全部評(píng)論(1條)
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- 竹雨3920 2011-01-30 00:00:00
- 大腸桿菌的檢測(cè)：大腸菌群測(cè)定的操作細(xì)則 大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。該菌主要來(lái)于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。 食品中大腸菌群數(shù)系以100mL(g)檢樣內(nèi)大腸菌群Z可能數(shù)(MPN)表示。 1 設(shè)備和材料 1.1 溫箱：36±1℃。 1.2 冰箱:0～4℃。 1.3 恒溫水浴 :44.5±0.5℃。 1.4 天平。 1.5 顯微鏡。1.6 均質(zhì)器或乳缽。 1.7 平皿:直徑為90mm。 1.8 試管。 1.9 吸管。 1.10 廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。 1.11 玻璃珠:直徑約5mm。 1.12 載玻片。 1.13 酒精燈。 1.14 試管架。 2 培養(yǎng)基和試劑 2.1 乳糖膽鹽發(fā)酵管:按GB 4789.28中4.9規(guī)定。 2.2 伊紅美藍(lán)瓊脂平板:按GB 4789.28中4.25規(guī)定。 2.3 乳糖發(fā)酵管:按GB 4789.28中4.10規(guī)定。 2.4 EC 肉湯:按GB 4789.28中4.11規(guī)定。 2.5 磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB 4789.28中3.22規(guī)定。 2.6 生理鹽水。 2.7 革蘭氏染色液:按GB 4789.28中2.2規(guī)定。 3.1 檢樣稀釋 3.1.1 以無(wú)菌操作將檢樣25mL(或g)放于有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)予置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣Z好用均質(zhì)器，以8 000-10 000 r/min的速度處理1min，做成1:10的均勻稀釋液。 3.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成1:100的稀釋液。 3.1.3 另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。 3.1.4 根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度，接種3管。 3.2 乳糖發(fā)酵試驗(yàn) 將待檢樣品接種于乳糖 膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL及1mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管，置36±1℃ 溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。 3.3 分離培養(yǎng) 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36±1℃ 溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18-24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。 3.4 證實(shí)試驗(yàn) 在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1-2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置 36±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽胞桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。 3.5 報(bào)告 根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。 