鹽霧腐蝕試驗箱

適用范圍：

鹽霧腐蝕試驗箱亦稱鹽霧噴霧試驗機(jī)，乃針對各種材質(zhì)表面處理，包含涂料、電鍍、有機(jī)或無機(jī)皮膜，陽極處理，防銹油等防腐蝕處理后測試其耐腐蝕性，從而確立你所需檢測產(chǎn)品的性能及質(zhì)量。

參 數(shù)：

安全保護(hù)裝置：

（A） 低水位時，自動切斷電源裝置。

（B） 超溫時，自動切斷加熱器電源裝置。

（C） 附安全警示燈裝置。

（D）  結(jié)束時警示燈自動警示。

準(zhǔn)備工作：

1、底部加熱水槽內(nèi)加足蒸餾水或去離子水，以防加熱時對箱體干裂老化。

2、箱體上部四周水密封槽應(yīng)加入適量的蒸餾水或去離子水，不宜過滿，切勿太少，以關(guān)閉箱蓋時，水和鹽霧均不外溢為佳。

3、空氣飽和器(不銹鋼桶)內(nèi)加入蒸餾水或去離子水，在加水前先打開(如圖1所示)放氣閥和飽和器加水閥，待水位高度為水位玻璃箱的4/5位置為宜，當(dāng)加到規(guī)定水位時，必須關(guān)閉放氣閥門，同時關(guān)閉飽和器加水閥。由于長期試驗，飽和器水分蒸發(fā)消耗，當(dāng)水位降低至2/5時應(yīng)及時補(bǔ)水，防止因缺水導(dǎo)致加熱管空燒，烤壞飽和器及內(nèi)部加熱點(diǎn)元件。

4、檢查貯水箱和工作室內(nèi)噴霧器之間的水管是否連接完好，把配制好的鹽溶液(一般按5%的濃度配制)加入貯水箱內(nèi)。

5、檢查箱體后部的排霧管排霧狀況;氣管是否脫落、出口處是否通至下水道;管路是否堵塞;以免影響鹽霧的排放。

6、架好箱體里面的漏斗，檢查漏斗與集霧器之間的連接管是否通暢完好，千萬不能影響鹽霧沉降量的收集。

7、檢查氣源與飽和器的連接管;氣源與噴霧器的連接管是否脫落，防止氣體外溢或供氣不足的弊端。

8、開啟箱蓋，將樣品正確放置在工作室內(nèi)的樣品架上(離周圍室壁10%)，樣品與樣品之間保持一定距離，使樣品暴露的表面積>98%，再關(guān)上箱蓋。

液相色譜對于多數(shù)人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年、經(jīng)驗豐富的分析員都會習(xí)慣于一些錯誤的操作，經(jīng)常導(dǎo)致一些儀器故障。方便快捷的分析過程固然重要，但是為了多做樣品而忽略了一些必不可少的步驟，往往得不償失，哪些操作不能做？哪些懶兒不能偷？那些小概率的故障師傅沒教怎么辦？液相使用過程中有哪四大關(guān)鍵因素要注意？

流動相不過濾

因為塵?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動相中的任何固體微粒。流動相Z好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。

使用后沒有及時清洗泵

流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。

因此，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

流動相走空

泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，Z終產(chǎn)生漏液。

沒有流動相流出，又無壓力指示怎么辦？

可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。

壓力和流量不穩(wěn)了？

原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯?，這時，可卸下砂濾棒浸入流動相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。

壓力為啥過高或過低？

 可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應(yīng)逐段進(jìn)行。

在進(jìn)行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：

PS：（在液相色譜中對組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的。

梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。）

梯度洗脫的流動相選擇不當(dāng)

要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時更要引起注意。

當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。

忽略的空白梯度洗脫

梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強(qiáng)溶劑洗脫下來。

用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時產(chǎn)生氣泡。

忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化

混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當(dāng)二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的Z大壓力。

關(guān)于六通閥的正確使用和維護(hù)

①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。

②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的Z大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。

③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通常可用水沖洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。

關(guān)于色譜柱的使用和維護(hù)

