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如何選擇液相色譜儀中溶劑過濾膜類型

星霜的小天天 2017-09-13 12:41:04 554  瀏覽
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全部評論(1條)

  • 明SaME赱 2017-09-14 00:00:00
    是過濾樣品的?還是過濾流動相的? 反正這兩個是一個意思。 首先是水膜還是有機(jī)膜。 一般來說,乙腈超過了15%,甲醇超過了30%的時候,水膜就有可能會化掉。所以超過了這個比例Z好就用有機(jī)膜過濾。流動相過濾膜和樣品過濾膜都是一樣的。 接下來是孔徑。 過濾膜的孔徑分兩種(常見的)4.5um和2.2um的。這個是根據(jù)色譜柱來定的。 一般的色譜柱都是5um*4.6mm*250mm(也有柱長是150mm的),主要是這個5um的粒徑。 如果是5um,你選擇4.5um的濾膜就可以了。保證過濾后的流動相能順利通過色譜柱。 不過現(xiàn)在有很多柱子粒徑比較小。比如3.5um,3.0um,這種情況就要選擇2.2um的濾膜了。 就是說,濾膜過濾的孔徑要小于色譜柱粒徑。這個也是流動相和樣品過濾膜都是一樣的。 還有一種情況比較特殊:就是樣品比較臟的時候。比如合成過程中的中間體,比如制劑中有大量粉狀輔料的時候,或者說過濾懸濁液的時候。為了保險起見,Z好用0.22um的濾膜。這個只是針對個別樣品而言的。

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制備液相色譜儀如何選擇參數(shù)

在分析化學(xué)領(lǐng)域,制備液相色譜儀(Preparative Liquid Chromatography, Prep-LC)因其高分離效率和可實現(xiàn)大規(guī)模分離的能力,被廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)、天然產(chǎn)物分離以及生物制品純化中。制備液相色譜儀的性能不僅依賴于設(shè)備本身,更取決于操作參數(shù)的科學(xué)選擇。本文將系統(tǒng)探討制備液相色譜儀參數(shù)選擇的方法,以幫助實驗人員優(yōu)化分離效果、提高產(chǎn)物純度和回收率。


流動相的選擇是制備液相色譜儀操作中關(guān)鍵的因素之一。流動相不僅影響分離效率,還直接決定峰形、分辨率及產(chǎn)物回收率。通常,應(yīng)根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)選擇極性適中的溶劑體系。例如,反相色譜(RP-HPLC)中常用水-乙腈或水-甲醇體系,通過調(diào)節(jié)有機(jī)溶劑比例來實現(xiàn)目標(biāo)化合物的佳洗脫。pH值和緩沖鹽的選擇也需要結(jié)合樣品的酸堿特性,以保證分離過程中化合物的穩(wěn)定性。


柱子的選擇與填料特性密切相關(guān)。制備液相色譜儀常用的柱型包括C18、C8及硅膠柱,不同的固定相對樣品分離能力存在顯著差異。在選擇柱子時,應(yīng)綜合考慮樣品分子量、極性及目標(biāo)產(chǎn)物的疏水性。對于高分子量或極性較大的化合物,可優(yōu)先選擇粒徑較小、孔徑較大的柱子,以提高分離效率和峰容量。柱子的長度和直徑也會影響流速和分辨率,操作人員需根據(jù)分離規(guī)模合理匹配。


流速和梯度條件的優(yōu)化也是制備液相色譜儀參數(shù)選擇的重要環(huán)節(jié)。流速過高會降低分離分辨率,而流速過低則會延長實驗時間,影響效率。因此,應(yīng)根據(jù)柱子規(guī)格及樣品特性確定佳流速范圍。梯度洗脫通常用于復(fù)雜樣品的分離,通過緩慢調(diào)節(jié)有機(jī)溶劑濃度,可實現(xiàn)目標(biāo)組分的充分分離并避免雜峰干擾。等度洗脫在樣品組成簡單時能有效縮短操作時間,提高產(chǎn)物收集效率。


樣品上樣量與進(jìn)樣方式同樣影響制備液相色譜儀的分離效果。上樣量過大可能導(dǎo)致柱過載,引起峰展寬和分辨率下降;而上樣量過小則會降低產(chǎn)物回收率。實驗中,應(yīng)根據(jù)柱容量和目標(biāo)產(chǎn)物濃度精確控制進(jìn)樣量。采用連續(xù)進(jìn)樣或多次分批進(jìn)樣可以在保證分離效果的同時提高總產(chǎn)量。


