的光學(xué)多通道檢測(cè)器。

下面就二極管陣列檢測(cè)器的一些基礎(chǔ)知識(shí)進(jìn)行匯總，借此可以對(duì)該類(lèi)型檢測(cè)器有個(gè)基本的了解：

1.光源

光源 ---提供紫外可見(jiàn)波段的波長(zhǎng)，可以利用氘燈（D2）作為光源提供紫外可見(jiàn)波段的光源（190~800nm）也有波段范圍為190~640nm一說(shuō)；也可以利用氘燈（D2）和鎢燈（W）聯(lián)合作為光源，氘燈提供紫外段光源（190~380nm），鎢燈提供可見(jiàn)波段的光源（380~800nm）。

圖1 2998 PDA二極管陣列檢測(cè)器交互顯示圖

2.二極管陣列 

二極管陣列 ---工作原理如下：當(dāng)光照射到二極管陣列上時(shí)，受到光照的光敏二極管便產(chǎn)生光電流，光電流使與二極管并聯(lián)的電容器放電。光越強(qiáng)，產(chǎn)生的光電流越大，電容器放電越快，放電后的電壓就越低。可以通過(guò)測(cè)定再充電電流或再充電的電荷值以代表待測(cè)的光強(qiáng)值。目前在售的二極管陣列檢測(cè)器多是512個(gè)或者1024個(gè)二極管陣列。

3.三維譜圖 

三維譜圖 ---一次測(cè)試可以得到待測(cè)組分的光譜、色譜的三維譜圖，為組分的定性、定量分析判定提供了更多可以參考的依據(jù)。

4.檢測(cè)與定量 

檢測(cè)與定量 ---被測(cè)組分對(duì)紫外光或可見(jiàn)光存在吸收（檢測(cè)基礎(chǔ)），且吸收強(qiáng)度與組分濃度成正比，即朗伯比爾定律（定量基礎(chǔ)）。二極管陣列檢測(cè)器的一般定量影響參數(shù)如圖2描述：

圖2 朗伯比爾定律

5.光路系統(tǒng) 

光路系統(tǒng) ---二極管陣列檢測(cè)器使光源發(fā)出的光聚集后先通過(guò)流通池再通過(guò)光柵分光進(jìn)行檢測(cè)（白光通過(guò)流通池然后由光柵將復(fù)合光分為各個(gè)波長(zhǎng)的單色光），這與紫外檢測(cè)器正好相反，也就是所謂的反轉(zhuǎn)光路（如圖3所示）。

圖3 光路系統(tǒng)

6.峰內(nèi)點(diǎn)數(shù) 

峰內(nèi)點(diǎn)數(shù) ---一般來(lái)說(shuō)，分析物峰內(nèi)30個(gè)點(diǎn)可以滿(mǎn)足數(shù)量測(cè)定要求。峰內(nèi)點(diǎn)數(shù)過(guò)少，峰形不足以被正確的描述；峰內(nèi)點(diǎn)數(shù)太多，占據(jù)內(nèi)存空間會(huì)加大，造成系統(tǒng)負(fù)擔(dān)。

圖4 峰內(nèi)點(diǎn)數(shù)

在方法編輯中，選擇合適的采樣率十分重要。此外，采樣率也會(huì)對(duì)基線(xiàn)造成影響，具體見(jiàn)下圖。

圖5 采樣頻率變化對(duì)于基線(xiàn)的影響

7.二極管陣列檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn) 

二極管陣列檢測(cè)器的 優(yōu)點(diǎn) ---①全波長(zhǎng)測(cè)定（190~800nm）；②一次分析確定合適的波長(zhǎng)（光譜掃描可確定在當(dāng)前檢測(cè)條件下的Z佳吸收波長(zhǎng)）；③檢測(cè)多種波長(zhǎng)（多通道模式）；④峰純度分析（取光譜圖上不同處的吸光度理論比值與實(shí)際比值對(duì)比驗(yàn)證峰純度）；⑤峰識(shí)別（取點(diǎn)對(duì)比光譜，光譜圖是否一致可作為組分另一種定性依據(jù)）。

8.二極管陣列檢測(cè)器的缺點(diǎn) 

