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  chenliGX 2016-04-03 13:49:15

  HPLC用水來源 1 專門的純水機(jī)或超純水機(jī)； 2 去離子水重蒸； 3 二次或三次重蒸水； 4 采用類似家用的純水機(jī)； 5 市場(chǎng)上瓶裝的純凈水或蒸餾水； 6 其它途徑 以上的水除第1項(xiàng)的水能用于梯度淋洗外，其余的水均難用于梯度淋洗。不管采用何種途徑，配制流動(dòng)相應(yīng)用新鮮水，水質(zhì)越高放置時(shí)間越短。 理想的HPLC用水應(yīng)為18.2MΩ的超純水，并通過0.22um的濾膜，除去熱源、有機(jī)物、無機(jī)離子及空氣等。 Z小檢測(cè)限的計(jì)算方法 （以N2000色譜工作站為例） CL=2*Nd*c*20/HV 注：Nd 基線噪聲，單位：mV c 樣品濃度 H 峰高，單位：mV（或AU） V 進(jìn)樣體積 例： 如基線噪聲為20微伏即0.02mV，萘的甲醇標(biāo)樣溶液濃度為0.0001g/L，峰高145000微伏即145mV，進(jìn)樣體積為20微升，即得： CL=2*0.02*0.0001*20/145*20=2.76e-8 即10的負(fù)8次方 對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)時(shí)應(yīng)該遵循的幾條基本規(guī)則 1. 一次規(guī)則 當(dāng)系統(tǒng)出了故障，你可以試探性地改變某些狀態(tài)，一次可以改變一個(gè)參數(shù)。例如，限制色譜峰脫維的問題，可以依次改變流動(dòng)相，換保護(hù)柱，換分析柱等。做一些簡(jiǎn)單的改變步驟，也許就能解決問題。 2. 二次比較規(guī)則 在動(dòng)手檢修之前已經(jīng)明確了故障所在，或者已經(jīng)確定了解決故障的方案。換句話說，動(dòng)手之前已經(jīng)找對(duì)了解決辦法。例如，在進(jìn)樣過程中發(fā)現(xiàn)內(nèi)標(biāo)物的峰值變低了，可以重復(fù)進(jìn)樣看看重復(fù)性如何，如果是偶然變低，是否是定量管里進(jìn)了氣泡。這個(gè)規(guī)則可用于考察系統(tǒng)改變后的情況。更換了流動(dòng)向后在正式進(jìn)樣前可以進(jìn)兩次標(biāo)準(zhǔn)品以檢查保留時(shí)間的穩(wěn)定情況和色譜峰的穩(wěn)定性。在梯度洗脫中如果出現(xiàn)了多余的峰，可以空載梯度洗脫一次（真的有問題嗎？），用此規(guī)則可以避免不必要的改變，盡快確定糾正措施。 3. 取代規(guī)則 用好的部件換下可疑的部件，是查找故障的Z好方法。如果你懷疑檢測(cè)器引起了噪音，就換一個(gè)性能好的檢測(cè)器。如果故障被排除了，就說明換下的檢測(cè)器有問題。這個(gè)規(guī)則應(yīng)用的規(guī)模有大有小，可以從換整個(gè)部件到換印刷線路板上的集成塊。 4. 換回規(guī)則 這個(gè)規(guī)則和取代規(guī)則一起運(yùn)用，好部件取代了可疑部件后情況并未得到改善，應(yīng)重新?lián)Q上原部件。這樣做的維修費(fèi)用Z小，也防止了用過的部件積壓下來。這條規(guī)則僅適用于單一的故障。換回原則不適用于以下的情況： （1） 在取下時(shí)新部件已損壞（如泵密封墊圈）； （2） 部件價(jià)格低（如柱內(nèi)襯過濾片）； （3） 重新裝上原部件要冒損壞的風(fēng)險(xiǎn)； （4） 定期更換的部件。 5. 參考條件規(guī)則 通常有兩種參考條件：①標(biāo)準(zhǔn)參考條件；②試驗(yàn)參考條件。 標(biāo)準(zhǔn)參考條件也叫標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件，是從一個(gè)系統(tǒng)到另一個(gè)系統(tǒng)，從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室都易于驗(yàn)證的條件。用該條件所測(cè)得的數(shù)據(jù)有助于識(shí)別實(shí)際試驗(yàn)和系統(tǒng)間的問題。如果在某試驗(yàn)條件下系統(tǒng)壓力升高，而在標(biāo)準(zhǔn)條件下壓力正常。這說明系統(tǒng)異常是由實(shí)驗(yàn)室的變化所引起的。