福利，福利！限時免費 | UC Davis實驗動物ZX主任及藥理系教授在線分享微循環(huán)研究成果和腦缺血模型制作經(jīng)驗。

非常榮幸能邀請到Y(jié)i-Je (Jay) Chen和Madeline Nieves-Cintrón在線上與瑞沃德的VIP客戶進行微循環(huán)研究學(xué)術(shù)交流。

本次課程，我們預(yù)留少量免費名額，作為福利贈送給儀器網(wǎng)的用戶，如果你正想了解【嚙齒類動物性別、年齡與腦缺血相關(guān)關(guān)系】；【缺血性卒中炎癥損傷】；【正常與缺血狀態(tài)的血管功能調(diào)節(jié)機制】……那么千萬不要錯過這次交流會！機會難得，先到先得，趕快來鎖定席位吧！。

直播內(nèi)容

BBB與中風(fēng)相關(guān)研究成果分享--微循環(huán)研究學(xué)術(shù)交流會 （中英文雙語交流會）

直播時間

2020/8/21上午10:00-11:30

直播形式

ZOOM在線學(xué)術(shù)報告+交流分享

主講嘉賓： Yi-Je (Jay) Chen  PhD

Assistant Professor 
Director of the Animal Models Core in the Cardiovascular Research Institute, 
UC Davis Medical School
加利福尼亞大學(xué)戴維斯分校 UC Davis 動物實驗ZX主任

報告主題

Blood-Brain Barrier (BBB) Endothelial Cells：Pathophysiology in Ischemic Stroke

研究方向Research Interests
He studies Ion channels in BBB endothelial cells and their contributions to edema formation and inflammation in the early stages of ischemic stroke.

主要成果Research Output：

Article 22; Citations 437; h-Index 10; the highest Scopus citations up to 78.

2011年至今總計發(fā)表20+SCI論文，引用高達437次，h-Index高達10，有的Scopus citations達到78

主講嘉賓： Madeline Nieves-Cintron  PhD
Assistant Professor In Residence, UC Davis Medical School

加利福尼亞大學(xué)戴維斯分校 UC Davis 藥學(xué)系 副教授

報告主題：AKAP5 complex in hyperglycemia modulation of vascular function

研究方向Research Interests：She studies vascular smooth muscle ion channels, emphasizing ionic control of intracellular calcium and smooth muscle contractility, for their responses to health-relevant conditions such as diabetes, hypertension, and environmental pollutants. 

主要成果Research Output：

Article 30; Citations 1404; h-Index 17; the highest Scopus citations up to 283.
總計發(fā)表文獻30; 引用高1404; h-Index 高達17; 有的Scopus citations達到 283.

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實驗動物該怎么選擇？

不同腦缺血模型，弄不清對應(yīng)構(gòu)建方法？

常用的血流監(jiān)測技術(shù)，你都掌握了嗎？

「全線賦能·“沃”的實驗」之實驗方法實戰(zhàn)教程

直播第五期為大家聚焦

《腦缺血模型構(gòu)建及檢測》

從實驗動物的選擇、不同模型的分類

各個模型的構(gòu)建方法到血流監(jiān)測技術(shù)

兩位老師將進行綜合詳細(xì)的講解

全面助力你的科研實驗研究

直播時間

6月21日（周二）19：00

報名方式

識別上方二維碼，立即免費報名

主題：腦缺血模型構(gòu)建

• 腦缺血研究背景

• 腦缺血動物模型構(gòu)建

• 腦缺血模型構(gòu)建實驗儀器

講師：孫紹強

瑞沃德行業(yè)解決方案專家，在膜片鉗/鈣成像/干細(xì)胞誘導(dǎo)方面有著豐富的實驗經(jīng)驗，曾參與多項重大研發(fā)及自然科學(xué)基金項目，曾在Cell Stem Cell 上發(fā)表論文，專注于神經(jīng)疾病，腦缺血及神經(jīng)退行性疾病模型制備和機制研究，已為上百家客戶提供專業(yè)的神經(jīng)疾病整體解決方案。

主題：腦卒中研究中的血流監(jiān)測技術(shù)

• 激光多普勒

• 激光散斑

• 超聲多普勒

• 核磁共振成像

• 雙光子顯微鏡

講師：殷維君

瑞沃德微循環(huán)監(jiān)測解決方案專家，在生理信號監(jiān)測和血流血氧成像領(lǐng)域擁有豐富的經(jīng)驗，主導(dǎo)動物活體成像解決方案的設(shè)計及優(yōu)化，專注于臨床及臨床前微循環(huán)監(jiān)測解決方案的構(gòu)建。

上期直播間互動問題

這次我們?nèi)繛樾』锇榻獯?/b>

Q1：組織剪切的大小有沒有具體要求，腫瘤組織一般2-4mm可以嗎？

A1：這要根據(jù)組織類型去判斷，一般會預(yù)處理成10mm左右的組織塊，太大可能會導(dǎo)致處理不完全，太小可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡增加，甚至導(dǎo)致樣本變稠等。

