今天要跟大家分享一篇關于M2型小膠質細胞外小泡（M2 microglial small extracellular vesicles，M2-sEVs）以及膠質瘢痕（glial scar）的研究。

先看圖：

▲電鏡下M2-sEVs.的形態(tài)

▲這是GFAP染色后，共聚焦顯微鏡下，不同處理措施（PBS、M2-sEV）下腦組織梗死區(qū)膠質瘢痕（glial scar）的形態(tài)。C：梗死中心區(qū)域；GS：膠質瘢痕區(qū)域；P：梗塞壞死灶周圍區(qū)域。

再說結果：

▲ 甲苯基紫染色呈現(xiàn)不同處理措施下，腦組織萎縮體積的變化情況

（Sham：假手術組；PBS：腦梗死后通過尾靜脈注射PBS；M2-sEV：腦梗死后通過尾靜脈注射M2型小膠質細胞外小泡；miR-124-kd:通過基因敲除miR-124的腦梗死動物組）

▲ 組織梗死或存活比例情況及神經行為評分情況（mNSS）

▲ 動物轉棒實驗及右轉實驗情況

經過系列實驗得出結論，也是本文的標題：《M2 microglial small extracellular vesicles reduce glial scar formation via the miR-124/STAT3 pathway after ischemic stroke in mice》即，M2小膠質細胞外小泡通過miR-124/STAT3途徑減少小鼠缺血性卒中后膠質瘢痕形成。

實驗研究方法，是通過阻斷ICR小鼠大腦中動脈后連續(xù)7天，每天通過尾靜脈注射M2小膠質細胞外小泡，來檢測缺血后腦組織膠質瘢痕、梗死體積、神經功能評分情況的研究。

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值得注意的是，本篇文章是2021年1月1日發(fā)表在Theranostics，這是個對于交叉學科研究很友好的雜志，該雜志2021年影響因子高達11.556！這篇研究的成果來自于上海交通大學生物醫(yī)學工程學院的科研團隊。

如果你對本文的研究思路感興趣

如果你也在研究不同類型小膠質細胞的功能

或對動物手術造模操作、miR-124/STAT3 pathway感興趣的話

下面有個好消息告訴你

10月28日，本科研成果團隊的作者之一，上海交通大學MED-X研究院科研副院長楊國源教授將做客瑞沃德大成學堂卒中基礎研究系列講座。

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大有所成！

　　細胞生物學是生命科學的一門學科。顧名思義，它致力于研究生物。單憑這一事實就足以成為研究細胞自然生存狀態(tài)的理由。當然，活細胞成像還有其他深層次的原因。在本篇文章中，我們列舉了用延時顯微鏡研究活細胞是有意義的五大很好的理由。

　　背景

　　活細胞成像允許在一定時間內在顯微鏡下對細胞進行體內觀察。各種顯微鏡技術適用于活細胞成像：例如，可以采用無標記的技術，如相差，DIC，或干涉測量法，也可以依靠熒光顯微鏡，利用熒光標記標記和可視化細胞亞結構、分子或蛋白質。當然，活細胞成像也面臨挑戰(zhàn)，在建立活細胞圖像實驗時需要考慮某些要求。最重要的是，必須確保顯微鏡配備了一個stage top 培養(yǎng)箱，能夠提供理想的環(huán)境，使細胞在一段時間內保持存活和健康。

圖1.A：活細胞成像過程中需要考慮和控制的環(huán)境參數(shù)

圖1.B：倒置顯微鏡的臺頂培養(yǎng)箱示意圖

　　參數(shù)和環(huán)境條件是此類實驗的重要部分，我們將在以后的公眾號中討論。如果您有興趣，可以在本篇文章中查看更多相關內容。在此我們已經介紹了基本知識，接下來我們將繼續(xù)深入探討為什么您應該使用活細胞成像來研究您的細胞：

　　1.避免固定過程中的人工制品

　　細胞通常在顯微鏡觀察前固定（如免疫熒光），以保存在逼真的狀態(tài)。多年來，許多不同的化學和物理程序已被優(yōu)化和建立，以保持原始樣品的質量。然而，固定過程會對細胞造成損害（當然在這個過程之后，它們會死亡），并不可逆轉地改變其組織、結構和形態(tài)（細胞器收縮、蛋白質定位錯誤等）。然而，活細胞成像可以讓我們研究活細胞。這意味著他們應該展示他們的自然形態(tài)，這仍然會受到熒光標簽、激光等的影響，但這就像環(huán)境條件一樣，是一個不同的狀況。

　　2.觀察和分析動態(tài)過程

　　活細胞成像使我們能夠觀察整個細胞群、單個細胞甚至亞細胞水平的動態(tài)事件。當固定細胞將其鎖定在特定時間點的特定（行為或結構）狀態(tài)時，對活細胞的顯微鏡觀察可以洞察整個動態(tài)過程?；诠δ苄约毎臋z測，如損傷和遷移（圖2）或趨化實驗是活細胞成像應用的很好的例子。這些分析使得研究細胞對化學（趨化性）或機械（傷口愈合）刺激的反應成為可能。

圖2：使用ibidi Stage Top孵育系統(tǒng)的活細胞成像顯示了傷口愈合和遷移試驗中MCF7細胞的間隙閉合。相差；10倍物鏡。

　　3.實時跟蹤細胞變化

　　活細胞顯微鏡是實時了解細胞隨時空變化的一種有價值的方法，而不是依賴于固定細胞的端點的分析結果。通過使用延時視頻顯微鏡對細胞進行更長時間的跟蹤，可以捕捉到結構重排的動態(tài)(如圖3，感受趨化刺激后細胞骨架的極化), 或使用固定細胞可能會錯過的瞬時細胞性活動(如，有絲分裂期間的染色體分離)。

圖3：應用趨化梯度后，表達LifeAct的原代樹突狀小鼠細胞中肌動蛋白動力學的活細胞成像

　　4. 研究單分子動力學、定位和相互作用

　　先進熒光標記和成像技術的發(fā)展，如光脫色熒光恢復技術（FRAP）、熒光壽命成像顯微技術（FLIM）和熒光共振能量轉移技術（FRET），使活細胞成像過程中單分子定位、動力學和相互作用的觀察和分析成為可能。

　　FRAP可以測量活細胞內熒光標記分子和蛋白質的遷移率。FLIM通過測量附著的熒光團的壽命來提供有關細胞分子分布及其環(huán)境的信息。

　　利用FRET，人們可以通過檢測兩個分子在納米級相互接近時所附熒光團的相互作用來測量活細胞中兩個分子的直接相互作用。

　　5. 從單個實驗中獲取更多信息

　　總的來說，如果您進行活細胞成像，您可以從單個實驗中獲得比從固定細胞成像更多的信息。這是因為活細胞成像使人們能夠跟蹤分子動力學和動力學，并提供了您感興趣的一個更大、更全面的細胞過程圖像。

　　對固定樣本的分析通常只提供某個細胞性活動的快照，而跟蹤整個動態(tài)過程使人們能夠從單個實驗中測量更多參數(shù)，并得出更多不同的結論。

　　如您有興趣了解更多關于活細胞成像的知識，請關注我們公眾號活細胞成像應用相關內容。也可以向我們索要相關資料。

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