參與評論

評論

登錄后參與評論

全部評論(1條)

• 

  mv空谷幽蘭1989 2017-06-16 00:00:00

  液相色譜柱和液質(zhì)色譜柱能混用 1.色譜柱它包括空柱和填料。空柱是內(nèi)壁拋光的不銹鋼管，內(nèi)徑為4～5mm，長100～250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈，用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中，用柱式機械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動相。等基線平直后可用苯、萘、菲的混合試液，用正己烷(含 0.05%甲醇)或甲醇：水(83：17)為流動相測定柱效及分離度塔板數(shù)在2～3萬/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好。為防止柱污染，常用1個 50mm長，4~5mm內(nèi)徑，裝有硅膠(40-50mm)或立柱相同填料的保護柱(預(yù)柱)接在主柱之前，以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng)，以洗去鹽類、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚，再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。 2.流動相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動相放于貯液瓶中，經(jīng)過有濾過頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進入色譜柱，Z后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法(isocratic dlution)，即自洗脫開始到結(jié)束，溶劑的配比恒定。另一類為梯度洗脫法(gradicnt clution)，即使溶劑的極性強度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，從而使同一個試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離，而整個色譜過程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測的反相GX液相色譜法中。 3.檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測器應(yīng)用于對紫外光有吸收的藥物，大多數(shù)藥物分子對紫外光有吸收，故能較普遍采用，檢測限有0.1μg左右。紫外檢測器有固定波長型、可變波長型及掃描器，既能使流動相停流作組分的定性定量檢測，又能提高測定靈敏度，重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測器對能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。80年代應(yīng)用激光替代氙燈光源，光強度增加了3~4倍，對某些藥物的檢測限可達pg級。電化學(xué)檢測器是由一個碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測兒茶酚胺類及有酚類基團的各種藥物和代謝物。流出組分進入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流，放大后檢測，檢測限pg級。 4.數(shù)據(jù)處理現(xiàn)代GX液相色譜儀帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，除記錄譜外，還能自動記錄峰的保留時間，能自動積分求算峰面積，并能按照預(yù)定的程序作有關(guān)計算，報告分析結(jié)果。 GX液相色譜儀使用過程中常見問題及其解決方法 1 液相色譜儀系統(tǒng) 液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進樣器、柱、柱溫箱、檢測器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成(如圖1所示)。對于整個系統(tǒng)而言，柱子、泵和檢測器是核心部件，同時也是容易出事故的主要場所。 2 常見問題及解決方法 2.1 針對柱壓問題(表1) 柱壓問題是使用GX液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值，而是指壓力波動范圍在50PSI之間。壓力過高、過低及波動較大都屬于柱壓問題，但柱壓的高低與色譜柱的種類、品牌、液相系統(tǒng)本身及使用的流動相種類相聯(lián)系。值得注意的是在使用梯度洗脫時，進柱壓的平穩(wěn)緩慢的變化是允許的。 在實際應(yīng)用中柱壓過高可從以下幾個方面來考慮[1]。首先考慮柱子是否被堵，此時可更換一根新柱子進行檢測。 2.2 針對保留時間漂移的問題 [2，3] (表2) 保留時間的改變是很多液相色譜使用者常碰到的問題，其包括了保留時間增大和減小。它的產(chǎn)生與很多原因有關(guān)。 2.3 針對異常色譜峰問題[2-4] 異常的色譜峰指的是色譜圖中無峰或出現(xiàn)負峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對稱等情況。具體情況與原因分析如表3。 3 GX液相色譜儀的保養(yǎng)[5-7] 3.1 HPLC的日常操作條件 工作溫度10～30℃; 相對濕度<80%; Z好是恒溫、恒濕，遠離高電干擾、高振動設(shè)備。 3.2 泵的保養(yǎng) 使用流動相盡量要清潔;進液處的沙芯過濾頭要經(jīng)常清洗;流動相交換時要防止沉淀;避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡。 3.3 進樣器的保養(yǎng) 每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進樣口，防止樣品的交叉污染。 3.4 柱的保養(yǎng) 柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動;當(dāng)柱子和色譜儀連接時，閥件或管路一定要清洗干凈;要注意流動相的脫氣; 避免使用高粘度的溶劑作為流動相;進樣樣品要提純;嚴(yán)格控制進樣量;每天分析工作結(jié)束后，要清洗進樣閥中殘留的樣品;每天分析測定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗?若分析柱長期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機溶劑保存并封閉。 3.5 檢測器(UV)的保養(yǎng) 紫外燈的保養(yǎng)要在分析前、柱平衡得差不多時，打開檢測器;在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測器。同時樣品池要保養(yǎng)。 4 結(jié)語 在GX液相色譜使用過程中故障排出時要遵守以下原則：一次只改變一個因素，從而確定假定因素與問題之間的聯(lián)系;如果通過更換組件來排查故障時要注意將拆下的完好組件裝回原位，從而避免浪費;養(yǎng)成良好的記錄習(xí)慣，一個良好的記錄是成功地進行故障排除的關(guān)鍵。 總之，在使用GX液相色譜時一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)，儀器系統(tǒng)的干凈是用好儀器和維護維修儀器的關(guān)鍵。

  贊(8)

  回復(fù)(0)

  評論

  評論

  登錄后參與評論