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  氯化鉀甩賣 2017-03-13 00:00:00

  如何建立薄層色譜法測定有關物質的方法 有關物質是研究藥品中除主成分以外的雜質，它可能是原料藥合成過程中帶入的原料、中間體、試劑、降解物、副產物、聚合體、異構體以及不同晶型、旋光異構的物質，也可能是制劑過程中產生的降解物，或是在貯藏、運輸、使用過程中產生的降解物等。這些雜質的存在直接反映藥品的有效性和安全性，故要對其進行研究，特別是在藥品申報的質量研究資料中需建立其檢測方法，并根據生產、穩(wěn)定性考核等實際情況考慮是否在質量標準中制訂該檢查項，規(guī)定其限度。目前，有關物質的常用測定方法有GX液相色譜法(HPLC法)和薄層色譜法(TLC法)。 1．測定方法類型 常用的方法有雜質對照品法（適用于已知雜質）和自身（稀釋）對照法（適用于一般雜質檢查，雜質成分少且尚不能取得雜質對照品）。目前國內由于難以獲得雜質對照品、故一般均采用自身對照法。 2．展開劑的確定（即專屬性試驗） 專屬性的研究是提供被分析物在雜質和輔料存在時能被區(qū)分的證明，該點是色譜條件建立的關鍵。通常采用在被分析物的對照品或精制品中加入一定量的雜質或輔料，證明色譜條件可將各雜質與被分析物分離[1]。這里的關鍵是：將多少量的雜質加入到多少量的主成分中。正確的作法是將1%(w/w)濃度量的各雜質加入到濃度的主成分中，配制這樣的溶液來 驗證系統(tǒng)適用性。之所以如此配制，目的是模仿樣品中有可能存在的狀態(tài)，即有少量（1%左右）雜質存在時是否能與主成分達到完全分離，只有這樣才能比較客觀、科學地反映樣品中實際存在情況的（見圖1）；而不應把該溶液配制成：主成分與中間體相同濃度的。因為一者實際檢測時樣品中不可能存在此種情況；二者該濃度不易確定，目前國內申報資料中一般的作法均是配制成較低的一致濃度，這樣各斑點當然易于完全分離了，但在實際測定時，由于主斑點急劇增大，很易將相鄰雜質包含于主成分斑點中。同樣，質量標準中的系統(tǒng)適用性試驗用溶液的配制方法亦如此。 3．檢出條件的確定 其基本出發(fā)點是：主成分與相關雜質均應在該條件下顯色，且在相同濃度下，斑點大小應基本一致。薄層板的類型根據被測物質的性質來選用，測定有紫外吸收的物質通常選用GF254或GF365板；測定無紫外吸收、需噴顯色劑的，常選用硅膠G板或H板，選用該類薄層板時，顯色方法根據被測物質的結構式選取，但當有多個顯色方法時，應分別進行試驗，選取靈敏度Z高的顯色方法。如醋酸氫化可的松有關物質的測定，ZG藥典2000年版采用堿性四氮唑藍試液顯色，美國藥典26版采用硫酸-乙醇(10:90)溶液顯色，兩者均為激素類藥物的顯色方法。醋酸氫化可的松屬于激素類中的腎上腺皮質激素，四氮唑法是腎上腺皮質激素的重要顯色方法；而硫酸-乙醇顯色法則主要是針對激素類中的雌激素的顯色反應，對于屬于腎上腺皮質激素類的醋酸氫化可的松則反應活性不強，結果兩法的靈敏度相差10倍以上。因此，檢出條件的確定，一定要在查閱文獻的基礎上，并根據試驗結果進行綜合考慮。 4．供試品溶液濃度的確定（靈敏度試驗——Z低檢出限的測定） 供試品溶液濃度的設定在有關物質檢測中是至關重要的，濃度越高、越能反映樣品中雜質存在的情況，但若設定得過高，則會產生主斑點嚴重拖尾、“斷腰”等超載現象的發(fā)生，產生錯誤結論；若設定太低，又將達不到檢測雜質的目的，觀測不到雜質量的變化。其設定是根據Z低點樣量和Z大點樣量來綜合考慮的。 Z低檢出限雖然是個值，但真正的意義卻是其相對值，即相對于供試品溶液的濃度多少而言，所以測定結果不僅要羅列出其值又應列出其相對值，這樣Z低檢出限才有意義！Z大點樣量則是通過不斷加大供試品溶液濃度，直至主斑點嚴重拖尾、“斷腰”等情況出現時來得到的。然后根據Z低檢出限，采用“上推法”來確定：如一般設定雜質斑點小于1.0%對照斑點，對照溶液的濃度至少應為Z低檢出濃度（即Z低檢出限）的20~50倍，則供試品溶液濃度是Z低檢出濃度的2000~5000倍；反過來，Z低檢出濃度應至少達到供試品溶液濃度的0.02%~0.05%。應注意的是：由于Z低檢出量和Z大點樣量因試驗環(huán)境、薄層板質量以及即時試驗時其他各因素的不同而改變（即耐受性因數），故供試品溶液的濃度在保證小于Z大進樣量的情況下，可在此基礎上設定得再高一些，以保證該濃度可適用于各種條件下。。

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