1. 基本信息

　　下面的應(yīng)用描述了小鼠巨噬細(xì)胞系RAW-264.7（生物安全等級2）在ibidi μ-Slides VI 0.4 和8孔腔室載玻片的培養(yǎng)方案。這是一個特殊的細(xì)胞系的例子，用于顯示粘附時間，細(xì)胞密度和細(xì)胞形態(tài)的示范。本應(yīng)用可根據(jù)您的具體實驗要求進(jìn)行調(diào)整。

　　2. 材料

　　在設(shè)置中應(yīng)用下列材料：

　　·RAW-264.7 (murine macrophages, CLS - Cell Lines Service, Biosafety Level 2) 

　　·Medium: RPMI 1640 with 2 mM L-Glutamin and 10% FBS 

　　·μ-Slide VI 0.4, ibiTreat （ibidi 80606）

　　·μ-Slide 8 well, ibiTreat （ibidi 80826）

　　·Accutase (PAA Laboratories GmbH) 

　　·1x Phosphate buffered saline (PBS) 

　　3. 細(xì)胞培養(yǎng)與材料制備

　　在將細(xì)胞接種到玻片中之前，按照常規(guī)的方法培養(yǎng)細(xì)胞。

　　μ-Slide VI 0.4 ：通道玻片和培養(yǎng)基，在37℃和5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。這對于避免隨著時間的推移出現(xiàn)氣泡至關(guān)重要。為此，在50 ml器中填充適量的培養(yǎng)基，并輕輕地將瓶蓋擰緊。在 μ-Slide 8孔載玻片開放孔井中，氣泡可排出到大氣中。

　　拆開μ-Slide的包裝，把它放在μ-Slide支架上，并在準(zhǔn)備細(xì)胞懸浮液時同時將蓋子放在 Luer 適配器/孔上。

　　4. 播種細(xì)胞

　　分離細(xì)胞：

　　吸出培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，并用PBS洗滌細(xì)胞一次。每75cm2 燒瓶中加入3-5 ml的Accutase，并將燒瓶放入培養(yǎng)箱中以加快分離速度。如果是RAW-264.7細(xì)胞系，則大約需要8分鐘。使用Accutase分離的細(xì)胞存活率更高。

　　4.1. 將細(xì)胞接種到μ-Slide VI 0.4中

　　在μ-Slide VI 0.4建議的細(xì)胞濃度：最終細(xì)胞數(shù)  0.3 x 10 5 cells/cm2，制備濃度6 x 10 5cells/ml。通過將移液器尖端直接放在通道的入口上，將30 μl細(xì)胞懸浮液填充到每個通道中。將蓋子蓋在玻片上，在37°C和5％CO2下孵育半小時以固定細(xì)胞。

　　細(xì)胞貼壁后，分別用60 μl無細(xì)胞培養(yǎng)基填充儲液池。 避免將移液器吸頭直接指向通道的入口。將玻片放回培養(yǎng)箱中。

　　圖1：接種后一小時，在ibiTreat μ-Slide VI 0.4（貨號80606）中的RAW-264.7

　　圖2: 在ibiTreat μ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7，孵育24小時后

　　圖3:在ibiTreat μ-Slide VI0.4中的RAW-264.7，培養(yǎng)四天后

　　4.2 將細(xì)胞播種在μ-Slide 8 well 中

　　在μ-Slide 8 well建議的細(xì)胞濃度：最終細(xì)胞數(shù) 0.3 x 10 5 cells/cm2 ，制備濃度 1.1 x 10 5 cells/ml。將300 μl 的細(xì)胞懸浮液注入各孔中。將蓋子蓋在玻片上，在37°C和5% CO2中孵育。不需要進(jìn)一步添加培養(yǎng)基。

　　圖4：在ibiTreat μ-Slide 8 well(貨號：80826)中的RAW-264.7，播種后1小時

　　圖5: 在ibiTreat μ-Slide 8 well中的RAW-264.7，孵育24小時后

　　圖6：在ibiTreat μ-Slide 8 well中的RAW-264.7，經(jīng)過四天的培養(yǎng)