檢測方式和收集策略是制備液相色譜操作中不可忽視的部分。紫外檢測器(UV)、蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)及質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)等技術(shù)可提供精確的峰識別和定量信息。在收集目標(biāo)組分時,應(yīng)結(jié)合檢測信號設(shè)置收集閾值,避免雜質(zhì)混入,同時確保產(chǎn)物純度和收率達(dá)到優(yōu)狀態(tài)。


制備液相色譜儀的參數(shù)選擇是一個綜合考慮樣品性質(zhì)、分離目標(biāo)及設(shè)備性能的系統(tǒng)工程。從流動相、柱子、流速及梯度條件到上樣量和檢測策略,每一個環(huán)節(jié)都需精細(xì)調(diào)控,以實現(xiàn)高效、穩(wěn)定的分離效果。只有在充分理解樣品特性和分離機(jī)理的基礎(chǔ)上進(jìn)行參數(shù)優(yōu)化,才能大限度地提升制備液相色譜儀的應(yīng)用價值,為科研及工業(yè)生產(chǎn)提供可靠支持。



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hplc溶劑選擇中的關(guān)鍵考慮因素

        選擇用作HPLC分析流動相的溶劑是色譜分析過程的關(guān)鍵步驟。到現(xiàn)在為止,沒有一種能夠滿足所有分析需求的通用溶劑,而且根據(jù)分析要求所使用的溶劑組合會變得更多。選擇合適的溶劑是根據(jù)其物理性質(zhì)以及與樣品、色譜柱固定相的相容性。

        流動相溶劑選擇的一般要求是:溶劑應(yīng)當(dāng)是高純度,溶劑與固定相不互溶,并能保持色譜柱的穩(wěn)定性,建議使用純水或者液相色譜專用的溶劑;溶劑的性能與使用的檢測器應(yīng)當(dāng)匹配;溶劑對樣品應(yīng)有足夠的溶解能力,樣品要完全溶于流動相。如果有不溶的樣品將導(dǎo)致流動相分離或懸浮,會導(dǎo)致后續(xù)一系列的操作問題;溶劑應(yīng)具有低的粘度和適當(dāng)?shù)偷姆悬c;盡量避免使用具有顯著毒性的溶劑。

        除此之外本文還討論了選擇合適的流動相溶劑的一些其他重要的考慮因素。

        成本

        成本是一個重要的考慮因素,因為HPLC需要高純度等級的溶劑,特別在大型實驗室中經(jīng)??吹綌?shù)十個HPLC系統(tǒng)全天候運(yùn)行。這意味著每天會大量消耗高純度的溶劑,因此成本方面的考慮至關(guān)重要。想要既符合實驗要求又價格比較實惠的溶劑,很多時候都不能同時滿足。如果這個時候溶劑還沒有充分使用,造成浪費(fèi),就更得不償失了。

        恒譜生2μ,5μ,10μ,20μm入口溶劑過濾器吸濾頭,不會將空氣引入系統(tǒng),無氣泡進(jìn)入流動相管路,儲液瓶溶劑抽取利用率可達(dá)99%以上,大大減少瓶底溶劑因無法凈真空吸取而造成的浪費(fèi)。

 

         吸光度

        通常,HPLC中使用的檢測器基于樣品成分對光的吸收。在選定的波長范圍內(nèi),流動相成分的固有吸光度不能干擾樣品的吸光度。理想情況下,流動相溶劑在目標(biāo)波長范圍下沒有吸收光線是很好的。

        揮發(fā)性

        流動相溶劑應(yīng)具有低揮發(fā)性。高揮發(fā)性溶劑可能導(dǎo)致流動相組成在使用和存儲過程中發(fā)生變化,這會導(dǎo)致色譜圖的重現(xiàn)性很差。

        黏度

        所選的溶劑應(yīng)具有低粘度讓流過色譜柱的流體不會產(chǎn)生高背壓。色譜柱背壓形成的原因有很多,樣品的易吸附機(jī)制也可能會和柱前端的硅膠表面游離的硅醇基發(fā)生作用導(dǎo)致色譜柱背壓升高。如果有顆粒物堵塞柱頭也會導(dǎo)致色譜柱背壓升高。為了防止色譜柱背壓升高,我們可以選擇在液相系統(tǒng)中加入在線過濾器,在線溶劑過濾器安裝在液相泵和進(jìn)樣器之間,能夠去除溶劑中的顆粒物,避免它們進(jìn)入進(jìn)樣器,從而防止堵塞。HPLC技術(shù)對到達(dá)檢測器的流動相的組成非常敏感,因此必須通過在線過濾器除去溶劑里的固體懸浮液。脫氣也是去除任何少量溶解空氣的必要條件,否則會導(dǎo)致流量限制或雜散峰。

