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  智天使sea 2016-03-25 00:00:00

  組織細(xì)胞的破碎方法很多，有機(jī)械方法、物理方法、化學(xué)方法和生物化學(xué)方法等。在破碎前，材料常需要預(yù)處理，如動(dòng)物材料要除去與實(shí)驗(yàn)無關(guān)甚至有妨礙的結(jié)締組織，脂肪組織和血污等，植物種子需要除殼，微生物材料需將菌體和發(fā)酵液成分分開等。不同實(shí)驗(yàn)規(guī)模、不同實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)要求，使用的破碎方法和條件也不同。一些堅(jiān)韌組織，如肌肉、植物的根莖等，常需要強(qiáng)烈的攪拌或研磨作用，才能把其組織細(xì)胞破壞。而比較柔軟的組織如肝、腦等，用普通的玻璃勻漿器即可達(dá)到完全破壞細(xì)胞的目的 破碎技術(shù)中細(xì)胞破碎法包括 機(jī)械法和非機(jī)械法．機(jī)械法又包括高壓勻漿、高速珠磨、超聲波破碎等方法。非機(jī)械法包括化學(xué)法、酶解法、滲透壓沖擊法、凍結(jié)融化法、干燥法。細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和破碎方法都會(huì)對(duì)細(xì)胞破碎產(chǎn)生影響。了接細(xì)胞壁的組成對(duì)于選擇破碎方法非常重要。在微生物中各種生物的細(xì)胞雖小但是每一種都有其特有的組成方式。例如：細(xì)菌球菌直徑0.5-1um桿菌直徑0.5-1um ，長(zhǎng)為直徑1-幾倍螺旋菌直徑03-1um，長(zhǎng)1-50um 細(xì)菌大小也不是一成不變的細(xì)胞重量10-13-10-12g ，每g細(xì)菌基本結(jié)構(gòu)是細(xì)胞不變部分，每個(gè)細(xì)胞都有，如細(xì)胞壁、膜、核。特殊結(jié)構(gòu)是細(xì)胞可變部分，不是每個(gè)都有，如鞭毛、莢膜、芽孢。革蘭氏陽性菌和陰性菌細(xì)胞壁的主要組成也是不同的，因而對(duì)細(xì)胞破碎的影響也不一樣革蘭氏陽性菌的細(xì)胞壁主要由肽聚糖層（約20－80nm）組成 ，而革蘭氏陰性菌肽聚糖層較薄，僅2－3nm，在肽聚糖層外還有兩層外壁層。外壁層約8－10nm，所以革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁較厚，較難破碎。對(duì)于霉菌來說 霉菌的細(xì)胞壁較厚，約100－250nm。酵母菌酵母的細(xì)胞壁比革蘭氏陽性菌的細(xì)胞壁厚，更難破碎。　　　　　　　　　　　 植物細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生的次生代謝物通常在液泡內(nèi)濃集，而不釋放到培養(yǎng)基中.為了回收這類產(chǎn)物，必需破碎細(xì)胞，這是一種不能由培養(yǎng)物進(jìn)一步生產(chǎn)產(chǎn)物的高價(jià)方法.由植物細(xì)胞培養(yǎng)物生產(chǎn)次生代謝物的經(jīng)濟(jì)實(shí)用系統(tǒng)需要在不破壞細(xì)胞的條件下重復(fù)回收細(xì)胞產(chǎn)物的方法.這種技術(shù)已由劍橋大學(xué)的N.J.Kilby和 Bristol Polytechnic的C.S.Hunter研究成功. Kilby和Hunter報(bào)道，當(dāng)施以1.02MH_2連續(xù)超聲波達(dá)30秒鐘以上時(shí)，懸浮培養(yǎng)的甜菜很多基因工程產(chǎn)物都是胞內(nèi)物質(zhì)，必須將細(xì)胞破壁，使產(chǎn)物得以釋放，才能進(jìn)一步提取，因此細(xì)胞破碎是提取胞內(nèi)產(chǎn)物的關(guān)鍵步驟，破碎方法的得當(dāng)與否，直接影響到所提取產(chǎn)品的產(chǎn)量、質(zhì)量和生產(chǎn)成本。以釋放胞內(nèi)物質(zhì)為主要目的的細(xì)胞破碎條件，采用均質(zhì)破碎法、超聲波法、加酶法和堿性自溶法等對(duì)谷氨酸菌作進(jìn)行破碎試驗(yàn)，并對(duì)其相應(yīng)的工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化研究。結(jié)果表明，使用堿性自溶法在pH10.0，溫度70℃，干菌濃度為10％時(shí)，自溶40min后蛋白質(zhì)的釋放率接近80％，表明該法對(duì)釋放胞內(nèi)物質(zhì)的作用效果較理想細(xì)胞破碎就是 破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，使胞內(nèi)產(chǎn)物得到Z大程度的釋放。破碎酵母釋放乙醛脫氫酶的研究中乙醛脫氫酶（ALDH）是一種胞內(nèi)酶，在從酵母中分離提取ALDH的過程中，破碎細(xì)胞是其中的關(guān)鍵步驟之一。

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  與會(huì)者牧儇 2018-03-11 00:00:00

  1，機(jī)械破碎處理量大、破碎效率高、速度快，主要靠均質(zhì)作用和球磨碾磨作用；操作時(shí)，細(xì)胞遭受強(qiáng)大的機(jī)械剪切力而被破碎。采用機(jī)械法，發(fā)熱是一個(gè)主要問題。 2，化學(xué)滲透法與機(jī)械破碎法相比：速度低，效率差，且化學(xué)或生化試劑的添加形成新的污染，給進(jìn)一步的分離純化增添麻煩。但化學(xué)滲透法選擇性高，胞內(nèi)產(chǎn)物的總釋放率低，可有效YZ核酸的釋放，料液粘度小，有利于后處理。

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