今天的蛋白組學(xué)研究中，研究人員們在轉(zhuǎn)化研究，生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)，甚至單細(xì)胞分析等過程中，不止是追求簡單的鑒定，更多的需要獲取準(zhǔn)確可靠的定量信息，用以理解生物學(xué)問題。 他們需要使用精確的定量檢測方法來表征生物系統(tǒng)之間的差異，對大量樣本進(jìn)行高置信度、高通量的表征，驗證生物學(xué)假說。

在剛結(jié)束的USHUPO中，賽默飛正式推出了全新的Velocity LFQ DIA 工作流程。 該平臺基于Thermo Scientific Orbitrap 超高分辨質(zhì)譜儀、Thermo Scientific Vanquish NEO UHPLC 系統(tǒng)以及高效的 Thermo Scientific μPAC UHPLC 色譜柱技術(shù)，具有優(yōu)異的定量性能，蛋白組深度覆蓋，并可輕松實現(xiàn)高通量分析，匹配今天研究人員們對定量蛋白組學(xué)研究的需求。 下面就由小編給大家介紹該平臺的工作流程，并展示其在定量表征、蛋白組覆蓋度和方法通量中的性能。

Workflow

Velocity LFQ DIA 工作流程

Velocity LFQ DIA 工作流程組成如圖1 所示，包括Vanquish Neo UHPLC 系統(tǒng)和μPAC Neo UHPLC 色譜柱用于色譜分離，Easy-Spray 納升離子源和 Orbitrap Exploris 240/480 用于質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集，Spectronaut軟件用于數(shù)據(jù)分析。

圖1. Velocity LFQ DIA 工作流程示意圖

（點擊查看大圖）

色譜分離：

大隊列研究中需要有穩(wěn)健的色譜設(shè)置（分離技術(shù)、色譜柱等），確保系統(tǒng)長期穩(wěn)定運行。 Vanquish Neo UHPLC 系統(tǒng)可實現(xiàn)高重現(xiàn)性，并可進(jìn)行多種類型的 LC-MS 實驗。 新的色譜分離技術(shù)同樣也可提高系統(tǒng)穩(wěn)健性，例如基于微陣列的 μPAC Neo 色譜柱，可提高分析靈敏度和保留時間穩(wěn)定性 [1] 。

質(zhì)譜分析：

除了穩(wěn)健性和重復(fù)性之外，可靠的鑒定和定量在蛋白組學(xué)研究中十分重要。 Orbitrap 技術(shù)可提供高質(zhì)量精度以及高分辨率，是復(fù)雜 DIA 掃描中可靠鑒定，以及準(zhǔn)確、精確檢測并分辨離子類型的關(guān)鍵因素。

數(shù)據(jù)分析：

DIA譜圖中為混合母離子碎裂后所得的混合子離子譜圖，通常需要使用譜圖庫方法進(jìn)行解析。 但是，隨著數(shù)據(jù)分析軟件（例如，使用機(jī)器學(xué)習(xí)方法模擬預(yù)測獲得高質(zhì)量的譜圖庫）的發(fā)展，無需譜圖庫的方法成為了節(jié)約時間和成本的一種選擇。

Key Words

Velocity LFQ DIA 工作流程三個關(guān)鍵詞：

定量、覆蓋度、通量

為了深入展示 Velocity LFQ DIA的性能，我們建立一個穩(wěn)健、高重現(xiàn)性的工作流程，可實現(xiàn)復(fù)雜樣品中蛋白的準(zhǔn)確鑒定和定量。 其中使用了兩個不同的混合樣品，包括兩種蛋白組和三種蛋白組混合樣品（圖2），質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集使用OE240質(zhì)譜儀。

圖2. Velocity LFQ DIA 工作流程性能展示所使用的的實驗設(shè)計。 A，兩種蛋白組混合樣本，包括高含量的人類肽段背景（800 ng Hela 酶解肽段），低到中含量的 Ecoli肽段，比值為1:2:4:8； B，三種蛋白組混合樣本，中等含量的人類肽段背景（325 ng Hela 酶解肽段），以及酵母和Ecoli肽段，比值分別為1:0.5和1:4。 這些混合樣本分別模擬生物樣本中的上調(diào)和下調(diào)蛋白表達(dá)情況。 （點擊查看大圖）

01

出色的定量性能

分別對上述兩種樣本進(jìn)行30min的LC-MS采樣，數(shù)據(jù)采用Spectronaut16，directDIA的方式進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，肽段和蛋白的FDR均小于1%。