色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。

調(diào)節(jié)流速太快。。。

避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。

反沖色譜柱。。。

一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。

預(yù)柱和保護(hù)柱

選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

液相色譜在使用過程中主要有四大關(guān)鍵因素

1.液相色譜儀本身：

對于儀器本身一般不會有問題，特別是剛買回來的新儀器。對于儀器本身Z重要的就是儀器的校驗，剛買回來的儀器一般都是由賣家先對儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作（包括IQ、PQ、OQ），確認(rèn)順利通過后，再請國家或省級儀器檢定局的來校驗，檢定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年會對儀器進(jìn)行一次的內(nèi)部校驗，目的就是為了保證儀器的正?？蛇\(yùn)行狀態(tài)。

2.色譜條件：

色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進(jìn)樣量。

流動相就涉及到配制流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質(zhì)對色譜結(jié)果的干擾。

色譜柱會因不同的品種而有不同的要求，但每根色譜柱都有它的清洗要求，這個在色譜柱說明書上都可以找到，一定要根據(jù)上面的要求進(jìn)行，否則會造成色譜柱效下降和色譜柱的使用壽命縮短，檢測波長也會因品種的不同有不同的要求，這里需要指出的是要注意觀察檢測器氘燈能量的變化，比如基線波動大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，都有可能是氘燈的能量不足所引起的，氘燈一般建議使用800小時，但實際上使用時間不止，可根據(jù)實際情況更換。

流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QC人員，但是作為研發(fā)人員，有時為了摸索條件或進(jìn)行方法耐用性驗證，會對流速進(jìn)行改變以評價方法的適用性。對于進(jìn)樣量因不同的品種也有不同規(guī)定，進(jìn)樣量這塊現(xiàn)在都使用自動進(jìn)樣，所以進(jìn)樣精密度都很好，不需強(qiáng)調(diào)什么。

3.操作人員：

首先，作為液相操作人員，一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)夜想的說明書，掌握液相硬件和軟件的操作，掌握日常的維護(hù)保養(yǎng)，掌握Z基礎(chǔ)故障的排除和維修。

一般液相的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只要嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行操作，一般不會出現(xiàn)問題，當(dāng)然啫喱需要特別指出的是對于液相的日常維護(hù)保養(yǎng)很重要，比如流動相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導(dǎo)致色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障，浪費(fèi)時間。

其次，操作人員在配制液相分析用樣品溶液時，Z好由同一個人單獨(dú)完成，以免不必要的偶然誤差。

4.液相安裝環(huán)境：

液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠(yuǎn)離振動、電磁干擾的屋內(nèi)的臺面上，有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開，一個是防止色譜基線噪音偏大，基線不穩(wěn)等，一個是為減少對人體的危害。

原文地址：http://www.easylabplus.com/index-news-describe-html-940.html

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液相色譜對于多數(shù)人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年、經(jīng)驗豐富的分析員都會習(xí)慣于一些錯誤的操作，經(jīng)常導(dǎo)致一些儀器故障。方便快捷的分析過程固然重要，但是為了多做樣品而忽略了一些必不可少的步驟，往往得不償失，哪些操作不能做？哪些懶兒不能偷？那些小概率的故障師傅沒教怎么辦？液相使用過程中有哪四大關(guān)鍵因素要注意？

流動相不過濾

因為塵?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動相中的任何固體微粒。流動相Z好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。

使用后沒有及時清洗泵

流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。

因此，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

流動相走空

泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，Z終產(chǎn)生漏液。

沒有流動相流出，又無壓力指示怎么辦？

可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。

壓力和流量不穩(wěn)了？

原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶?；蜃躺奈⑸锊糠侄氯?，這時，可卸下砂濾棒浸入流動相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。

壓力為啥過高或過低？

 可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應(yīng)逐段進(jìn)行。

在進(jìn)行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：

PS：（在液相色譜中對組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的。

梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。）

梯度洗脫的流動相選擇不當(dāng)

要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時更要引起注意。

當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。

忽略的空白梯度洗脫

梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強(qiáng)溶劑洗脫下來。

用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時產(chǎn)生氣泡。

忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化

混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當(dāng)二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的Z大壓力。

關(guān)于六通閥的正確使用和維護(hù)

①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。

②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的Z大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。

③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。

關(guān)于色譜柱的使用和維護(hù)