4 糞大腸菌群(faecal coliform) 4.1 用接種環(huán)將所有產(chǎn)氣的乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)物(見(jiàn)3.2條)轉(zhuǎn)種于EC肉湯管內(nèi)，置44.5±0.2℃水浴箱內(nèi)(水浴箱內(nèi)的水面應(yīng)高于EC肉湯液面)，培養(yǎng)24±2h，經(jīng)培養(yǎng)后，如所有EC肉湯管均不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為陰性;如有產(chǎn)氣者，則將所有產(chǎn)氣的EC肉湯管分別轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置 培養(yǎng)18-24h，凡平板上有典型菌落者，則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。 4.2 結(jié)果報(bào)告 根據(jù)證實(shí)為糞大腸菌群的陽(yáng)性管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值 乳酸菌的檢測(cè)： 一 概述 乳酸菌是指一群能分解葡萄糖或乳糖產(chǎn)生乳酸，需氧和兼性厭氧，多數(shù)無(wú)動(dòng)力，過(guò)氧化氫酶陰性，革蘭氏陽(yáng)性的無(wú)芽胞桿菌和球菌。這類細(xì)菌在自然界分布廣泛，可棲居在人和各種動(dòng)物的口腔、腸道等器官內(nèi)，在土壤、食品、飼料、水及一些臨床標(biāo)本中都有乳酸菌的存在。乳酸菌在工業(yè)、農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥等與人類生活密切相關(guān)的領(lǐng)域應(yīng)用價(jià)值很高，相當(dāng)多的乳酸菌對(duì)人、畜的健康起著有益的作用，但個(gè)別菌種能對(duì)人畜致病，乳酸菌主要包括23個(gè)屬的細(xì)菌。 二 樣本采集 檢樣主要為含乳酸菌活菌的飲料和微生態(tài)制劑，樣本應(yīng)放入冰箱保存，心快檢驗(yàn)。 三 檢驗(yàn)方法（中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學(xué)檢驗(yàn)GB／T 16347-1996） 乳酸菌菌總數(shù)的測(cè)定：乳酸菌菌落總數(shù)是指標(biāo)樣在一定條件下培養(yǎng)后，所得1ml檢樣中所含乳酸菌菌落的總數(shù)。 （一）檢驗(yàn)程序 乳酸菌菌落總數(shù)檢驗(yàn)程序如下： （二）培養(yǎng)基和試劑 改良TJA培養(yǎng)基（改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基）；改良MC培養(yǎng)基（modified Chalmers培養(yǎng)基）；0.1％亞甲藍(lán)牛乳培養(yǎng)基；6.5％氯化鈉肉湯參照；pH9.6葡萄糖肉湯；40％膽汁肉湯；淀粉水解培養(yǎng)基；精氨酸水解培養(yǎng)基；乳酸桿菌糖發(fā)酵管；七葉苷培養(yǎng)基；革蘭氏染色液；3％過(guò)氧化氫溶液；蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑；明膠培養(yǎng)基；硝酸鹽培養(yǎng)基、硝酸鹽試劑；生理鹽水：定量分裝于三角瓶和試管內(nèi)滅菌。 （三）操作步驟 1．以無(wú)菌操作將經(jīng)過(guò)充分搖勻的檢樣25ml（或25g）放入含有225ml滅菌生理鹽水的來(lái)菌廣口瓶?jī)?nèi)做成1：10的均勻稀釋液。 2．用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1m，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi)（注意吸管不要觸及管內(nèi)稀釋液）。 3．另取1ml滅菌吸管，按上述操作順序，作10倍增稀釋液，如此每遞增一次，即換用1支1ml滅菌吸管。 4．選擇2～3個(gè)以上適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時(shí)，即以吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度作兩個(gè)平皿。 5．稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時(shí)將冷至50℃的乳酸菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基（改良TJA或改良MC）注入平皿約15ml，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使混合均勻。