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薄層色譜分析是什么

沉淪___ 2016-12-01 02:06:28 503  瀏覽
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  • gfddjgd 2016-12-02 00:57:44
    薄層色譜簡單原理 薄層色譜又叫薄板層析,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實驗技術(shù),屬固—液吸附色譜,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點,一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來精制樣品,此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。此外,薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。 薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;另一方面若在制作薄層板時,把吸附層加厚,將樣品點成一條線,則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外,在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時,常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。 薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑,帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上,涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi),浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時,將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。記下原點至主斑點ZX及展開劑前沿的距離,計算比移值(Rf): 薄層色譜儀 薄層色譜法簡稱TLC,是在50年代從經(jīng)典柱色譜法和紙色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種色譜技術(shù)。60年代后,人們對薄層色譜法的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化及擴大應(yīng)用等方面進(jìn)行了許多工作,使該方法日趨成熟。 薄層色譜法工作的過程是這樣的: 首先將要分離的混合物點在用固定相均勻涂布的薄板的一端; 然后將薄板的這一端浸入流動相,在流動相浸濕薄板的過程中,樣品隨著流動相被展開,不同的組分隨流動相以不同的速度向前移動,Z終保留在薄板上的不同位置,從而達(dá)到分離的目的; 再用適當(dāng)?shù)姆椒▽Σ煌慕M分進(jìn)行檢測,就可以定性或定量的對樣品作出分析。 此時的固定相被稱為載體或吸附劑,而流動相被稱為展開劑,被展開的樣品叫做斑點。 薄層色譜的特點: 靈敏度及分辨率高、分離快速、操作方便、同時分離多個樣品、樣品預(yù)處理簡單、設(shè)備簡單。由于這些特點,薄層色譜在實際工作中的應(yīng)用十分廣泛。 由于通常用薄層色譜分析法進(jìn)行定量分析的過程中,薄層掃描儀是Z為重要的,因此對它進(jìn)行略詳?shù)慕榻B。 薄層掃描儀的基本結(jié)構(gòu)及主要功能基本是相同的,每臺儀器都包括光源、分光器、檢測器、數(shù)據(jù)處理及信號輸出幾個部分。 典型的檢測方法是吸收檢測法,其基本測定原理為,用一束長寬可以調(diào)節(jié)的一定波長、一定強度的光照射到薄層斑點上進(jìn)行整個斑點或被斑點反射的光束,根據(jù)光束被斑點吸收后強度的變化來確定組分的含量。 薄層色譜法的優(yōu)點特別適合我國國情,已成為許多實驗室不可缺少的分離手段。該方法在科研、教學(xué)、臨床、生產(chǎn)等各個領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用,分離對象也無所不包。 目前它正向聯(lián)用的方向發(fā)展,如薄層色譜--氣相色--質(zhì)譜聯(lián)用,或都薄層色譜--紅外光譜等的聯(lián)用。 醫(yī)藥工業(yè) 薄層色譜在醫(yī)藥工業(yè)中有很廣泛的應(yīng)用,特別應(yīng)用在中草藥、中成藥的成分分析和合成藥物分析。 臨床醫(yī)學(xué) 在臨床醫(yī)學(xué)中,它主要用于對生物樣品和有毒的物質(zhì)進(jìn)行分析。 環(huán)境科學(xué) 薄層色譜可以用來進(jìn)行農(nóng)藥及農(nóng)藥殘留分析,或都對有毒金屬、多環(huán)芳烴進(jìn)行檢測。 食品化學(xué) 食品添加劑的安全性問題已婚經(jīng)越來越多的得到關(guān)注,用薄層色譜對食品添加劑進(jìn)行分析是一種簡單有效的方法。 化學(xué)化工 薄層色譜在化學(xué)、化工方面也有很多應(yīng)用,例如對高分子材料的助劑、填料等進(jìn)行分析。

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色譜分析 - 氨基酸特點

氨基酸既有酸性又有堿性,意味著它既包含酸性基團(tuán)(羧酸),又包含堿性基團(tuán)(伯胺)。
但這些基團(tuán)通過肽鍵與殘基縮合。
多個氨基酸通過肽鍵連接形成肽鏈。
蛋白質(zhì)/多肽的特征由氨基酸側(cè)鏈決定。
本文包含詳細(xì)描述和功能概述。
包括氨基酸的名稱、三字母縮寫和單字母符號。


氨基酸

特性

結(jié)構(gòu)

丙氨酸

Ala

      A

類型:疏水性

功能:側(cè)鏈由疏水性甲基組成。與其它疏水性氨基酸一樣,丙氨酸協(xié)助形成并維持蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)。

精氨酸

Arg

      R

類型:堿性
功能:精氨酸側(cè)鏈有三個緊密結(jié)合的氮原子,是一種堿性極強的氨基酸,pH高達(dá)12.5。
      精氨酸與天冬氨酸或谷氨酸形成靜電復(fù)合物(鹽橋),強化蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)。
      它還與附著在蛋白質(zhì)的酸性基團(tuán)相互作用,例如核酸的磷酸基團(tuán)。