Ecoli和hela的混合樣本中，ecoli蛋白在4個樣本中的3個不同比值均十分接近理論比值，且所有數(shù)據(jù)點在中位數(shù)附近分布很窄，展示了Velocity LFQ DIA工作流程的高定量準(zhǔn)確性和精密度（圖3A）。 此外，技術(shù)重復(fù)間肽段的 CV 值均小于 7%（圖3B），說明該工作流程具有高定量精密度。

圖3. 工作流程的定量準(zhǔn)確性和精密度展示，使用兩個蛋白組混合樣本。 A，Ecoli蛋白三個不同比值下的實際比值，以箱型圖展示，橙色虛線為理論比值； B，4個不同比例下肽段豐度CV的小提琴圖。 （點擊查看大圖）

同時，使用Velocity LFQ DIA工作流程可獲得約5個數(shù)量級的人類蛋白動態(tài)范圍（圖4A），有助于低豐度蛋白的發(fā)現(xiàn)。 在高含量的hela肽段背景下，使用該工作流程可發(fā)現(xiàn)很多細(xì)菌體內(nèi)的重要蛋白，包括與轉(zhuǎn)錄翻譯相關(guān)，以及人類干擾素誘導(dǎo)相關(guān)的ecoli蛋白。 另外，選取了Ecoli中十個豐度最低的蛋白，發(fā)現(xiàn)它們在不同樣品間的實際比值依然十分接近理論比值（圖4B），說明該工作流程即使在低豐度蛋白情況下仍可獲得高定量準(zhǔn)確性。

圖4. A，兩個蛋白組混合樣本的蛋白豐度分布； B，Ecoli中十個豐度最低蛋白的實際比值與理論比值偏差 （點擊查看大圖）

在三個蛋白組混合樣本中，Velocity LFQ DIA工作流程同樣展示了出色的定量性能。 實際比值與理論比值之前偏差<2%。 可定量約3000個人類蛋白，接近500個Ecoli蛋白（圖5 A）。 樣本A與B的肽段豐度展現(xiàn)了與比值相一致的線性斜率，以及與物種相關(guān)的整體豐度范圍（圖5B）。

圖5. 工作流程的定量性能展示，使用三個蛋白組混合樣本。 A，三個蛋白組不同比值下的實際比值，以箱型圖展示，橙色虛線為理論比值； B，樣本A與B的肽段豐度相關(guān)性。 （點擊查看大圖）

02

深度蛋白組覆蓋

使用Spectronaut16的directDIA方法分析兩個蛋白組樣品，在不損失定量性能的同時，可獲得深度蛋白組覆蓋。 然后使用第三方軟件DIA-NN [2] 分析相同的數(shù)據(jù)集，可獲得與sp16類似的結(jié)果。 當(dāng)使用Spectronaut17軟件時，改善的directDIA+方法可提高30%的母離子鑒定，及10%的蛋白鑒定（圖6），30min梯度內(nèi)，不使用譜圖庫可獲得接近7000個蛋白鑒定。 這表明Velocity LFQ DIA工作流程不僅可獲得出色的定量性能，也可實現(xiàn)深度蛋白組覆蓋，此外也說明了不使用譜圖庫可作為一種有效的DIA數(shù)據(jù)分析方法。 如果想進(jìn)一步提高蛋白組覆蓋深度，也可通過建立合適譜圖庫的方法實現(xiàn)。

圖6. 使用library free方法分析兩個蛋白組樣品可實現(xiàn)深度蛋白組覆蓋。 柱狀圖比較了三個不同的軟件（或版本）所得的蛋白和母離子數(shù)目，F(xiàn)DR<1%。 （點擊查看大圖）

03

高通量流程

在上述所展示的Velocity LFQ DIA工作流程中，有效梯度為30min，實際時長為每針39min，可提供每天分析 36個樣品的通量。 另外，在一些大隊列研究中，研究人員需要更高的分析通量。 在Velocity LFQ DIA工作流程中使用了Vanquish Neo液相，其使用靈活，且經(jīng)過優(yōu)化樣品吸取、上樣、色譜柱清洗和平衡等流程，可有效提高質(zhì)譜利用率 [3] ，可方便研究人員根據(jù)項目需求，進(jìn)一步提高樣品通量。