Q2：細(xì)胞活率80%就可以了嗎，看到一些資料寫的都要90%以上。

A2：這個需要根據(jù)下游實驗的需求靈活調(diào)整，如果樣本存活率不能達到要求的話，除了優(yōu)化實驗條件以外，還可以通過一些死細(xì)胞去除的試劑來優(yōu)化已獲得的樣本。

Q3：低溫解離細(xì)胞與常規(guī)的37度制備單細(xì)胞優(yōu)勢分別是什么？區(qū)別是什么？

A3：37℃條件下進行組織解離，由于細(xì)胞轉(zhuǎn)錄活躍，因此解離過程中基因表達可能會發(fā)生改變，可能會干擾應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)基因表達，所以在進行snRNA-seq時可以通過使用冷活性酶釋放細(xì)胞核，同時一些熱敏感或者脆弱的細(xì)胞更適合采用低溫解離的分離方式，但是低溫條件對一些質(zhì)密難解離的組織的處理效率可能會降低。

另外，溫度對不同細(xì)胞種類也有一定影響，比如在進行腦組織解離時，熱解離可能會影響神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞的獲取，但是會大量富集小膠質(zhì)細(xì)胞，所以在進行組織解離時，根據(jù)獲得目的細(xì)胞的需求要靈活調(diào)整解離方案。

Q4：裂紅處理有什么注意事項嗎？

A4：如果直徑6-8μm的細(xì)胞占比較高，且有核率偏低，這表明紅細(xì)胞含量可能較多，需要進行紅細(xì)胞裂解，如果紅細(xì)胞裂解依然不干凈，不建議增大裂解體系，建議適當(dāng)延長裂紅時間，或適當(dāng)增加裂紅次數(shù)。

Q5：流式染色時間及溫度如何選擇？

A5：染色本身取決于抗體抗原之間的結(jié)合能力，染色時間和溫度，受限于抗體濃度，一般根據(jù)選擇抗體的說明書推薦的濃度和孵育時間、溫度選擇。我的實踐經(jīng)驗：當(dāng)不清楚說明書的情況，我會選擇室溫染色12-15min（取決于抗體濃度微調(diào)），或4度冰上30min。注意染色時間盡量不要讓細(xì)胞破損，否則死細(xì)胞碎片會影響流式結(jié)果。此外細(xì)胞消化完畢后應(yīng)該盡快染色處理，特別是一些凋亡染色、胞內(nèi)酶染色為保持細(xì)胞物質(zhì)活性，應(yīng)盡快染色。

Q6：請問流式細(xì)胞實驗中單抗進行熒光需要什么樣的對照？

A6：關(guān)于對照設(shè)置，這個比較復(fù)雜，一般我們是選擇同型對照作為陰性對照組，得到的結(jié)果往往是比較好的。所謂的同型對照就是同種屬同亞型、相同熒光標(biāo)記物、使用劑量和濃度相同，且屬于非特異性結(jié)合的抗體為同型對照組。通常用來消除抗體與抗原的非特異性結(jié)合造成的背景染色。 

還有一類就是最常見的純陰性對照，檢測細(xì)胞群不進行任何抗體處理，直接進行流式檢測，這就是簡單消除細(xì)胞和溶劑本身的影響，這種方法的好處是節(jié)約抗體，畢竟抗體很貴。

Q7：如何減少補償?shù)母蓴_？

A7：補償干擾往往是多激光的流式儀器才會發(fā)生一定干擾情況，此時，可以根據(jù)抗體公司提供的染料搭配方案選擇比較好，也就是發(fā)射光譜的波長峰盡量不重疊的染料，這樣補償干擾會盡量消除。因此，往往需要查看染料的波長范圍，此外，對于4色以上的多色標(biāo)記情況，一般不常見，此時往往染料的波長范圍難以避免的重疊，這時候，推薦使用抗體公司推薦的配色方案，盡量避免發(fā)射光譜的重疊。此外很多流式儀器配套軟件都帶一定算法對補償進行修正，可以適當(dāng)修正這個影響。

Q8：細(xì)胞自發(fā)熒光如何解決？

A8：細(xì)胞自發(fā)熒光往往是細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)帶有熒光，植物細(xì)胞因為葉綠素原因會自帶一定熒光，然后一些藥物處理下，藥物本身帶有發(fā)色基團，也可能自熒光，此時，純陰性對照的設(shè)置可以補償一定的情況。然后就是染料的選擇情況，染料熒光波長范圍避免與細(xì)胞自發(fā)熒光的波長的重疊，這樣會比較好一些。我之前做藥物的細(xì)胞凋亡實驗時候，考慮到藥物的情況，就沒有使用常見的凋亡檢測的Annexin V染料，而改用Annexin V-APC 。盡量設(shè)置純陰性對照、有條件做下同型對照，往往可以在數(shù)據(jù)處理時候適當(dāng)減少部分因素的影響。這樣流式的結(jié)果會更好。

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