        恒譜生不銹鋼在線過濾器安裝在泵的出口和進(jìn)樣閥之間,采用濾杯式結(jié)構(gòu)受液面積大,使用壽命長,既可有效的防止顆粒進(jìn)入系統(tǒng),又能保證足夠的液流。恒譜生液相超高壓在線過濾器色譜耗材配件抗腐蝕性好;清洗或更換簡便;不易堵塞,壽命產(chǎn)品;死體積少,不漏液,低背壓,有多種規(guī)格可供選擇。

 

        惰性

        所選溶劑應(yīng)對樣品組分,色譜柱填充物和色譜柱材料呈惰性。如果與這些成分中任何一種有反應(yīng)性都可能導(dǎo)致形成沉淀物,氣體或其他反應(yīng)產(chǎn)物,從而破壞系統(tǒng)性能。溶劑與樣品接觸后不應(yīng)形成單獨(dú)的相。換句話說,應(yīng)該與溶劑完全混溶。

        恒譜生科學(xué)儀器有限公司是致力于研發(fā)制造高質(zhì)量色譜耗材配附件的高科技生產(chǎn)廠家,我們在無氣泡較高凈化能力的溶劑進(jìn)樣過濾器、超高壓在線過濾器、較少死體積色譜保護(hù)柱與卡套、0.1微米高光潔度色譜柱柱管、鬼峰去除柱、管路接頭等領(lǐng)域具有十多年豐富的生產(chǎn)經(jīng)驗和較強(qiáng)大的制造技術(shù)能力。


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3.產(chǎn)品種類齊全,覆蓋色譜級、農(nóng)殘級、LCMS級、超干溶劑

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針式過濾器及濾膜的選擇,你真的會了嗎?

關(guān)于針式過濾膜


針式過濾器由刻度針管,濾頭組成,其中濾頭包含不同特性的濾膜,可根據(jù)實驗需求,選擇不同性能的濾膜。


(2)、選擇針式過濾器考慮因素


1、考慮有效過濾面積(EFA)

流體中的微粒會影響過濾器的使用壽命,當(dāng)顆粒被過濾器移除時,他們也阻塞了空隙,減少了過濾器中的可用部分。相比“干凈”的流體,負(fù)載微粒的流體更加容易堵塞過濾器,增加EFA(有效過濾面積)可以延長過濾器使用壽命。
2、考慮孔徑大小
根據(jù)分析儀器選擇合適的孔隙大小。UV/V分光光度計可能只需要1um的過濾;HPLC分析可能需要0.45um的過濾,UHPLC將需要0.2um的過濾,由于體積,填料和間隙的大小,過濾材料的孔隙大小取決于最小粒子直徑。這些粒子將被額定孔徑的過濾器有效的攔截。

(3)幾種常見的過濾膜特性及應(yīng)用

1.水系膜(混合纖維素酯CN-CA)

      特性:孔徑均勻,孔隙率高,無介質(zhì)脫落,質(zhì)地薄,阻力小,濾速快,成本低,但不耐有機(jī)溶液及強(qiáng)酸強(qiáng)堿。

      應(yīng)用:飲用水、地表水、井水等,除菌過濾,溶液中微粒及油類不溶物的分析,水質(zhì)污染指數(shù)測定,氣體、油類、飲料、酒等微粒和細(xì)菌過濾。為樣品前處理過濾中最為廣泛使用的濾膜之一。

2.尼龍膜(聚酰胺 NYLON)

     特性:耐溫性能好,可耐121°C,飽和蒸汽高壓消毒30分鐘,最GAO工作溫度60°C,化學(xué)穩(wěn)定性好,能耐稀酸稀堿等多種有機(jī)無機(jī)化合物、溶劑。

     應(yīng)用:適用于電子、微電子、半導(dǎo)體工業(yè)水過濾,組織培養(yǎng)基、藥液、飲料、高純化學(xué)品、水及有機(jī)溶液流動相的過濾。

3.PVDF膜(聚偏氟乙烯)

      特性:膜機(jī)械強(qiáng)度高,抗張強(qiáng)度好,具有良好的耐熱性及化學(xué)穩(wěn)定性,蛋白吸附極低,具較強(qiáng)的疏水性。

      應(yīng)用:氣體及蒸汽過濾,高溫液體過濾,組織培養(yǎng)基,添加劑等除JUN過濾,溶劑和化學(xué)原料凈化過濾。

4.PTFE(聚四氟乙烯)

      特性:具有廣泛的化學(xué)兼容性,耐溫性好,抗強(qiáng)酸強(qiáng)堿,化學(xué)腐蝕性較強(qiáng)的溶劑及氧化劑。

      應(yīng)用:化工、醫(yī)藥、環(huán)保、電子、食品、能源等領(lǐng)域,幾乎能過濾所有的有機(jī)溶液。 





2021-12-14 19:55:29 921 0