04

工作流程穩(wěn)健性

為了驗證Velocity LFQ DIA工作流程的穩(wěn)健性，從一個持續(xù)兩個月時間（使用同一根色譜柱）的項目中選取其中的一部分?jǐn)?shù)據(jù)作為展示。 采用 200 ng Hela肽段，DDA實驗作為系統(tǒng)性能的 QC，在兩個月內(nèi)間歇運行，梯度為67min，結(jié)果如圖7所示。 由結(jié)果可知，肽段和蛋白的鑒定數(shù)字在整個500小時的項目中（總上樣量約為130 μg）保持一致（鑒定數(shù)字變化在5%以內(nèi)）。 這說明了色譜柱，色譜分離以及質(zhì)譜的穩(wěn)健性，這對大隊列研究十分重要，是獲得良好數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)。

圖7. 兩個月的使用時間內(nèi)，肽段和蛋白鑒定的重現(xiàn)性。 在整個實驗周期中，間歇運行DDA QC實驗，數(shù)據(jù)分析使用CHIMERYS算法。 （點擊查看大圖）

小結(jié)

Velocity LFQ DIA工作流程結(jié)合了 Vanquish Neo 系統(tǒng)，μPAC Neo色譜柱以及 Orbitrap 超高分辨質(zhì)譜儀，是高通量非標(biāo)蛋白組DIA鑒定和定量的一種理想工作流程。

采用30min梯度的OE240方法展示了該工作流程的主要性能特點： 出色的定量深性能、蛋白組深度覆蓋和分析高通量。

Velocity LFQ DIA工作流程適用于需要高通量、穩(wěn)健性、高準(zhǔn)確性精密度定量性能和深度蛋白組覆蓋的定量蛋白組學(xué)研究。

美克全新形象，煥新升級！

OMEC

尊敬的珠海歐美克儀器客戶、合作伙伴:

首先，非常感謝您們一直以來對珠海歐美克儀器有限公司的大力支持!

現(xiàn)誠摯的向您告知：作為珠海歐美克儀器有限公司戰(zhàn)略持續(xù)發(fā)展的一部分，即日起，歐美克品牌煥新升級，我們將在全 球范圍內(nèi)啟用全新的LOGO形象，具體如下：

全新LOGO采用英文“OMEC”結(jié)合中文“歐美克”形象，設(shè)計時提煉關(guān)鍵特征“顆?！钡膱A形為識別點，體現(xiàn)深耕粒度檢測及顆粒表征領(lǐng)域的態(tài)度和決心。在保留如上傳統(tǒng)LOGO中的科技藍(lán)色系外增加了更鮮艷跳動的極光綠色系，以更好的呈現(xiàn)歐美克品牌持續(xù)進(jìn)行產(chǎn)品創(chuàng)新的活力及服務(wù)全 球更多用戶的決心。

作為歷史悠久的國產(chǎn)激光粒度儀品牌，2023年恰逢珠海歐美克儀器成立30周年，我們承諾將為全 球用戶及合作伙伴提供更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)解決方案，并和您一起探索顆粒表征領(lǐng)域的星辰大海！

在新舊LOGO過渡期間，歐美克各品牌宣傳渠道中兩種LOGO標(biāo)識將共同使用，且兩種標(biāo)識具有同等效力。

特此通知!                             

珠海歐美克儀器有限公司

2023年5月16日

本次歐美克LOGO形象的全新升級，旨在展現(xiàn)歐美克悠久的品牌沉淀的同時更好的讓用戶及合作伙伴感受到我們的品牌活力，歡迎各位用戶及合作伙伴聯(lián)系垂詢歐美克新形象相關(guān)事宜。

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1、大容量鋰電池

進(jìn)口鋰離子電芯29.4V 42AH電池，安全可靠環(huán)保。

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體積小，重量輕，方便攜帶。

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電池組獨立過壓、過溫、過載、過充、過放、短路保護(hù)。

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交流220V純正弦波雙輸出，24V直流輸出，保證儀器供電。

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 設(shè)備整體安裝好之后，客戶拿出自己的樣品進(jìn)行入爐燒結(jié)，整體燒結(jié)效果非常好，其次單次燒結(jié)量很大，可同時放置四層坩堝，每個坩堝可放置60顆牙齒，客戶非常滿意，對我們諾巴迪的產(chǎn)品質(zhì)量以及售后工作也是給予了高度贊揚。

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新冠肺炎疫情爆發(fā)以來，最高頻的詞匯莫過于“核酸檢測”了。從采樣到出結(jié)果，整個流程要經(jīng)歷不少環(huán)節(jié)，每一環(huán)節(jié)都不容忽視。

而在影響核酸檢測結(jié)果的眾多因素當(dāng)中，“核酸提取”以其重要性被視為關(guān)鍵一環(huán)，其成敗與否，直接關(guān)系到下游的檢測數(shù)據(jù)，影響檢測人員對結(jié)果的判斷。