天冬酰胺 

Asn

N

類型:弱極性
功能:天冬酰胺是脫酰胺的主要位置,也是甘氨酸(低聚糖)的結(jié)合點。

天冬氨酸

Asp

      D

類型:酸性

功能:天冬氨酸的pH4,與堿性氨基酸相互作用形成靜電復(fù)合物(鹽橋)。
      天冬氨酸還是金屬離子等帶正電荷基團(tuán)的結(jié)合位點,其功能的發(fā)揮在多種蛋白質(zhì)中很重要。

半胱氨酸

Cys

      C

類型:弱極性(含硫)

功能:半胱氨酸在蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)中具有重要作用,其與其它半胱氨酸側(cè)鏈發(fā)生反應(yīng)并在多肽鏈的不同部分形成共價鍵(二硫鍵)。

谷氨酰胺

Gln

      Q

類型:弱極性

功能:谷氨酰胺的脫酰胺作用與天冬酰胺相比較難,因此基本不作為脫酰胺位點。

谷氨酸

Glu

      E

類型:酸性

功能:谷氨酸的pH稍高于4,與堿性氨基酸相互作用形成靜電復(fù)合物(鹽橋)。
      谷氨酸還是金屬離子等帶正電荷基團(tuán)的結(jié)合位點,其功能的發(fā)揮在多種蛋白質(zhì)中很重要。

甘氨酸

Gly

      G

類型:中性
功能:甘氨酸非常小,側(cè)鏈僅有一個氫,它作為中性氨基酸在肽鏈中延伸。

組氨酸

His

      H

類型:堿性
功能:組氨酸側(cè)鏈為弱堿性,pH6~7之間。組氨酸能夠與酸結(jié)合,但取決于環(huán)境pH

異亮氨酸

Ile

       I

類型:疏水性
功能:與其它疏水性氨基酸一樣,異亮氨酸殘基協(xié)助形成并維持蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)。

亮氨酸

Leu

       L

類型:疏水性
功能:與其它疏水性氨基酸一樣,亮氨酸協(xié)助形成并維持蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)。

賴氨酸

Lys

      K

類型:堿性
功能:賴氨酸側(cè)鏈?zhǔn)遣奉悾?/span>pH~10.5。
      賴氨酸與天冬氨酸或谷氨酸形成靜電復(fù)合物(鹽橋),強化蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)。
      它還與附著在蛋白質(zhì)的酸性基團(tuán)相互作用,例如核酸的磷酸基團(tuán)。

甲硫氨酸

Met

     M

類型:弱疏水性(含硫)

功能:甲硫氨酸是Z可能被氧化的氨基酸。它是發(fā)生氧化作用的指示劑。甲硫氨酸氧化還可能影響生物活性。

苯丙氨酸

Phe

F


類型:疏水性、芳香性
功能:與其它疏水性氨基酸一樣,苯丙氨酸協(xié)助形成并維持蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)。
       由于具有芳香性,苯丙氨酸還是紫外光吸收的有效檢測目標(biāo)。

脯氨酸

Pro

      P

類型:弱疏水性
功能:脯氨酸是一種獨特的氨基酸,其疏水側(cè)鏈與氨基酸末端連接,在肽鏈中產(chǎn)生張力,使肽鏈彎曲。
      該結(jié)構(gòu)特征協(xié)助形成蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)。

絲氨酸

Ser

      S

類型:極性(含羥基)
功能:絲氨酸通過氫鍵與其它氨基酸殘基或部分蛋白質(zhì)結(jié)合。還能通過氫鍵與其它蛋白質(zhì)或基團(tuán)結(jié)合。
      絲氨酸還是細(xì)胞蛋白質(zhì)磷酸化的位點。

蘇氨酸

Thr

       T

類型:極性(含羥基)

功能:蘇氨酸通過氫鍵與其它氨基酸殘基或部分蛋白質(zhì)結(jié)合。還能通過氫鍵與其它蛋白質(zhì)或基團(tuán)結(jié)合。
       蘇氨酸還是細(xì)胞蛋白質(zhì)磷酸化的位點。

酪氨酸

Tyr

      Y    

類型:極性(含羥基)、芳香性

功能:酪氨酸通過氫鍵與其它氨基酸殘基或部分蛋白質(zhì)結(jié)合。還能通過氫鍵與其它蛋白質(zhì)或基團(tuán)結(jié)合。
      酪氨酸還是細(xì)胞蛋白質(zhì)磷酸化的位點。酪氨酸具有芳香性,提供紫外吸收位點。


 

色氨酸

Trp

     W

類型:疏水性、芳香性
功能:色氨酸具備多環(huán)結(jié)構(gòu),能夠通過氫鍵延長。由于具備芳香性,色氨酸提供紫外光吸收位點。
       色氨酸還能發(fā)出微弱的天然熒光。


 


 




纈氨酸

Val

      V

類型:疏水性
功能:纈氨酸側(cè)鏈?zhǔn)且粋€疏水性異丙基。
      與其它疏水性氨基酸一樣,纈氨酸協(xié)助形成并維持蛋白質(zhì)的三級結(jié)構(gòu)。

 

各個氨基酸的豐度
疏水性氨基酸在蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的形成中起到關(guān)鍵作用,通常位于蛋白質(zhì)的核心區(qū)。
它們約占蛋白質(zhì)中氨基酸的50%。
極性氨基酸具有很多重要的結(jié)構(gòu)性或功能性作用,豐度一般較高。
豐度Z低的氨基酸包括甲硫氨酸、組氨酸、半胱氨酸及色氨酸。


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