色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。

調(diào)節(jié)流速太快。。。

避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。

反沖色譜柱。。。

一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。

預(yù)柱和保護(hù)柱

選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

液相色譜在使用過程中主要有四大關(guān)鍵因素

1.液相色譜儀本身：

對于儀器本身一般不會有問題，特別是剛買回來的新儀器。對于儀器本身Z重要的就是儀器的校驗，剛買回來的儀器一般都是由賣家先對儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作（包括IQ、PQ、OQ），確認(rèn)順利通過后，再請國家或省級儀器檢定局的來校驗，檢定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年會對儀器進(jìn)行一次的內(nèi)部校驗，目的就是為了保證儀器的正常可運(yùn)行狀態(tài)。

2.色譜條件：

色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進(jìn)樣量。

流動相就涉及到配制流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質(zhì)對色譜結(jié)果的干擾。

色譜柱會因不同的品種而有不同的要求，但每根色譜柱都有它的清洗要求，這個在色譜柱說明書上都可以找到，一定要根據(jù)上面的要求進(jìn)行，否則會造成色譜柱效下降和色譜柱的使用壽命縮短，檢測波長也會因品種的不同有不同的要求，這里需要指出的是要注意觀察檢測器氘燈能量的變化，比如基線波動大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，都有可能是氘燈的能量不足所引起的，氘燈一般建議使用800小時，但實際上使用時間不止，可根據(jù)實際情況更換。

流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QC人員，但是作為研發(fā)人員，有時為了摸索條件或進(jìn)行方法耐用性驗證，會對流速進(jìn)行改變以評價方法的適用性。對于進(jìn)樣量因不同的品種也有不同規(guī)定，進(jìn)樣量這塊現(xiàn)在都使用自動進(jìn)樣，所以進(jìn)樣精密度都很好，不需強(qiáng)調(diào)什么。

3.操作人員：

首先，作為液相操作人員，一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)夜想的說明書，掌握液相硬件和軟件的操作，掌握日常的維護(hù)保養(yǎng)，掌握Z基礎(chǔ)故障的排除和維修。

一般液相的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只要嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行操作，一般不會出現(xiàn)問題，當(dāng)然啫喱需要特別指出的是對于液相的日常維護(hù)保養(yǎng)很重要，比如流動相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導(dǎo)致色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障，浪費(fèi)時間。

其次，操作人員在配制液相分析用樣品溶液時，Z好由同一個人單獨(dú)完成，以免不必要的偶然誤差。

4.液相安裝環(huán)境：

液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠(yuǎn)離振動、電磁干擾的屋內(nèi)的臺面上，有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開，一個是防止色譜基線噪音偏大，基線不穩(wěn)等，一個是為減少對人體的危害。

原文地址：http://www.easylabplus.com/index-news-describe-html-940.html

液相色譜對于多數(shù)人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年、經(jīng)驗豐富的分析員都會習(xí)慣于一些錯誤的操作，經(jīng)常導(dǎo)致一些儀器故障。方便快捷的分析過程固然重要，但是為了多做樣品而忽略了一些必不可少的步驟，往往得不償失，哪些操作不能做？哪些懶兒不能偷？那些小概率的故障師傅沒教怎么辦？液相使用過程中有哪四大關(guān)鍵因素要注意？

流動相不過濾

因為塵埃或其它任何雜質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動相中的任何固體微粒。流動相Z好在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。

使用后沒有及時清洗泵

流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。

因此，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

流動相走空

泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，Z終產(chǎn)生漏液。

沒有流動相流出，又無壓力指示怎么辦？

可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運(yùn)轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。

壓力和流量不穩(wěn)了？

原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶粒或滋生的微生物部分堵塞，這時，可卸下砂濾棒浸入流動相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。

壓力為啥過高或過低？

 可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應(yīng)逐段進(jìn)行。

在進(jìn)行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：

PS：（在液相色譜中對組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的。

梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。）

梯度洗脫的流動相選擇不當(dāng)

要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時更要引起注意。

當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。

忽略的空白梯度洗脫

梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強(qiáng)溶劑洗脫下來。

用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時產(chǎn)生氣泡。

忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化

混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當(dāng)二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的Z大壓力。

關(guān)于六通閥的正確使用和維護(hù)

①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。

②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的Z大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。