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利用病毒DNA/RNA提取試劑盒（預(yù)分裝磁珠法，MB32）從假病毒血清中提取RNA并進(jìn)行熒光定量PCR實驗，結(jié)果如上圖所示。

第三代

激光散斑血流成像系統(tǒng)

RFLSI Ⅲ

-新品來襲-

通過不斷創(chuàng)新迭代，瑞沃德新一代激光散斑血流成像系統(tǒng)新增諸多實用功能，帶給你超凡使用體驗！

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超高2K分辨率（2048 × 2048）

帶你清晰觀察腸系膜第五分支血管

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Z高幀率可達(dá)140幀/秒

快速記錄每一次心臟跳動

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實物圖、散斑圖、偽彩圖

互為參照，同步調(diào)整

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香港中文大學(xué)老師說

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       在新品上市之前，已有多位老師SYRFLSI Ⅲ激光散斑血流成像系統(tǒng)，十分感謝老師們?yōu)槲覀兲峁┑膶氋F意見，以及反饋的諸多實驗成像圖：

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北京、上海、深圳

臺灣、美國、歐洲等相關(guān)單位

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即日起掃描下方二維碼，就有機(jī)會SY瑞沃德新一代的激光散斑血流成像系統(tǒng)。

申請須知

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● 簡單的壓力和真空控制

   通過手動的旋鈕操作直接實現(xiàn)精確的壓力控制

● 穩(wěn)定的流量控制

   結(jié)合流量傳感器，實現(xiàn)長時間的可控的流體灌注。

● 直觀的用戶界面

   手動操作或電腦端軟件操作來控制壓力和流量

● 便攜、緊湊和獨立

   微型工作臺尺寸，內(nèi)置壓力源，無需任何外置壓力源。

● 提供2個版本的Cobalt壓力泵

   壓力量程為0到2bar的Cobalt和壓力量程為-700到1000mbar的Cobalt-Dual。

主要特點

優(yōu)質(zhì)的壓力和真空控制

   Cobalt自動微流體壓力泵有2個版本可供選擇。與流量傳感器結(jié)合使用時，兩個版本都允許進(jìn)行氣體或流量控制。

● 0到2000mbar量程的正壓控制

● -700到1000mbar量程的正壓力和真空控制

Cobalt技術(shù)提高了微流體儀器的良好性能，使其更加易于使用。Cobalt自動微流體壓力泵是基于OB1 MK4控制器而設(shè)計，使用基于壓電技術(shù)的壓力調(diào)節(jié)。

與注射泵或蠕動泵相比而具有的獨特性能

與微流體注射泵或蠕動泵相比，Elveflow Cobalt自動微流體泵具有卓越的流體驅(qū)動性能。由于其不使用機(jī)械部件來產(chǎn)生壓力，因此，Cobalt產(chǎn)生高精度的氣體壓力來平穩(wěn)的驅(qū)動液體流動。

當(dāng)Cobalt壓力泵與MFS流量傳感器結(jié)合使用時，其可實現(xiàn)強(qiáng)大的液體流量控制：

● 0-5mL/min流量范圍內(nèi)的高穩(wěn)定性（water test）：3.5nL/min（MFS2）到1μL/min（MFS5）

● 0-5mL/min流量范圍內(nèi)的高準(zhǔn)確度（water test）：20nL/min（MFS2）到10μL/min（MFS5）

自動和獨立的儀器：無需外置氣源和真空泵供氣

Cobalt自動微流體壓力泵是您實驗臺上的理想設(shè)備。它內(nèi)置了壓力源（和真空源），因此，不需要外部空氣壓縮機(jī)或?qū)嶒炇覂?nèi)氣瓶或真空泵的氣體供氣。同時，其設(shè)計最大限度地減少了振動和噪音。

嵌入式用戶界面

無需外部軟件即可完全控制Cobalt的直觀硬件，任何用戶都可以通過手動操作來實現(xiàn)液體流量的壓力驅(qū)動和流量控制。

一個基本示例：微流體芯片灌注

應(yīng)用領(lǐng)域

Cobalt壓力泵是優(yōu)質(zhì)的微流體控制儀器，具有廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域：

●  片上實驗室開發(fā)

●  基準(zhǔn)測試或表征（芯片、傳感器、過濾器等）

●  機(jī)械生物學(xué)（細(xì)胞限制、組織工程等）

●  細(xì)胞灌注