同時(shí)將乳酸菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液檢樣用的滅菌生理鹽水的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照，以上整個(gè)操作自培養(yǎng)物加入培養(yǎng)皿開(kāi)始至接種結(jié)束須在20min內(nèi)完成。 6．待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置36℃±1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)72h±3h取出，觀察乳酸菌菌特征，選取菌落數(shù)在30～300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算后，隨機(jī)挑取5個(gè)菌落數(shù)進(jìn)行革蘭氏染色，顯微鏡檢查并做過(guò)氧氫酶試驗(yàn)。革蘭氏陽(yáng)性，過(guò)氧化氫酶陰性，無(wú)芽胞的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據(jù)證實(shí)為乳酸菌菌落計(jì)算出皿內(nèi)的乳酸菌數(shù)，然后乘其稀釋倍數(shù)即得每亳升樣品中乳酸菌數(shù)。例如，檢樣10－4的稀釋液在改良TJA瓊脂平板上，生成的可疑菌落為35個(gè)，取5個(gè)鑒定，證實(shí)的乳酸菌的4個(gè)，則1ml檢樣中乳酸菌數(shù)為： 35×4／5×104＝2.8×105 7．乳酸菌在改良TJA和改良MC培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)形態(tài)特征。 （四）乳酸菌的鑒定 對(duì)上述分離到的乳酸菌需進(jìn)行菌種鑒定時(shí)，則作以下試驗(yàn)。 1．菌種制備 自平板上挑取菌落，接種于改良TJA或改良MC瓊脂斜面，于36℃±1℃，24～48h培養(yǎng)，刮取菌苔，分別進(jìn)行下列試驗(yàn)。 2．乳酸桿菌鑒定試驗(yàn) 極少見(jiàn)還原硝酸鹽，不液化明膠，不產(chǎn)生靛基質(zhì)和硫化氫。 3．常見(jiàn)乳桿菌屬內(nèi)種的碳水化合物反應(yīng)。 4．產(chǎn)酸乳的鏈球菌的鑒別試驗(yàn)。
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- 大腸桿菌 乳酸菌如何做實(shí)驗(yàn)檢測(cè)
- 光柵光譜儀實(shí)驗(yàn)如何做？
光柵光譜儀實(shí)驗(yàn)：應(yīng)用與原理解析
光柵光譜儀是一種常用于分析光的組成與特性的重要儀器，它通過(guò)光柵衍射的原理，將入射光譜分解成不同波長(zhǎng)的光，廣泛應(yīng)用于物理、化學(xué)、生物等多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域。本文將詳細(xì)探討光柵光譜儀的工作原理、實(shí)驗(yàn)過(guò)程、以及其在科研與工業(yè)中的重要作用，旨在為廣大科研人員及學(xué)者提供相關(guān)的實(shí)踐與理論指導(dǎo)。
光柵光譜儀的工作原理基于光的衍射效應(yīng)。光柵通常由眾多平行的細(xì)線條構(gòu)成，每條線條之間的間隔非常微小。當(dāng)光線照射到光柵表面時(shí)，由于光的衍射效應(yīng)，光線會(huì)按照一定的規(guī)律發(fā)生偏折，并在不同的角度上出現(xiàn)衍射光譜。根據(jù)光柵的設(shè)計(jì)，光譜中每一條光線的角度與入射光的波長(zhǎng)成一定的關(guān)系。通過(guò)測(cè)量光線的衍射角度，可以準(zhǔn)確推算出光的波長(zhǎng)和頻率，這一過(guò)程即為光譜分析。
在光柵光譜儀實(shí)驗(yàn)中，首先需要選用合適的光源，通常使用激光或其他連續(xù)光源，確保光源的波長(zhǎng)穩(wěn)定性和適合衍射光譜分析的特性。實(shí)驗(yàn)中，光源通過(guò)準(zhǔn)直透鏡使得光線平行，接著光線通過(guò)光柵，并在光柵的衍射作用下產(chǎn)生一系列光譜。實(shí)驗(yàn)者通過(guò)設(shè)定適當(dāng)?shù)慕嵌任恢?，使用探測(cè)器或光電二極管接收不同波長(zhǎng)的衍射光，從而分析出光譜數(shù)據(jù)。
實(shí)驗(yàn)的另一關(guān)鍵環(huán)節(jié)是光柵的選擇和光學(xué)系統(tǒng)的調(diào)校。光柵的周期性結(jié)構(gòu)和光柵常數(shù)（即光柵上條紋之間的間距）對(duì)衍射角度的精度有著至關(guān)重要的影響。為確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，必須選擇合適的光柵，并且對(duì)儀器進(jìn)行精密調(diào)節(jié)，使得光譜的測(cè)量范圍和靈敏度達(dá)到佳狀態(tài)。儀器的探測(cè)系統(tǒng)和光電元件的性能也對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。
