剛剛結(jié)束的五一小長假，Q博士見到越來越多的人出門踏青，這意味著國內(nèi)疫情防控的常態(tài)化，人們對正常出街的安全性越來越有信心。然而不時發(fā)生的“假陰性”現(xiàn)象也仍然是科學(xué)家和普通群眾愈發(fā)關(guān)心的關(guān)鍵問題。

今天Q博士帶大家走入核酸檢測的常用方法PCR方法，以及如何在PCR檢測過程中降低檢測結(jié)果假陰性概率。

什么是PCR技術(shù)？

PCR技術(shù)又稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的Z大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。

在新冠病毒檢測中，核酸檢測被定義為臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，RT-PCR技術(shù)被反復(fù)提到，它是一種將RNA反轉(zhuǎn)錄和PCR相結(jié)合的技術(shù)。首先在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，將提取到的RNA合成cDNA,再以cDNA為模板，在DNA聚合酶作用下不斷擴(kuò)增（變性-退火-延伸多個循環(huán)）合成目的片段并進(jìn)行分析。

PCR用水

PCR技術(shù)目前多搭配試劑盒使用，也有用戶自行制備反應(yīng)體系，無論哪個過程都需要使用水。無論是近年來季節(jié)性爆發(fā)的甲流乙流，還是目前都在經(jīng)歷的新冠病毒，在檢測過程中都涉及一個痛點(diǎn)，那就是如何盡可能提高核酸檢測的準(zhǔn)確性，減少假陰性結(jié)果出現(xiàn)的可能性。

我們首先分析一下假陰性結(jié)果出現(xiàn)的原因，以新冠病毒核酸檢測為例，假陰性的主要原因有：

1 病人病程：不同病程，患者體內(nèi)病毒載量不同；

2 采樣部位：咽拭子、鼻咽拭子、痰液、肺泡灌洗液等不同采樣部位病毒載量均不同；

3 采樣準(zhǔn)確性：拭子質(zhì)量，工作人員操作等；

4 試劑盒的質(zhì)量：引物設(shè)計以及水質(zhì)控制。

為了順利將提取到的RNA反轉(zhuǎn)錄并實(shí)現(xiàn)DNA的成功擴(kuò)增，必須YZ核糖核酸酶（RNases）的降解作用，如果試劑盒用水內(nèi)含RNases，將極有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。

去除RNases的主要方法

1 高壓滅菌：即便是在180℃下高壓滅菌4h之后，RNases仍保持某些活性，且某些細(xì)菌失活會釋放更多的RNases；

2 DEPC法（二乙基焦碳酸酯處理法）：利用二乙基焦碳酸酯（DEPC）處理方法使酶失活是用來YZ水溶液中RNases活性的常見方法。然而，二乙基焦碳酸酯是一種可疑致癌物，處理須小心；同時該方法雖然能夠使酶失活，卻無法將其從水中去除，同時清除多余的DEPC過程中，會產(chǎn)生乙醇，二氧化碳等其他污染物；

3 超濾法：超濾是一種真正能夠從水溶液中清除RNases的方法。默克Milli-Q^?選用內(nèi)置在丙烯腈丁苯橡膠（ABS）外殼中的聚砜超過濾膜作為超濾柱的主要成分，在一定水流速一定濃度范圍內(nèi)，超濾具有充分的截留作用。超濾處理可有效取代DEPC處理方法生產(chǎn)無RNases水。

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即使國內(nèi)疫情已經(jīng)基本控制，但Q博士提醒大家仍然要積極防護(hù)，保護(hù)自己。戴口罩，勤洗手。默克Milli-Q^?與您攜手，早日結(jié)束這場攻堅戰(zhàn)！

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