熒光顯微鏡是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體， 使之發(fā)出熒光， 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學物質(zhì)的分布及定位等。

熒光顯微鏡標本要如何制作？

熒光顯微鏡標本制作方法一共分為5個步驟：
(一) 玻片及蓋玻片(Slide and Coverslips)
(二)組織切片 (Tissue Sections)
(三)細胞培養(yǎng)法 (Cell Culture Preparation)
(四) 涂抹法或捺壓法(Smear and Impression Preparation)
(五) 固定 (Fixation)

熒光顯微鏡標本制作步驟

(一) 玻片及蓋玻片(Slide and Coverslips)
玻片及蓋玻片品質(zhì)必須很好而沒有熒光，玻片厚度≦1.0mm 者便可用，玻片需要清洗，必須以中性清潔劑洗凈，再浸于含有3％HCl 之乙醇12～ 24 小時，然后再儲存于純酒精。要用時，以清潔紗布擦凈或火焰烘干。用完后可浸于水中，移去封埋物，再經(jīng)清潔劑及重酪酸－硫酸混合物＊處理。
＊重酪酸一硫酸混合物之配法：
1.粗制重酪酸鉀300 gm
2.20％ 硫酸水溶液3000 ml
3.使用琺瑯質(zhì)或陶質(zhì)容器，先放入20％ 硫酸水溶液，然后緩緩加入粗制重酪酸鉀，以玻璃棒攪拌，此時會發(fā)熱，待冷卻后使用。目前已有處理好的玻片出售，使用上非常方便。

(二) 組織切片 (Tissue Sections)
組織切片愈薄愈好(4μ)，如果切片太厚，則可能自體及非特異熒光增加，目前都用冷凍切片機(Cryostat) 來切，冷凍切片機包括冰凍柜(Refrigerated Cabinet)，溫度在0℃～-30℃ 之間，切片機(Microtome) 放在里面，將組織在-20℃ 冰凍10 分鐘，就可以切，切下之薄片，以玻片捺下后在室溫急速干燥。制備好之切片必須盡可能馬上固定及染色。如果切片必須儲放短時間( 約1 周)，則固定后密封儲放于-70℃，要染色時，切片必需回溫到室溫方啟開。

(三) 細胞培養(yǎng)法 (Cell Culture Preparation)
細胞培養(yǎng)法一般用蓋玻片在組織培養(yǎng)盤( 例如24 孔)或培養(yǎng)在玻璃片(Chamber Slide) 上，再和普通接種病毒一樣，接種可疑病材乳劑，培養(yǎng)數(shù)天，取出，干燥、固定、水洗，再用標示抗體染色以檢查特異熒光。

(四) 涂抹法或捺壓法(Smear and Impression Preparation)
所用玻片需很薄，一般用蓋玻片代用，將所要檢查之病材，如血液、組織液或其他病材，在玻片上涂抹或捺壓，涂抹或捺壓片在室溫用吹風機或電風扇( 以冷風吹干)，以甲醇或丙酮固定，放于密封標本箱于-20℃ 備染或馬上染色。

(五) 固定 (Fixation)
除了使組織固定于玻片外，另一方面亦可助抗原－抗體復(fù)合物之形成，例如把脂質(zhì)溶解，使抗體抗原較易反應(yīng)。一般用100％ Methanol 在室溫作用2 分鐘，或丙酮于-20℃ 下10 分鐘來固定微生物抗原及病毒。

注意事項
一般染色標本，應(yīng)立即觀察，因當時熒光Z顯著；若不能馬上觀察，須儲存于干燥盒(Polyethylene Bag) 內(nèi)，有時在0～5℃ 儲存，可保存一個月左右，仍可呈現(xiàn)特異熒光。

（來源：廣州市明美光電技術(shù)有限公司）

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