二極管陣列檢測(cè)器的 缺點(diǎn) ---①造價(jià)昂貴；②針對(duì)特定物質(zhì)的檢測(cè)靈敏度和響應(yīng)值不如紫外檢測(cè)器，相差一到兩個(gè)數(shù)量級(jí)。

二極管陣列檢測(cè)器，作為一種液相檢測(cè)器，在方法開(kāi)發(fā)與建立的過(guò)程中為使用者提供了更多的便利。此外在譜圖的解析過(guò)程中，光譜的引入也在一定程度上彌補(bǔ)了色譜定性能力不足的缺陷。隨著以后技術(shù)的愈加成熟，相信二極管陣列檢測(cè)器在液相色譜檢測(cè)中能發(fā)揮更重要的作用。

2019-12-12 15:50:20  來(lái)源: 檢測(cè)家

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細(xì)胞離心是常見(jiàn)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中不可缺少的一步，它不僅可以使掛壁的樣品完全沉降到管底，也可以幫助確認(rèn)細(xì)胞濃度，用于后續(xù)的如原代細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞傳代培養(yǎng)、單細(xì)胞測(cè)序等相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

對(duì)于不同的細(xì)胞/細(xì)胞器分離，其離心分離法各不相同，適合的場(chǎng)合也不盡相同。那么常見(jiàn)的細(xì)胞離心分離方法都有哪些呢？

01差速離心法

差速離心法是利用在離心力場(chǎng)中不同的粒子沉降系數(shù)的差別，通過(guò)逐漸提高離心力，使非均勻混合液內(nèi)的不同大小、形狀的粒子分步沉淀的離心方法。主要用于實(shí)驗(yàn)室樣品分離，例如分離細(xì)胞器線(xiàn)粒體、葉綠體、蛋白質(zhì)和病毒等。

 分離步驟 第/一步：設(shè)置較低的離心速度（相對(duì)離心力），先讓較大的顆粒沉降到管底，而混合液中小的顆粒仍然懸浮在上清液中。

第二步：收集沉淀，設(shè)置較高的離心速度（相對(duì)離心力）離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，后續(xù)依此類(lèi)推，最終可分離不同大小顆粒的。

圖一.差速離心示意圖

 02密度梯度離心法

密度梯度離心法又稱(chēng)為區(qū)帶離心法，可分為速率區(qū)帶離心法和等密度離心法。

 1.速率區(qū)帶離心法 

主要用于分離密度相近而大小不等的細(xì)胞或細(xì)胞器。離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，樣品粒子的密度必須大于梯度液柱中任一點(diǎn)的密度，被分離的粒子在梯度液中沉降速度不同，離心時(shí)，混合樣品中不同的組分將在梯度液柱的不同位置分別形成各自的區(qū)帶，達(dá)到彼此分離的目的。

圖二.速率區(qū)帶離心示意圖

 2.等密度離心法 

適用于分離密度不等的顆粒。細(xì)胞或細(xì)胞器在連續(xù)梯度的介質(zhì)中經(jīng)足夠大離心力和足夠長(zhǎng)時(shí)間則沉降或漂浮到與自身密度相等的介質(zhì)處，并停留在那里達(dá)到平衡，從而將不同密度的細(xì)胞或細(xì)胞器分離。常用介質(zhì)有Percoll，而CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。

圖三.密度梯度離心示意圖

瑞沃德M1416R高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)

瑞沃德M1416R高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)，不僅可以應(yīng)用在細(xì)胞的密度梯度離心，還可應(yīng)用在細(xì)胞沉淀，細(xì)胞的懸浮純化；病毒的沉淀及PEG沉淀，病毒的密度梯度離心；蛋白質(zhì)、核酸分離；生物制品、化學(xué)高分子制品、納米材料純化處理；臨床的血液、體液、排泄物等的分離。應(yīng)用廣泛，性能卓越。

• 轉(zhuǎn)速可達(dá)30，000 X g，在較高轉(zhuǎn)速也可使樣品穩(wěn)定離心

• 9/10升降速可調(diào)節(jié)，有利于密度梯度離心

• 多種轉(zhuǎn)子可選，可實(shí)現(xiàn)單管2mL-400mL的離心需求

• 自鎖轉(zhuǎn)子搭配快鎖蓋子，實(shí)現(xiàn)高效轉(zhuǎn)自切換及離心

• 搭配動(dòng)平衡實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，保證樣本安全

  
  

  
  

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