在實(shí)際應(yīng)用中，光柵光譜儀被廣泛用于各種科學(xué)實(shí)驗(yàn)中。例如，在天文學(xué)中，科學(xué)家利用光柵光譜儀分析天體發(fā)出的光譜，進(jìn)而推算出天體的化學(xué)成分、溫度、運(yùn)動(dòng)速度等信息。在化學(xué)分析中，光柵光譜儀可用于檢測(cè)物質(zhì)的分子特征，通過(guò)光譜線的精確測(cè)量，推斷物質(zhì)的濃度和純度。光柵光譜儀還廣泛應(yīng)用于光通信、激光技術(shù)以及材料科學(xué)等領(lǐng)域。
總結(jié)來(lái)說(shuō)，光柵光譜儀是一種高精度的光譜分析工具，能夠通過(guò)衍射原理將光分解成不同波長(zhǎng)的光線，廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)中。了解其工作原理和實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程，對(duì)于提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和拓展其應(yīng)用領(lǐng)域具有重要意義。無(wú)論是在天文學(xué)的星際物質(zhì)分析，還是在化學(xué)反應(yīng)監(jiān)測(cè)中的定量分析，光柵光譜儀都發(fā)揮著不可替代的作用，為科研和技術(shù)創(chuàng)新提供了重要的支持。
- 同位素質(zhì)譜儀檢測(cè)如何做？
同位素質(zhì)譜儀檢測(cè)技術(shù)是一種高精度、高靈敏度的分析手段，廣泛應(yīng)用于化學(xué)、環(huán)境、食品安全、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。通過(guò)分析物質(zhì)的同位素組成，能夠?yàn)檠芯咳藛T提供關(guān)于物質(zhì)來(lái)源、組成和轉(zhuǎn)化過(guò)程等方面的重要信息。在現(xiàn)代科學(xué)研究和質(zhì)量控制中，同位素質(zhì)譜儀檢測(cè)已成為不可或缺的重要工具。本篇文章將探討同位素質(zhì)譜儀檢測(cè)的基本原理、應(yīng)用范圍及其在各個(gè)領(lǐng)域的實(shí)際意義。
同位素質(zhì)譜儀通過(guò)測(cè)定不同元素同位素的相對(duì)豐度來(lái)分析樣品。其基本原理是利用質(zhì)譜技術(shù)將樣品中的分子或原子離子化后，根據(jù)質(zhì)荷比（m/z）進(jìn)行分離和檢測(cè)。通過(guò)這種方式，質(zhì)譜儀能夠精確地識(shí)別出同位素的種類及其含量。常見(jiàn)的同位素包括氫、碳、氧、氮等元素的穩(wěn)定同位素。通過(guò)比較樣品中不同同位素的比例，研究人員可以獲得關(guān)于樣品組成的深層次信息。
在環(huán)境領(lǐng)域，同位素質(zhì)譜儀檢測(cè)的應(yīng)用尤為廣泛。研究人員通過(guò)分析空氣、水、土壤等樣品中的同位素特征，能夠追溯污染源的來(lái)源。例如，通過(guò)對(duì)水樣中氫氧同位素的分析，能夠判斷水源是否來(lái)自地下水或地表水，從而為水資源管理和污染監(jiān)控提供科學(xué)依據(jù)。在空氣污染監(jiān)測(cè)中，使用同位素質(zhì)譜儀能夠有效區(qū)分不同污染源的貢獻(xiàn)，為環(huán)境治理提供數(shù)據(jù)支持。
食品安全檢測(cè)是同位素質(zhì)譜儀的另一重要應(yīng)用領(lǐng)域。近年來(lái)，隨著食品貿(mào)易的日益頻繁，食品安全問(wèn)題日益受到關(guān)注。同位素質(zhì)譜技術(shù)可以用來(lái)檢測(cè)食品中是否存在非法添加物、摻假或源自不安全區(qū)域的成分。例如，通過(guò)碳同位素比率分析，可以判斷某一食品是否為天然產(chǎn)物，還是經(jīng)過(guò)合成或摻假處理。這種檢測(cè)方法具有高精度和高可靠性，能夠有效提升食品安全監(jiān)管的效率和準(zhǔn)確性。
醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷也離不開(kāi)同位素質(zhì)譜儀的應(yīng)用。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，質(zhì)譜儀可用于分析血液、尿液、組織樣本等生物樣本中的微量物質(zhì)，從而幫助醫(yī)生診斷疾病或監(jiān)測(cè)治果。例如，在癌癥研究中，通過(guò)同位素標(biāo)記技術(shù)，研究人員能夠追蹤藥物的代謝路徑，從而優(yōu)化藥物的使用方案。某些疾病的早期診斷依賴于生物標(biāo)志物的同位素分析，這為疾病的預(yù)防和提供了強(qiáng)有力的支持。
同位素質(zhì)譜儀的優(yōu)勢(shì)不僅在于其的分辨率和高精度，還體現(xiàn)在其能夠?qū)?fù)雜樣品進(jìn)行多元素、多同位素的分析。無(wú)論是單一元素的同位素組成，還是復(fù)雜混合物的同位素比率，質(zhì)譜儀都能提供精確的數(shù)據(jù)支持，幫助科研人員解答許多科學(xué)和技術(shù)難題。
同位素質(zhì)譜儀檢測(cè)作為一種高效、精確的分析工具，在環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全、醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域的應(yīng)用日益增多。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步，未來(lái)同位素質(zhì)譜儀將在更多行業(yè)中發(fā)揮其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。無(wú)論是從科學(xué)研究的角度，還是從實(shí)踐應(yīng)用的層面，同位素質(zhì)譜儀都展現(xiàn)了其不可替代的重要地位。因此，掌握這一技術(shù)，不僅是科學(xué)研究的前沿需求，更是提升各行各業(yè)檢測(cè)水平的關(guān)鍵。
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- 乳酸菌DNA提取方法: 菌體分別加入溶菌酶\蛋白酶K\SDS處理，提取好的DNA跑電泳都有條帶，不過(guò)我沒(méi)有跑marker不知道DNA片段應(yīng)該是多大. 之后做PCR，做不出來(lái)，PCR其他條件都沒(méi)有問(wèn)題，所以我覺(jué)得是DNA沒(méi)提出來(lái)，可電泳又能跑出來(lái)，我想問(wèn)什么原因會(huì)出現(xiàn)這種情況. DN... 乳酸菌DNA提取方法: 菌體分別加入溶菌酶\蛋白酶K\SDS處理，提取好的DNA跑電泳都有條帶，不過(guò)我沒(méi)有跑marker不知道DNA片段應(yīng)該是多大. 之后做PCR，做不出來(lái)，PCR其他條件都沒(méi)有問(wèn)題，所以我覺(jué)得是DNA沒(méi)提出來(lái)，可電泳又能跑出來(lái)，我想問(wèn)什么原因會(huì)出現(xiàn)這種情況. DNA提取好后顏色也透明的，會(huì)不會(huì)是降解了呢.我做16S要去測(cè)序.苯酚，氯仿抽提時(shí)會(huì)不會(huì)有問(wèn)題呢，同樣的方法有些菌就提得出來(lái)，有些就提不出來(lái)，請(qǐng)高手指教，急，謝謝! 菌液放置了可能一個(gè)月左右，會(huì)不會(huì)有影響呢，菌齡長(zhǎng)了嗎. 展開(kāi)
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- 各位，我請(qǐng)教大家一個(gè)問(wèn)題，我上次做細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，有兩瓶培養(yǎng)基，都放在培養(yǎng)箱24小時(shí)，37度，也可能是42度，只有一瓶凝固，1.營(yíng)養(yǎng)瓊脂用來(lái)測(cè)細(xì)菌總數(shù)，（凝固了），2.另一是測(cè)大腸桿菌，（可能是虎紅瓊脂或者乳糖膽鹽，前者可能性在，當(dāng)時(shí)沒(méi)有記清楚）紫紅色的... 各位，我請(qǐng)教大家一個(gè)問(wèn)題，我上次做細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，有兩瓶培養(yǎng)基，都放在培養(yǎng)箱24小時(shí)，37度，也可能是42度，只有一瓶凝固，1.營(yíng)養(yǎng)瓊脂用來(lái)測(cè)細(xì)菌總數(shù)，（凝固了），2.另一是測(cè)大腸桿菌，（可能是虎紅瓊脂或者乳糖膽鹽，前者可能性在，當(dāng)時(shí)沒(méi)有記清楚）紫紅色的液體，沒(méi)有凝固。這是為什么？如果是液體就沒(méi)法測(cè)。 展開(kāi)
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