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  badjoy0903孑 2017-06-02 00:00:00

  溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細(xì)胞合成并分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙酰多糖酶。存在于唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細(xì)菌。由于它的高等電點(diǎn)( pH11.0 )，使它能與細(xì)菌牢固結(jié)合，并水解細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖，使細(xì)菌裂解死亡。 本實(shí)驗(yàn)在平板上進(jìn)行唾液…溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細(xì)胞合成并分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙酰多糖酶。存在于唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細(xì)菌。由于它的高等電點(diǎn)( pH11.0 )，使它能與細(xì)菌牢固結(jié)合，并水解細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖，使細(xì)菌裂解死亡。本實(shí)驗(yàn)在平板上進(jìn)行唾液酶的測定。溶菌酶與枯草芽胞桿菌( Bacillus subtilis )作用后，可使該菌因細(xì)胞壁破壞而溶解，致使瓊脂板加樣孔周圍出現(xiàn)溶菌環(huán)。溶菌環(huán)直徑與樣品中溶菌酶含量的對(duì)數(shù)呈直線關(guān)系?！静牧稀?? 無菌 PBS ( pH6.4 ， 1/15mol/L )， 5mol/LKOH ， 3%PBS 瓊脂，溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品，受驗(yàn)者唾液。2? 枯草芽胞桿菌 12 小時(shí)培養(yǎng)物。3? 10×100 試管，試管架，無菌平皿，打孔器，微量加樣器。4? 分光光度計(jì)，水浴箱，溫箱等?！痉椒ā烤号渲疲簩?PBS 加入枯草芽胞桿菌斜面，置室溫 5-10 分鐘后制成菌懸液；在波長 640nm 處，測定菌懸液的濃度，并將菌液濃度調(diào)至透光率 30-40% 。2. 溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)液配制：稱取溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品，用 PBS 配成 1000 m g/ml ，置冰箱凍存，臨用時(shí)再稀釋成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。3. 收集唾液標(biāo)本：待檢測者用清水漱口后，將唾液收集于消毒平皿內(nèi)待用。4. 加熱融化 3% 瓊脂，冷至 60 -70℃ ，與預(yù)熱好的枯草芽胞桿菌菌懸液等體積混合，到平板。用打孔器在平板上打孔，孔間距約 1.5cm ， 每平板可打孔 8-9 個(gè)。5. 各孔內(nèi)依次加溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品和唾液樣品，每孔 20 m l 。6. 置于 24 -26 ℃ 12-18 小時(shí)后測量溶菌環(huán)直徑?！窘Y(jié)果判斷】記錄溶菌環(huán)的直徑( mm )于下表，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出所測樣品的溶菌酶含量。

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