③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通常可用水沖洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。

關(guān)于色譜柱的使用和維護(hù)

色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。

調(diào)節(jié)流速太快。。。

避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。

反沖色譜柱。。。

一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。

預(yù)柱和保護(hù)柱

選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

液相色譜在使用過程中主要有四大關(guān)鍵因素

1.液相色譜儀本身：

對于儀器本身一般不會有問題，特別是剛買回來的新儀器。對于儀器本身Z重要的就是儀器的校驗，剛買回來的儀器一般都是由賣家先對儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作（包括IQ、PQ、OQ），確認(rèn)順利通過后，再請國家或省級儀器檢定局的來校驗，檢定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年會對儀器進(jìn)行一次的內(nèi)部校驗，目的就是為了保證儀器的正?？蛇\(yùn)行狀態(tài)。

2.色譜條件：

色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進(jìn)樣量。

流動相就涉及到配制流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大于18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質(zhì)對色譜結(jié)果的干擾。

色譜柱會因不同的品種而有不同的要求，但每根色譜柱都有它的清洗要求，這個在色譜柱說明書上都可以找到，一定要根據(jù)上面的要求進(jìn)行，否則會造成色譜柱效下降和色譜柱的使用壽命縮短，檢測波長也會因品種的不同有不同的要求，這里需要指出的是要注意觀察檢測器氘燈能量的變化，比如基線波動大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，都有可能是氘燈的能量不足所引起的，氘燈一般建議使用800小時，但實際上使用時間不止，可根據(jù)實際情況更換。

流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QC人員，但是作為研發(fā)人員，有時為了摸索條件或進(jìn)行方法耐用性驗證，會對流速進(jìn)行改變以評價方法的適用性。對于進(jìn)樣量因不同的品種也有不同規(guī)定，進(jìn)樣量這塊現(xiàn)在都使用自動進(jìn)樣，所以進(jìn)樣精密度都很好，不需強(qiáng)調(diào)什么。

3.操作人員：

首先，作為液相操作人員，一定要認(rèn)真學(xué)習(xí)夜想的說明書，掌握液相硬件和軟件的操作，掌握日常的維護(hù)保養(yǎng)，掌握Z基礎(chǔ)故障的排除和維修。

一般液相的操作規(guī)程也是有操作人員起草的，所以只要嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行操作，一般不會出現(xiàn)問題，當(dāng)然啫喱需要特別指出的是對于液相的日常維護(hù)保養(yǎng)很重要，比如流動相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導(dǎo)致色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障，浪費(fèi)時間。

其次，操作人員在配制液相分析用樣品溶液時，Z好由同一個人單獨(dú)完成，以免不必要的偶然誤差。

4.液相安裝環(huán)境：

液相色譜儀應(yīng)盡量安裝于水平、遠(yuǎn)離振動、電磁干擾的屋內(nèi)的臺面上，有條件的話盡量將液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分隔開，一個是防止色譜基線噪音偏大，基線不穩(wěn)等，一個是為減少對人體的危害

在生物實驗室中，每天會產(chǎn)生許多對生態(tài)環(huán)境和人類健康構(gòu)成危害的廢棄物，如實驗后的培養(yǎng)皿、試管、培養(yǎng)瓶、吸管吸頭、膠塞、微孔板、金屬器械、培養(yǎng)基、陽性樣液等生物垃圾。按照規(guī)定，生物廢棄物均須經(jīng)過嚴(yán)格的無害化處理。目前，實驗室最常用且有效的處理方式是高壓蒸汽滅菌，即放入滅菌器中121℃或132℃，時間15~20min，即可達(dá)到理想的滅菌效果。

在廢棄物滅菌處理過程中，一般先使用高壓滅菌袋（又稱生物垃圾袋，廢棄物處理袋等等）來盛放生物垃圾，再投放到滅菌鍋中。袋子可耐受121℃高溫高壓，滅菌中不會對滅菌鍋造成污染，滅菌后容易轉(zhuǎn)移運(yùn)輸，安全方便，同時袋子多種顏色可選，便于垃圾分類。

然而有的老師在使用過程中，會出現(xiàn)高壓滅菌袋破裂或融化等問題，導(dǎo)致廢棄物中樣液泄露到滅菌鍋底部，造成二次污染，也為后續(xù)清理帶來麻煩。遇到此類問題時，小編走訪各生物實驗室后，現(xiàn)總結(jié)如下：