　　為獲得最佳的分布的勻的細(xì)胞，我們建議使用像μ-Slide VI 0.4 這樣的通道載玻片。在8孔腔室載玻片中，細(xì)胞密度可能會在孔的整個表面上因點而異，具體取決于細(xì)胞播種過程中的處理。

　　5. 免疫熒光染色

　　像往常一樣為您的細(xì)胞固定和染色。

　　注意：在 μ-Slides 中染色時注意液體的處理

　　μ-Slide VI 0.4 ：更換液體，先吸出兩個儲液池而不排空通道。 如果您使用的是真空設(shè)備，請注意不要將吸頭直接放在通道的入口上。 用100 μl新溶液沖洗通道3次。 從一側(cè)添加新的溶液，通過通道流入另一個儲液池，然后從另一側(cè)吸出，直到兩個儲液池都排空。注意通道永遠(yuǎn)不要干涸！

　　μ-Slide 8孔載玻片：在 μ-Slide 8孔中，無需特殊處理措施。像在任何其他培養(yǎng)皿或孔板中一樣的交換液體。

　　下文中，給出了使用以下材料對細(xì)胞核和肌動蛋白絲進(jìn)行染色的示例：

　　細(xì)胞核：DAPI（Diamidino pheylindol dihydrochlorid） SIGMA, 32670 

　　肌動蛋白絲：Phalloidin, Alexa Fluor ? 488 Conjugate, LONZA, PA-3010 

　　1. 用3.7% 的PFA在PBS（pH 7.4）中室溫下固定細(xì)胞10分鐘。

　　2. 用PBS清洗細(xì)胞三次。

　　3. 用Triton X 100（0.1%）孵育細(xì)胞5分鐘。

　　4. 用PBS清洗細(xì)胞三次。

　　5. 用1%牛血清白蛋白在PBS中孵育20分鐘。

　　6. 用PBS清洗細(xì)胞三次。

　　7. 在0.2μm濃度下用鬼筆環(huán)肽Alexa For 488孵育細(xì)胞20分鐘。

　　8. 用PBS清洗細(xì)胞三次。

　　9. 用DAPI（0.5μg/ml）孵育細(xì)胞10分鐘。

　　10. 用PBS清洗細(xì)胞三次。

　　11. 完全吸出通道并用ibidi封片劑重新填充。 現(xiàn)在樣品可在顯微鏡上觀察了。保存在陰暗陰涼處可儲存數(shù)周。

　　圖7：在 μ-Slide VI 0.4中的RAW-264.7用DAPI（細(xì)胞核、藍(lán)色）和Phalloidin, Alexa Fluor ? 488 Conjugate（肌動蛋白絲，綠色）

細(xì)胞培養(yǎng)實驗室除了配備一般實驗室的普通常規(guī)設(shè)備外，還有一些特殊需要的設(shè)備，本文將詳細(xì)介紹。

一、常用的儀器設(shè)備

（1）儀器

a）顯微鏡：倒置顯微鏡——是細(xì)胞培養(yǎng)實驗室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一，便于掌握細(xì)胞的生長情況并觀察有無污染等。

b）培養(yǎng)箱：體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣，需要在恒定的溫度下生存，大多數(shù)情況下，Z適溫度是37℃，溫差變化一般不應(yīng)超過±0.5℃，細(xì)胞在溫度升高2℃ 時，持續(xù)數(shù)小時即不能耐受，40℃以上將很快死亡。因此需要有能控制溫度的培養(yǎng)箱，如具有較高靈敏度的恒溫培養(yǎng)箱及CO2培養(yǎng)箱。

c）干燥箱：用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等須干熱消毒。

d）水純化裝置：細(xì)胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高，細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時配制各種培養(yǎng)液及試劑等均需使用三次蒸餾水：即使是用于玻璃器皿的沖洗，也應(yīng)使用二次以上蒸餾水。

e）冰箱：細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備。a、普通冰箱或冷藏柜——儲存培養(yǎng)液、生理鹽水、Hank’s液試劑等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。b、低溫冰箱（-20℃）——用于儲存需要冷凍保存生物活性及較長時期存放的制劑，如酶、血清等。

