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  falubna 2016-12-03 00:00:00

  離心可以使同一溶劑中不同物質(zhì)分層。 離心技術(shù)，是蛋白質(zhì)、酶、核酸及細(xì)胞亞組分分離的Z常用的方法之一，也是生化實(shí)驗(yàn)室中常用的分離、純化或澄清的方法。尤其是超速冷凍離心已經(jīng)成為研究生物大分子實(shí)驗(yàn)室中的常用技術(shù)方法。 離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。 原理： 將樣品放入離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的離心管內(nèi)，離心機(jī)驅(qū)動時，樣品液就隨離心管做勻速圓周運(yùn)動，于是就產(chǎn)生了一向外的離心力。由于不同顆粒的質(zhì)量、密度、大小及形狀等彼此各不相同，在同一固定大小的離心場中沉降速度也就不相同，由此便可以得到相互間的分離。 常見下列三大類型： 1、差速離心法：通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。 密度梯度離心法：離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為： 1）速度區(qū)帶離心法。 離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油等物質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。 2）預(yù)制梯度等密度離心法。 要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。 3）自成梯度等密度離心法。 某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會自成梯度，需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。 3、沉降平衡離心法：根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。

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