光纖記錄實(shí)驗(yàn)操作較為簡便，能夠長時(shí)間穩(wěn)定的動(dòng)態(tài)檢測動(dòng)物的神經(jīng)信號(hào)，目前在神經(jīng)科學(xué)研究中應(yīng)用越發(fā)廣泛。但是在做光纖記錄實(shí)驗(yàn)中，有時(shí)會(huì)遇到采集不到熒光信號(hào)的情況，各位小伙伴是否也曾遇到過？今天，小沃帶大家梳理一遍采集不到信號(hào)的可能原因及實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)，助你實(shí)驗(yàn)更順暢！

01病毒

1.病毒是否存在反復(fù)凍融現(xiàn)象，反復(fù)凍融會(huì)降低病毒滴度，從而影響病毒轉(zhuǎn)染效率。因此光纖記錄實(shí)驗(yàn)中，病毒應(yīng)即拿即用，避免凍融。

2.病毒與目標(biāo)腦區(qū)神經(jīng)元特異性結(jié)合程度也會(huì)影響熒光信號(hào)。

02病毒注射

1.手術(shù)前定位：通過預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)腦區(qū)精準(zhǔn)定位（可通過臺(tái)盼藍(lán)注射定位）。在病毒注射前，我們可以先注射臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以達(dá)到練手的目的，提高后面實(shí)驗(yàn)的成功率。

腦區(qū)坐標(biāo)定位參考：調(diào)平時(shí)注意左右高度差小于0.03mm。

2.病毒注射：選擇較細(xì)直徑的玻璃電極可以減少注射損傷，對(duì)于淺層腦區(qū)注射，可減少病毒泄露。病毒注射后留針10min。

3.病毒注射檢測：切腦片看熒光表達(dá)。

熒光染色實(shí)驗(yàn)拍不出帶有熒光的細(xì)胞，可能原因是顯微鏡聚焦未在神經(jīng)細(xì)胞這一層上（如上圖出現(xiàn)模糊團(tuán)狀，可能會(huì)是細(xì)胞）、注射的腦區(qū)與病毒反應(yīng)的特異性神經(jīng)元數(shù)量太少、或是熒光淬滅掉了。

注意事項(xiàng)：

如果病毒沒注射成功，可能原因有手術(shù)中腦區(qū)定位有偏差導(dǎo)致病毒注射位置不對(duì)（目標(biāo)腦區(qū)很小的話會(huì)常存在這個(gè)問題）、病毒注射后順著腦室流走、病毒注射后未留針導(dǎo)致病毒順著注射孔被析出。

03陶瓷插針埋植位置

1.病毒注射與陶瓷插針植入可以在同一個(gè)手術(shù)進(jìn)行，避免二次手術(shù)對(duì)小鼠造成傷害；

2.選擇合適的夾持器，滿足不同深度及相對(duì)距離的植入手術(shù)；

3.定期查看定位儀操作臂與夾持器的固定情況，防止角度偏差。

病毒注射表達(dá)區(qū)域與陶瓷插針的植入位置需要保持接近，根據(jù)文獻(xiàn)中數(shù)據(jù)，超過100μm就會(huì)明顯影響信號(hào)強(qiáng)度。

HanQin et al., Neurophoton,2019

04耗材參數(shù)搭配

1.光纖記錄實(shí)驗(yàn)對(duì)環(huán)境光比較敏感，建議實(shí)驗(yàn)在光線相對(duì)穩(wěn)定、昏暗的環(huán)境下進(jìn)行。光纖記錄更適合選擇黑色陶瓷插針與黑色陶瓷套管，可避免環(huán)境光對(duì)熒光信號(hào)的影響；

2.較大數(shù)值孔徑的耗材有助于熒光信號(hào)的傳輸，所有的配件耗材保持相同的芯徑、NA數(shù)值更有助于實(shí)驗(yàn)記錄；

3.使用高強(qiáng)度的激光器對(duì)光纖進(jìn)行漂白，使得光纖等耗材的自發(fā)熒光降低，減少噪聲干擾。

光纖漂白器

05光纖記錄參數(shù)設(shè)置

1.首先檢查線路連接：包括光纖與機(jī)器連接的端口，光纖與小鼠連接的端口（并使用酒精擦拭光纖端口和鏡頭）。

2.調(diào)高曝光時(shí)間：Cmos相機(jī)拍攝時(shí)間增加，有助于采集到熒光信號(hào)。

注意事項(xiàng)：

1.若未記錄到信號(hào)，可適當(dāng)調(diào)高光源功率；

2.動(dòng)物腦區(qū)較大，病毒注射量可適量增加；

3.病毒注射后也可先不埋植插針，待2-3周后病毒表達(dá)，陶瓷插針連接光纖一起植入，邊植入插針邊檢測鈣信號(hào)。

瑞沃德三色多通道光纖記錄系統(tǒng)

產(chǎn)品特點(diǎn)：

• 最大支持9通道同時(shí)采集，滿足多只動(dòng)物或多個(gè)腦區(qū)位點(diǎn)同時(shí)實(shí)驗(yàn)；

• 高靈敏雙檢測器，獨(dú)立分時(shí)序采集，避免熒光串?dāng)_；

• 專業(yè)集成信號(hào)采集、數(shù)據(jù)分析、行為學(xué)采集分析模塊；

• 輸出信號(hào)參數(shù)自定義調(diào)節(jié)，可進(jìn)行多種觸發(fā)，實(shí)現(xiàn)刺激和記錄的閉環(huán)控制；

• 兼容光遺傳學(xué)，實(shí)現(xiàn)同一位點(diǎn)記錄和刺激。

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