f）細(xì)胞冷凍儲存器：儲存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購置液氮容器時要綜合考慮容積大小，取放使用方便及液氮揮發(fā)量（經(jīng)濟(jì)）三種因素。

g）離心機(jī)：進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時，常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等工作，通常需要使用離心機(jī)。一般可常規(guī)配置4000rpm的國產(chǎn)臺式離心機(jī)，例如細(xì)胞沉降，使用80～100g的離心機(jī)即可，離心力過大有時可能引起細(xì)胞的損傷。

h）天平：常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。

i）消毒器：一般為高壓蒸汽滅菌鍋，直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。

j）濾器：目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液，包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用濾過消毒以除去細(xì)菌。目前常使用的濾器有Zeiss濾器、玻璃濾器和微孔濾器，各種濾器有其使用原理和特點。

（2）培養(yǎng)器皿

培養(yǎng)瓶：由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)時培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞，膠塞多用于密封培養(yǎng)。國產(chǎn)培養(yǎng)瓶的規(guī)格以容量（ml）表示，如250ml、100ml、25ml等；進(jìn)口培養(yǎng)瓶則多以底面積（cm2）表示。

培養(yǎng)皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性、集落形成、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺?、?xì)胞繁殖等實驗使用。常用的培養(yǎng)皿規(guī)格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。

多孔培養(yǎng)板：為塑料制品?？晒┘?xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測實驗使用。其優(yōu)點是節(jié)約樣本及試劑，可同時測試大量樣本，易于進(jìn)行無菌操作。培養(yǎng)板分為各種規(guī)格，常用的規(guī)格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

貯液瓶：常見的為藍(lán)蓋瓶，主要用于存放或配制各種培養(yǎng)用液體如培養(yǎng)液、血清及試劑等。貯液瓶分為各種不同規(guī)格，如1000ml、500ml、250ml、 100ml、50ml、5ml等。

吸管：主要分為刻度吸管、無刻度吸管?？潭任苤饕糜谖?、轉(zhuǎn)移液體，常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規(guī)格。無刻度吸管分為直頭吸管及彎頭吸管，除可以作吸取、轉(zhuǎn)移液體外，彎頭尖吸管還常用于吹打、混勻及傳代細(xì)胞。

加樣器（移液器）：分為微量移液器和電動移液器。用于吸取、移動液體或滴加樣本?？筛鶕?jù)需要調(diào)節(jié)量的大小，吸量準(zhǔn)確、方便?？杀ＷC實驗樣品（或試劑）含量精確，重復(fù)性良好。

（3）器械

主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時持取物件。

常用的有：手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪（彎剪及直剪），用于解剖動物、分離及切剪組織，制備原代培養(yǎng)的材料；眼科虹膜小剪（彎剪或直剪），用于將組織材料剪成小塊；血管鉗及組織鑷、眼科鑷（彎、直），用于持取無菌物品（如小蓋玻片）夾持組織等；口腔科探針或代用品，用以放置原代培養(yǎng)之組織小塊。

二、特殊設(shè)備

細(xì)胞培養(yǎng)實驗室除了應(yīng)配備上述的基本設(shè)備以外，如有條件，可添置一些特殊或先進(jìn)的儀器設(shè)備，以便更有效、更精確、更深入地進(jìn)行實驗室工作。例如：

（1）酶聯(lián)免疫檢測儀——可用于進(jìn)行免疫學(xué)測定及細(xì)胞毒性、藥物敏感性檢測等。

（2）超低溫冰箱（-80℃）——便于儲存某些試劑及標(biāo)本。

（3）旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器——用于某些特殊細(xì)胞或需要收獲大量細(xì)胞的培養(yǎng)。

（4）熒光顯微鏡——進(jìn)行熒光染色樣本的觀察。

（5）流式細(xì)胞儀——可更精確及快速檢測細(xì)胞。

（6）用于檢測細(xì)胞培養(yǎng)條件的各種儀器，例如專門為快速分析細(xì)胞培養(yǎng)基中主要或關(guān)鍵營養(yǎng)成分、代謝產(chǎn)物及氣體含量設(shè)計的多功能細(xì)胞培養(yǎng)分析儀、手提式CO2濃度測定儀等。

