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  佟佳元柳 2016-12-02 03:45:52

  、GX液相層析法 GX液相層析法(High Performance Liqiud Chromatography; HPLC)是用特制微粒（<10um）充填的層析柱作為固定相，通過高壓使液體流動相快速通過層析柱而達到快速有效分離液相中各種物質(zhì)的層析技術。它具有分離效果好、分析速度快，檢測靈敏度高等特點。在醫(yī)藥衛(wèi)生和生物化學中得到廣泛的應用，蛋白質(zhì)、糖類、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等大分子以及高分子聚合物都能用HPLC測定。 典型的GX液相色譜儀包括輸液系統(tǒng)、進樣分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成。流動相用一高壓泵輸入，由于流動相液體中常溶有微量氣體，脫去其中氣體是很有必要的。在分離過程中按一定程序連續(xù)改變流動相的離子強度、pH和極性，以改變分離條件、提高分離效果、縮短分離時間，因此，需要兩臺高壓泵。進樣可以是注射器進樣，也可以是進樣閥進樣。HPLC使用的檢測器不少，但商品化的還不多，應用Z多的是紫外或紫外－可見分光檢測器，還有熒光檢測器、示差檢測器和電化學檢測器等。 （一）方法原理 1．液固吸附層析法 在色譜柱中填充固體吸附劑，待測組分通過色譜柱時，不斷地被吸附劑吸附和被流動相解吸附?；诓煌M分非被吸附和被解吸附的行為差異，從而達到分離的目的。常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土等。 2．液液分配層析法 系在固體填充顆粒上涂上一層薄薄的固定液，待測組分在固定相和流動相之間進行連續(xù)的分配萃取，由于被分離物質(zhì)在兩相間的分配系數(shù)不同而達到分離目的。 3．離子交換層析法 在色譜柱中填充離子交換樹脂。帶電離子隨流動相經(jīng)色譜柱時，與帶有異性電荷的樹脂有一定的親和力而得以適當保留。由于各種離子與樹脂的親和力不同，其保留行為也不同，從而得以分離。 （二）臨床應用 GX液相層析法是目前Z好的血藥濃度監(jiān)測方法，但在實際應用中還存在一些問題，如每遇到一個新藥必須摸索測定的Z佳條件；各種藥物的測定條件不同，要不斷的更換流動相甚至色譜柱；每次只能測定一種藥物，至多只能測定一類藥物，無法測定性質(zhì)不同的藥物。因此，GX液相層析法用于常規(guī)血藥濃度監(jiān)測，只適用于少量常用的某些特定藥物，大大限制了它的推廣應用。鑒于臨床的需要，國外一些公司設計了自動GX液相色譜儀，該儀器具有如下優(yōu)點：①固定色譜柱和流動相，使一臺儀器適合多種藥物的檢測。②利用計算機技術，儲存幾百種藥物的圖譜，能自動識別未知藥物。③為提高圖譜鑒別能力，該機利用了三維光譜、出峰時間等多種手段。④自動進樣系統(tǒng)使儀器自動定量或定性測定，分析多達50個樣品。GX液相色譜

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