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- 空中有牛 2016-12-05 00:00:00
- 重懸就是“重新懸浮”,具體操作是用適當?shù)木彌_液或培養(yǎng)液將離心或沉降等方法得到的固體(沉淀、細胞、活性物質(zhì)等等)重新懸浮. 例如胚胎干細胞培養(yǎng)中的細胞復蘇一項,步驟為: 1.從液氮中取出一管細胞; 2.將凍存管置于37℃水浴中2分鐘(或放到管內(nèi)溶液恰好完全溶解); 3.將細胞轉移到一15ml Falcon管中; 4.加入5ml ES培養(yǎng)基(用培養(yǎng)基沖洗凍存管); 5.離心3分鐘; 6.棄上清,用2ml ES培養(yǎng)基重懸細胞,至少吹打10次; 7.接種在明膠包被(見下文)的6孔或6cm組織培養(yǎng)皿; 8.孵育. 質(zhì)粒DNA的小量制備中 堿裂解法需要將細菌沉淀,所得重懸于100μl用冰預冷的溶液I中,劇烈振蕩. 溶液I 50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/LEDTA(pH8.0) 煮沸裂解需要將細菌沉淀,所得重懸于350μlSTET中. STET 0.1mol/L NaCL 10mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) 5% Triton X-100 等等.
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