首先恒溫恒濕室是一款定制的試驗設(shè)備，但是如果用戶對溫度范圍沒有特別嚴(yán)格的要求的話，我們最大能夠為用戶提供-70~120℃的試驗箱。當(dāng)然除了這個還可以選擇0~120、-20~120℃、-40~120℃，大家都可以根據(jù)試驗需求進(jìn)行挑選，因為溫度范圍不同的設(shè)備價格都是不同的，而且能夠?qū)崿F(xiàn)的溫度越低，設(shè)備的價格也就越貴。雖然溫度范圍能夠保證設(shè)備能模擬出樣品檢測的溫度范圍，但是還需要保證工作室內(nèi)的溫度均勻度，不然試驗可能會因為工作室內(nèi)溫度相差過大而出現(xiàn)誤差。

一實的恒溫恒濕室以及其他溫度試驗設(shè)備在出廠前都會進(jìn)行溫度均勻度的檢測，只有確保內(nèi)部不同位置的溫度和控制器上設(shè)定的溫度差不超過±0.2℃后，一實儀器才會將合格的試驗設(shè)備裝箱發(fā)給用戶。不過也有些用戶覺得一實能夠達(dá)到這樣的程度，那么其他廠家也是能夠順利達(dá)到的。但是實際情況是大部分廠家能夠保證試驗箱的溫度均勻度在±2℃左右，因為溫度均勻度算是溫度試驗箱中的一個難點，在加上國標(biāo)對這方面的標(biāo)準(zhǔn)非常輕松，所以只要設(shè)備能夠滿足國標(biāo)要求，那么廠家就會將設(shè)備當(dāng)成合格的試驗設(shè)備出售。而很多廠家也為了減少生產(chǎn)過程中的成本，不會將資金投入到設(shè)備的研發(fā)中，所以只要讓生產(chǎn)的試驗箱能夠滿足國標(biāo)的要求之后他們就會將設(shè)備出售給用戶。而用戶在使用戶過程中就會因為重復(fù)試驗耽誤大量的時間

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何為粒度，何為粒度分布

顆粒的大小叫做顆粒的粒度。度量顆粒大小的單位一般用微米或納米，個別領(lǐng)域也用毫米。在粒度測試中通常用顆粒的直徑（粒徑）來描述顆粒的粒度用特定方法測定的不同粒徑區(qū)間內(nèi)的顆粒占總量的百分?jǐn)?shù)稱為粒度分布。粒度分布有多種基準(zhǔn)，如數(shù)量分布、長度分布、面積分布、體積分布、重量分布等激光法的基準(zhǔn)是體積分布，沉降法的基準(zhǔn)是重量分布，電阻法的基準(zhǔn)是數(shù)量 分布不同基準(zhǔn)的粒度分布數(shù)值不同，理論上不同基準(zhǔn)的粒度分布可以通過數(shù)學(xué)

方法轉(zhuǎn)換，但由于粉體形狀千差萬別，有時這種轉(zhuǎn)換的誤差。

什么是空氣質(zhì)量在線監(jiān)測站?空氣質(zhì)量在線監(jiān)測站又稱空氣站?？諝庹镜墓δ苁菍Υ嬖谟诖髿?、空氣中的污染物質(zhì)進(jìn)行定點、連續(xù)或者定時的采樣、測量和分析。為了對空氣進(jìn)行監(jiān)測，一般在一個環(huán)保ZD城市設(shè)立若干個空氣站，站內(nèi)安裝多參數(shù)自動監(jiān)測儀器作連續(xù)自動監(jiān)測，將監(jiān)測結(jié)果實時存儲并加以分析后得到相關(guān)的數(shù)據(jù)?？諝赓|(zhì)量監(jiān)測站是空氣質(zhì)量控制和對空氣質(zhì)量進(jìn)行合理評估的基礎(chǔ)平臺，是一個城市空氣環(huán)境保護(hù)的基礎(chǔ)設(shè)施。常規(guī)的大氣6參數(shù)(PM2.5、PM10、O3、SO2、NO2、CO)及氣象5參數(shù)(溫度、氣壓、濕度、風(fēng)向、風(fēng)速)。監(jiān)測原理主要以光化學(xué)法，貝塔射線法或震蕩天平法等為主。