下表列舉了啟用新色譜柱是的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件，在使用過程中也可用此標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)條件檢查系統(tǒng)的情況。 流動(dòng)相 甲醇/水（體積比=70/30） 色譜柱 C18 反相 流速 1mL/min 檢測(cè)器 UV 254nm 樣品 尿嘧啶（用于t0） 苯酚，苯乙酮，硝基苯，苯甲醚，甲苯 流動(dòng)相 正己烷/異丙醇（體積比=75/25） 色譜柱 腈基 極性鍵合相 流速 1mL/min 檢測(cè)器 UV 254nm 樣品 硝基苯，芐醇，2，4-二硝基甲苯，對(duì)硝基芐醇 流動(dòng)相 正己烷/二氯甲烷/異丙醇胺（體積比=95/4/1） 色譜柱 硅膠 正相 流速 1mL/min 檢測(cè)器 UV 254nm 樣品 2-苯-2-丙醇，甲芐醇，肉桂醇 試驗(yàn)參考條件是用于檢查正常系統(tǒng)每天的工作情況。要選Z方便的方法驗(yàn)證這種條件。每天可以打印兩張校正用色譜圖作對(duì)照，檢查保留時(shí)間、峰寬、系統(tǒng)壓力等方面的變化。發(fā)現(xiàn)峰的斜率、色譜柱塔板數(shù)和其他參數(shù)與原來色譜圖相比有了變化，說明系統(tǒng)在運(yùn)行中可能發(fā)生了問題。當(dāng)然發(fā)生問題不結(jié)合實(shí)際分析程序考慮，只通過查找標(biāo)準(zhǔn)參考色譜圖是不能一目了然的。 6. 記錄規(guī)則 這條規(guī)則往往被人忽視。應(yīng)該在每次維護(hù)和故障排除后都作記錄。例如，對(duì)系統(tǒng)的某一特定故障因?yàn)闆]作記錄就不可能系統(tǒng)地分析問題，費(fèi)時(shí)又費(fèi)力。從長(zhǎng)遠(yuǎn)掛點(diǎn)看，系統(tǒng)發(fā)生的特定故障對(duì)今后的操作也有極其重要的意義。每臺(tái)儀器都應(yīng)備有維修記錄本，內(nèi)容包括日期、故障部位、現(xiàn)象、產(chǎn)生的原因、解決的辦法和結(jié)果等。還有一點(diǎn)要注意，試過或換下的部件都要貼上標(biāo)志。 做好維修保養(yǎng)記錄有如下好處： （1） 讓所有的操作人員都知道發(fā)生了什么故障，在操作過程中以引起注意； （2） 幫助操作人員描述故障現(xiàn)象； （3） 當(dāng)再次發(fā)生故障時(shí)可根據(jù)資料盡快解決問題。 7. 預(yù)測(cè)規(guī)則 有維修實(shí)踐和保養(yǎng)習(xí)慣的人員應(yīng)能夠預(yù)測(cè)系統(tǒng)的故障，平時(shí)在保養(yǎng)方面多投入些時(shí)間，系統(tǒng)會(huì)以減少故障作為報(bào)答，同時(shí)也消除了連鎖性的損壞。例如，平時(shí)不注意保養(yǎng)，泵的密封墊圈壞了，造成流動(dòng)相滲漏，會(huì)腐蝕泵和其它部件。善于保養(yǎng)能節(jié)約時(shí)間和金錢，而不是儀器控制了操作人員。例如，每天開始工作或結(jié)束工作時(shí)發(fā)現(xiàn)燈壽命引起基線漂移就把燈換下來。如果等到燈全壞了，就需要停機(jī)，造成的損失可能比一個(gè)燈的費(fèi)用還要高。 8. 緩沖液規(guī)則 這條規(guī)則提醒你停機(jī)時(shí)一定要洗凈系統(tǒng)中的緩沖物。系統(tǒng)中的緩沖物的殘余會(huì)造成磨損、腐蝕和阻塞。另外，生理緩沖液極易受到細(xì)菌和霉菌的影響。理想的沖洗液是不含緩沖物的相同組成的流動(dòng)相。不要讓純水儲(chǔ)藏于系統(tǒng)中，以防生長(zhǎng)細(xì)菌?？稍谒屑尤?0%的有機(jī)溶劑或0.02~0.05%的疊氮化鈉。在實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)按如下程序沖洗：用純水沖洗30~60min(1mL/min)再用甲醇沖洗30min后關(guān)機(jī)。千萬不能一開機(jī)就用有機(jī)溶劑沖洗，否則無機(jī)鹽就`會(huì)沉淀在系統(tǒng)中，造成不良后果。 HPLC日常維護(hù)辦法之一：壓力異常 操作壓力的變化往往是故障的征兆。從下表中找出所觀察到的現(xiàn)象，并在右側(cè)的列表中參考相應(yīng)的解決方法。 