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  zky914 2017-02-01 00:00:00

  1.1 樣本來(lái)源 靜脈抽取30份健康體檢者血樣.10份用EDTA抗凝， 10份不加抗凝處理，10份不抗凝在-40 ℃凍存2 a左右. 1.2 DNA提取方法 取凝血塊，用9 g/L 氯化鈉勻漿大約30 s，每換一個(gè)樣本都要用70%乙醇和9 g/L 氯化鈉清洗勻漿器以避免交叉污染.取勻漿后樣本1 ml置于離心管中，室溫8 000 r離心5 min后，去掉上層.血細(xì)胞在1 ml的Tris緩沖液I(10 mmol/L Tris?HCl，pH 8.0；10 mmol/L 氯化鉀；10 mmol/L 氯化鎂；2 mmol/L EDTA，pH 8.0；25 mL/L Triton X?100)中裂解10 min， 其間輕輕用力充分混勻， 室溫10 000 r離心2 min，沉淀要用Tris 緩沖液I洗2次.將沉淀用220 μl的Tris 緩沖液II (10 mmol/L Tris?HCl，pH 8.0；10 mmol/L 氯化鉀；10 mmol/L 氯化鎂；2 mmol/L EDTA，pH 8.0；0.4 mol/L 氯化鈉；10 g/L SDS)懸浮，輕輕振蕩試管， 使底部細(xì)胞團(tuán)塊散開(kāi)，在56 ℃保溫15 min裂解.加入100 μl 5 M 氯化鈉充分振蕩沉淀去除蛋白質(zhì).10 000 r離心5 min，取上清.加2.5倍體積的無(wú)水乙醇沉淀DNA后，10 000 r離心5 min，棄上清.室溫晾20 min左右待酒精揮發(fā)干凈后以適量TE緩沖液(10 mmol/L Tris?HCl，pH 8.0，1 mmol/L EDTA)回溶.EDTA抗凝血中DNA的提取從去掉上層開(kāi)始.

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