標(biāo)準(zhǔn)站可以說是一個城市或地區(qū)環(huán)境空氣保護(hù)的基礎(chǔ)監(jiān)測設(shè)施，簡稱大氣站。通常是指國家花費高額成本，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的選點原則，將多種符合國標(biāo)的監(jiān)測儀器集中于一處小型建筑內(nèi)。小型建筑的樓頂設(shè)置著各種采樣設(shè)備。將樣本采集后送入監(jiān)測儀器進(jìn)行檢測。同時對于不同監(jiān)測項目都有獨立的一臺儀器進(jìn)行檢測。監(jiān)測方法依據(jù)國標(biāo)規(guī)定，并按照規(guī)定每周需要專業(yè)工作人員對設(shè)備進(jìn)行運維。故建站及運維的成本相當(dāng)昂貴。這也就是我們通常說的國控點、省控點或市控點。

小型站：小型站和微型站可以說是標(biāo)準(zhǔn)站的一種補(bǔ)充。從成本來看，小型站或微型站的價格要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)站的建設(shè)成本。所以對于大面積布局精細(xì)化或網(wǎng)格化監(jiān)測來說顯得更為實際。小型站的大氣環(huán)境空氣質(zhì)量監(jiān)測站有兩種原理：一種是光化學(xué)法，一種是傳感器法。這兩類監(jiān)測原理的小型站，都包含主動式采樣系統(tǒng)，質(zhì)控系統(tǒng)，流量控制系統(tǒng)及前端除濕、溫度控制等功能。整體硬件的精度比較接近大氣站。因為精度相對較高，更適合作為地方管理、環(huán)境內(nèi)部考核的工具，因為小型監(jiān)測站數(shù)據(jù)可以標(biāo)定和溯源，數(shù)據(jù)質(zhì)量相對微型站更加可靠。
 

NO2、CO、SO2、O3監(jiān)測設(shè)備參數(shù)

PM2.5、PM10監(jiān)測設(shè)備參數(shù)

氣象參數(shù)

風(fēng)向

測量范圍：0～360°

準(zhǔn) 確 度：±3°

啟動風(fēng)速：≤0.5m/s

供電方式： DC 12V

輸出形式： RS485

負(fù)載能力：電流型輸出阻抗≤250Ω

電壓型輸出阻抗≥1KΩ

工作環(huán)境：溫度-40℃～50℃

防護(hù)等級：IP45

線纜等級：額定電壓：300V 溫度等級：80℃

產(chǎn)品重量：210 g

產(chǎn)品功耗：5.5 mW

 風(fēng)速

測量范圍：0～70m/s

準(zhǔn) 確 度：±(0.3+0.03V)m/s （V:風(fēng)速）

分 辨 率：0.1m/s

啟動風(fēng)速：≤0.5m/s

供電方式：DC 12V

輸出形式：RS485

負(fù)載能力：電流型輸出阻抗≤600Ω

電壓型輸出阻抗≥1KΩ

工作環(huán)境：溫度-40℃～50℃

防護(hù)等級：IP45

線纜等級：額定電壓：300V 溫度等級：80℃

產(chǎn)品重量：130 g

產(chǎn)品功耗：50 mW

 溫度、濕度

測量范圍： -50～80℃         

準(zhǔn) 確 度： ±0.3℃             ±5%RH

分 辨 率： 0.1℃              0.1%RH

大氣壓力

氣壓

測量范圍： 10～1100hPa

準(zhǔn) 確 度： ±0.3hPa

分 辨 率： 0.1hPa

供電方式：DC 12V

輸出形式：RS485

負(fù)載電阻：電壓型：RL≥1K

電流型：RL≤300Ω

工作溫度：-50℃～80℃