熒光共聚焦和光片活體鈣離子成像

球狀體是易用、高性價(jià)比的3D細(xì)胞培養(yǎng)物，可用于基礎(chǔ)和應(yīng)用研究。它們可以彌補(bǔ)2D和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的差距，并用于高通量篩選。然而，很難通過(guò)顯微鏡對(duì)這些圓形、非粘連細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行活細(xì)胞觀察急性藥物反應(yīng)，這便妨礙了對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間信號(hào)快速變化的研究。為解決這一問(wèn)題，我們使用透明和軟明膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)穩(wěn)定微灌注腔內(nèi)的球狀體。

通過(guò)這種方法，我們可以使用倒置TCS SP8 DLS共聚焦顯微鏡在進(jìn)行急性灌注時(shí)對(duì)鈣離子變化進(jìn)行活細(xì)胞共聚焦顯微成像。使用促味劑或ATP刺激味覺(jué)/舌乳頭（BRAIN Biotech AG）永生化細(xì)胞球狀體。同心球狀體區(qū)域的反應(yīng)分析顯示，相比核心區(qū)域的細(xì)胞，邊緣位置的細(xì)胞顯示出更大、更快的瞬變。這些區(qū)域差異在使用光片顯微鏡開(kāi)展的類似實(shí)驗(yàn)中得到確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)采用TCS SP8 DLS完成，可以使我們?cè)诓粨p失時(shí)空分辨率的情況下，在大約100 μm的深度進(jìn)行成像。

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Molitor E., Nürnberg E., Ertongur-Fauth T., Scholz P., Riedel K., Hafner M., Rudolf R. & Cesetti T.:

Analysis of Calcium Signaling in Live Human Tongue Cell 3D-Cultures upon Tastant Perfusion

Cell Calcium 87 (May 2020): 102164, DOI: 10.1016/j.ceca.2020.102164. 

https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0143416020300063