1. 選擇耐溫性高、機(jī)械強(qiáng)度大的袋子

不同廠家生產(chǎn)的高壓滅菌袋，耐高溫、抗壓性能參差不一，有的不能耐持續(xù)高溫，有的會存在掉色、融化、破裂等現(xiàn)象，因此，建議用戶選擇正規(guī)品牌。

L75高壓滅菌袋是由Exceed?茂金屬、HDPE等材質(zhì)復(fù)合制作，特殊的工藝使其與普通聚乙烯材質(zhì)滅菌袋相比，具有更高的機(jī)械強(qiáng)度、耐持續(xù)高溫等顯著特點(diǎn)。完全耐受121℃，多種顏色、規(guī)格可選。

2. 高壓滅菌器內(nèi)實際溫度不要超125℃

大多數(shù)高壓滅菌袋主要成分是聚乙烯材質(zhì)，其熔點(diǎn)溫度125℃，因此滅菌溫度不能超過125℃，否則袋子會融化。然而有些國產(chǎn)的高壓滅菌鍋，在溫度參數(shù)偏上限設(shè)定或溫度控制不穩(wěn)定，導(dǎo)致鍋內(nèi)實際溫度高于控制面板上顯示溫度，同時溫度傳感器響應(yīng)慢，在加熱升溫過程中過沖較大。如設(shè)定121℃，鍋內(nèi)實際溫度可能會過沖到125℃以上。

小編的解決方案：用經(jīng)計量過的留點(diǎn)溫度計，放入鍋體內(nèi)部測量滅菌過程中的max溫度值；如有條件，放入無線溫度驗證探頭或滅菌器廠家配件培養(yǎng)基溫度傳感器，通過電腦可以實時監(jiān)測到滅菌鍋內(nèi)部所有溫度變化值，若溫度過高，需要重新校正設(shè)備。

3. 在滅菌時，高壓滅菌袋要敞口放置

高壓滅菌袋放入鍋內(nèi)后，袋口不要密封，如打結(jié)或扎得太緊，必須讓袋口留有足夠的空隙，讓蒸汽在袋內(nèi)充分循環(huán)進(jìn)出，保證理想的滅菌效果。如果系住袋口，袋內(nèi)產(chǎn)生壓力，袋子非常容易漲破，甚至造成更嚴(yán)重的危險（袋子漲破后，廢棄物或濺到鍋體內(nèi)部安全閥孔上，造成堵塞后，將會產(chǎn)生安全風(fēng)險）。

4. 廢棄物的裝填量不宜過多

高壓滅菌袋在盛裝生物廢棄物時，嚴(yán)禁裝滿，裝填量控制在70%即可。過多的裝填量會導(dǎo)致內(nèi)部蒸汽循環(huán)不暢，受熱不均勻，滅菌不徹底；同時也會造成內(nèi)部壓力大，溫度過高，袋子有漲破或融化的可能；袋內(nèi)液體廢棄物占比過大，會產(chǎn)生較大的正壓，袋子也會容易破裂。

5. 脈動真空滅菌器需注意

在使用脈動真空式滅菌器時，不要使用兩側(cè)封口的滅菌袋，因為鍋內(nèi)真空負(fù)壓大，袋子被擠壓變形，容易將袋子側(cè)面壓縮破裂，導(dǎo)致生物垃圾泄露，若袋內(nèi)放有吸頭或尖銳的生物制品，更容易有刺破的風(fēng)險。如L75系列高壓滅菌袋，采用特殊的薄膜共擠工藝，一體成型，兩側(cè)無焊接，筒狀薄膜，底部寬形高頻封口，牢固防漏，可在蒸汽脈動真空負(fù)壓下高溫高壓滅菌。

綜上所述，用戶在選用高壓滅菌袋時，應(yīng)選擇耐溫性高、機(jī)械強(qiáng)度大的正規(guī)品牌的袋子；滅菌過程中，袋口敞開放置，勿一次性盛裝過多廢棄物，定期校準(zhǔn)滅菌鍋內(nèi)真實溫度，保證實驗順利進(jìn)行。