激素類藥物主要包括雄激素、雌激素、孕激素、皮質(zhì)醇激素等。激素類藥物的應(yīng)用,能夠較為有效地提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益,但同時激素的濫用對人體健康的危害也是不容忽視的。一些養(yǎng)殖戶片面追求經(jīng)濟(jì)利益,從而過度使用激素類藥物,導(dǎo)致飼養(yǎng)動物體內(nèi)的激素嚴(yán)重超標(biāo),所生產(chǎn)的肉類食品中也有大量的激素殘留。如果食用這樣的肉類食品,也會造成人體自身激素紊亂,給人體健康造成很大威脅。
實驗部分
應(yīng)用范圍:動物源性食品/豬肉/豬肝/雞蛋/牛奶/牛肉/雞肉/蝦
檢測方法:液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
方法原理:試樣中的目標(biāo)化合物經(jīng)均質(zhì),酶解,用甲醇-水溶液提取,經(jīng)固相萃取富集凈化,液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定,內(nèi)標(biāo)法定量
前處理儀器:電子天平(感量0.0001 g和0.01 g);組織勻漿機(jī);渦旋混合器;恒溫振蕩器;超聲清洗儀;離心機(jī)(10000 r/min);固相萃取裝置;氮吹儀;pH計;移液器。
檢測儀器:LC-MS/MS+ESI源
實驗制備
1.動物肌肉、肝臟、蝦
從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500g,剔除筋膜,蝦去除頭和殼。用組織搗碎機(jī)充分搗碎均勻,均分成兩份,分別裝入潔凈容器中,密封,并標(biāo)明標(biāo)記,于-18 ℃以下冷凍存放。
2.牛奶
從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g,充分搖勻,均分成兩份,分別裝入潔凈容器中,密封,并標(biāo)明標(biāo)記,于0 ℃~4 ℃ 以下冷藏存放。
3.雞蛋
從所取全部樣品中取出有代表性樣品約500 g,去殼后用組織搗碎機(jī)充分?jǐn)嚢杈鶆?,均分成兩份,分別裝入潔凈容器中,密封,并標(biāo)明標(biāo)記,于0 ℃~4 ℃ 以下冷藏存放。
前處理方法
1.提取
稱取5g試樣(精確至0.01 g)于50mL具塞塑料離心管中,準(zhǔn)確加入混合內(nèi)標(biāo)溶液(100μg/L)100μL和10mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液,渦旋混勻,再加入β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液100μL,于37℃±1 ℃振蕩酶解12h。取出冷卻至室溫,加入25mL甲醇超聲提取30min,0℃~4℃下10000r/min離心10min。將上清液轉(zhuǎn)入潔凈燒杯,加水100mL,混勻后待凈化。
2.凈化
分別用6mL二氯甲烷-甲醇(7+3),6mL甲醇,6mL水活化ENVI-Carb固相萃取柱(500mg,6 mL),將提取液以2mL/min~3mL/min的速度上樣。將小柱減壓抽干。再將用6mL二氯甲烷-甲醇(7+3)活化好的氨基固相萃取柱(500mg,6mL)串接在ENVI-Carb小柱下方。用6 mL二氯甲烷-甲醇(7+3)洗脫并收集洗脫液,取下ENVI-Carb小柱,再用2mL二氯甲烷-甲醇(7+3)洗氨基柱,合并洗脫液后在微弱的氮?dú)饬飨麓蹈?,? mL甲醇-水(1+1)溶解殘渣,供儀器測定。
注意事項
1.激素類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及內(nèi)標(biāo)用甲醇配成1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液,在-18 ℃以下避光保存,可穩(wěn)定使用12個月。
2.如果有條件,建議每種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用其對應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正。實在沒有對應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo),選擇與其化學(xué)性質(zhì)最近似的同位素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行校正(參考國標(biāo)方法)。
3.β-葡萄糖醛酸酶只能冷藏,不能冷凍保存,否則會失活。
4.由于上樣液比較多,可以自制一種可控流速的大針筒,固定在ENVI-Carb小柱上面,一次加上全部提取液,提高凈化富集效率。
5.由于檢測項目比較多,在濃縮過程中需要微弱氮?dú)饩従彺抵两?,控制溫度不高?5 ℃。
6.國標(biāo)方法中激素類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)比較多,需要根據(jù)檢測的項目,制定不同的色譜方法。如果檢測項目比較多,建議使用一根150 mm長的色譜柱進(jìn)行分離。根據(jù)出峰時間,使用正負(fù)離子切換模式進(jìn)行掃描,提高檢測效率。
參考文獻(xiàn):
GB/T 21981-2008 動物源食品中激素多殘留檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
豬肉、豬肝、雞蛋、牛奶、牛肉、雞肉和蝦中激素類藥物殘留量測定的前處理流程圖
激素類藥物信息表
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