一、EGFP蛋白全稱

EGFP，全稱為增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein），是一種在生物科學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的熒光報(bào)告蛋白。它是由普通綠色熒光蛋白（GFP）進(jìn)行突變和優(yōu)化得到的，相較于原始的GFP，EGFP具有更高的熒光亮度和更穩(wěn)定的性質(zhì)。

二、EGFP蛋白大小

EGFP蛋白的大小為238個(gè)氨基酸，分子量約為27kDa。這個(gè)分子量相對(duì)較小，使其在融合蛋白、抗體標(biāo)記等生物分子標(biāo)記領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。同時(shí)，EGFP的相對(duì)分子量較小也意味著它對(duì)其他蛋白質(zhì)的負(fù)擔(dān)較小，這有助于保持標(biāo)記蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)和功能。

三、EGFP蛋白序列

以下是EGFP蛋白的氨基酸序列：

MVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN稚TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN稚TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN稚TSGSHMVHHIQGGGPGMPMPGEEMMMAAN稚TSGSHMEEEEDVMKDVEEETPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDPIPELMLLDMAAQDP

通過(guò)分析EGFP的氨基酸序列，我們可以發(fā)現(xiàn)其中包含一些重要的結(jié)構(gòu)域和功能位點(diǎn)。例如，在EGFP的氨基端，有一個(gè)由數(shù)個(gè)甘氨酸和絲氨酸組成的“環(huán)狀結(jié)構(gòu)”，這個(gè)結(jié)構(gòu)對(duì)于熒光發(fā)射起著關(guān)鍵作用。在羧基端，我們還可以看到一個(gè)“多肽區(qū)”，這個(gè)區(qū)域?qū)τ跓晒饬炼群头€(wěn)定性也有重要影響。此外，在EGFP的氨基酸序列中還包含多個(gè)突變位點(diǎn)，這些位點(diǎn)使得EGFP相較于原始的GFP具有更高的熒光亮度和更穩(wěn)定的性質(zhì)。

四、總結(jié)

EGFP是一種重要的熒光報(bào)告蛋白，通過(guò)對(duì)其全稱、大小和序列的深入了解，我們可以更好地理解其性質(zhì)和應(yīng)用。在實(shí)際的生物科學(xué)研究中，EGFP已被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、生物醫(yī)學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域，為科研工作者提供了強(qiáng)有力的工具，有助于推動(dòng)生命科學(xué)研究的進(jìn)步。

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MBP（麥芽糖結(jié)合蛋白）標(biāo)簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過(guò)量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBP標(biāo)簽可通過(guò)免疫分析很方便地檢測(cè)。有必要用位點(diǎn)專一的蛋白酶切割標(biāo)簽。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá)，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。

MBP標(biāo)簽序列：396 AA

純化：融合蛋白可通過(guò)交聯(lián)淀粉親和層析一步純化。結(jié)合的融合蛋白可用10mM麥芽糖在生理緩沖液中進(jìn)行洗脫。結(jié)合親和力在微摩爾范圍。一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效結(jié)合，而其他融合蛋白則不受影響。緩沖條件為pH7.0到8.5，鹽濃度可高達(dá)1M，但不能使用變性劑。如果要去除MBP融合部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。

mbp標(biāo)簽優(yōu)缺點(diǎn)：

簡(jiǎn)單親和純化即可實(shí)現(xiàn)；

增加蛋白表達(dá)量和蛋白穩(wěn)定性；

促進(jìn)蛋白的可溶性和正確折疊；

標(biāo)簽較大，對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)/功能會(huì)有一定影響。

常見(jiàn)的蛋白標(biāo)簽：

常見(jiàn)的融合標(biāo)簽包括谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶 （GST）、麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）、幾丁質(zhì)結(jié)合蛋白（CBD）、硫氧還蛋白（Trx）、鏈霉親和素、多聚組氨酸（Poly-His）、小分子泛素樣修飾蛋白（SUMO）和血凝素標(biāo)簽（HA）。

GST:

GST(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶) 標(biāo)簽蛋白本身是一個(gè)在解-毒過(guò)程中起到重要作用的轉(zhuǎn)移酶，它的天然大小為26KD。將它應(yīng)用在原核表達(dá)的原因大致有兩個(gè)，一個(gè)是因?yàn)樗且粋€(gè)高度可溶的蛋白，希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性；另一個(gè)是它可以在大腸桿菌中大量表達(dá)，起到提高表達(dá)量的作用。GST融合表達(dá)系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于各種融合蛋白的表達(dá)，可以在大腸桿菌和酵母菌等宿主細(xì)胞中表達(dá)。結(jié)合的融合蛋白在非變性條件下用10mM 還原型谷胱甘肽洗脫。在大多數(shù)情況下，融合蛋白在水溶液中是可溶的，并形成二體。GST標(biāo)簽可用酶學(xué)分析或免疫分析很方便的檢測(cè)。標(biāo)簽有助于保護(hù)重組蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其穩(wěn)定性。在大多數(shù)情況下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。純化：該表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的GST標(biāo)簽蛋白可直接從細(xì)菌裂解液中利用含有還原型谷胱甘肽瓊脂糖凝膠(Glutathionesepharose)親和樹脂進(jìn)行純化。GST標(biāo)簽蛋白可在溫和、非變性條件下洗脫，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST在變性條件下會(huì)失去對(duì)谷胱甘肽樹脂的結(jié)合能力，因此不能在純化緩沖液中加入強(qiáng)變性劑如：鹽酸胍或尿素等。如果要去除GST融合部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。檢測(cè)：可用GST抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測(cè)。

HA：

HA標(biāo)簽蛋白，標(biāo)簽序列YPYDVPDYA，源于流感病毒的紅細(xì)胞凝集素表面抗原決定簇，9個(gè)氨基酸，對(duì)外源靶蛋白的空間結(jié)構(gòu)影響小, 容易構(gòu)建成標(biāo)簽蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti－HA抗體檢測(cè)和ELISA檢測(cè)。用HA peptide可實(shí)現(xiàn)帶HA tag的蛋白洗脫，0.15M Arginine-HCl緩沖液, pH3.0可實(shí)現(xiàn)蛋白純化beads 的重生。

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