A、 沒有壓力顯示，沒有流動(dòng)相流動(dòng) 原 因 解決方法 1Q、電源問題 1A、接通電源，開機(jī) 2Q、保險(xiǎn)絲被燒壞 2A、更換保險(xiǎn)絲 3Q、控制器設(shè)定不正確或設(shè)定失敗 3A、a、采取恰當(dāng)?shù)脑O(shè)定 b、修理或更換控制器 4Q、柱塞桿折斷 4A、更換柱塞桿 5Q、泵頭內(nèi)有空氣 、溶劑脫氣、啟動(dòng)泵抽出空氣 6Q、流動(dòng)相不足 6A、a、補(bǔ)充流動(dòng)相b、更換入口濾頭 7Q、單向閥損壞 7A、更換單向閥 8Q、漏液 8A、擰緊或更換手緊接頭 B、 流動(dòng)相流動(dòng)正常，但沒有壓力顯示 原 因 解決方法 1Q、儀表損壞 1A、更換儀表 2Q、壓力傳感器損壞 2A、更換壓力傳感器 C、 壓力持續(xù)偏高 原 因 解決方法 1、流速設(shè)定過高 1、調(diào)整流速設(shè)定 2、柱前篩板堵塞 2、a、在允許情況下反沖色譜柱 b、更換篩板c、更換色譜柱 3、流動(dòng)相使用不當(dāng)或緩沖鹽的結(jié)晶沉淀 3、a、使用恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相b、沖洗色譜柱 4、色譜柱選擇不當(dāng) 4、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱 5、進(jìn)樣閥損壞 5、清洗或更換進(jìn)樣閥 6、柱溫過低 6、提高溫度 7、控制器失常 7、修理或更換控制器 8、保護(hù)柱阻塞 8、清洗或更換保護(hù)柱 9、在線過濾器阻塞 9、清洗或更換在線過濾器 D、 壓力持續(xù)偏低 原 因 解決方法 1、流速設(shè)定過低 1、調(diào)整流速 2、系統(tǒng)漏液 2、確定漏液位置并維修 3、色譜柱選擇不當(dāng) 3、選擇恰當(dāng)?shù)纳V柱 4、柱溫過高 4、降低溫度 5、控制器失常 5、維修或更換控制器 E、 壓力不斷上升 原 因 解決方法 1、見列表C 1、見列表C F、 壓力降為零 原 因 解決方法 1、見列表A、B 1、見列表A、B G、 壓力不斷下降，但不回零 原 因 解決方法 1、見列表D 1、見列表D H、 壓力波動(dòng) 原 因 解決方法 1、泵中有氣體 1、a、溶劑脫氣b、從泵中除去氣體 2、單向閥損壞 2、更換單向閥 3、泵密封損壞 3、更換泵密封 4、脫氣不充分 4、a、溶劑脫氣b、改變脫氣方法（使用在線脫氣法等） 5、系統(tǒng)漏液 5、確定漏液位置并維修 6、使用梯度洗脫 6、由于流動(dòng)相粘度的變化引起的壓力波動(dòng) HPLC日常維護(hù)辦法之二：漏液 通?？梢酝ㄟ^擰緊或更換管路接頭來解決漏液的問題。但值得注意的是過份擰緊會(huì)導(dǎo)致金屬接頭的漏液和塑料接頭的磨損。如果通過稍微擰緊接頭不能解決漏液的問題，就必須將接頭取下，檢查是否損壞（例如，卡套損壞、密封表面有雜質(zhì)）；損壞的接頭應(yīng)該更換掉。 A、 接頭處漏液 原 因 解決方法 1、接頭松動(dòng) 1、擰緊 2、接頭磨損 2、更換 3、接頭過緊 3、a、擰松，再重新擰緊 b、更換 4、接頭被污染 4、a、拆下清洗 b、更換 5、部件不匹配 5、使用同一品牌的配件 B、 泵漏液 原 因 解決方法 1、單向閥松動(dòng) 1、a、擰緊單向閥（不必?cái)Q的過緊） b、更換單向閥 2、接頭松動(dòng) 2、擰緊接頭（不必?cái)Q的過緊） 3、混合器密封損壞 3、a、更換混合器密封 b、更換混合器 4、泵密封損壞 4、維修或更換泵密封件 5、壓力傳感器損壞 5、維修或更換壓力傳感器 6、脈沖阻尼器損壞 6、更換脈沖阻尼器 7、比例閥損壞 7、a、檢查隔膜，如果漏液立即更換 b、檢查手緊接頭，損壞的立即更換 8、放空閥的損壞 8、a、擰緊放空閥 b、更換放空閥 C、 進(jìn)樣閥漏液 原 因 解決方法 1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1、重新安裝或更換進(jìn)樣閥 2、定量環(huán)阻塞 2、更換定量環(huán) 3、進(jìn)樣口密封松動(dòng) 3、調(diào)整 4、進(jìn)樣針頭尺寸不合適 4、使用恰當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣針 5、廢液管中產(chǎn)生虹吸 5、保持廢液管高于廢液液面 6、廢液管阻塞 6、更換或疏通廢液管 D、 色譜柱漏液 原 因 解決方法 1、尾端接頭松動(dòng) 1、擰緊接頭 2、卡套內(nèi)有填料 2、拆下、清洗卡套、重新安裝 3、篩板厚度不合適 3、使用合適的篩板（參考下表） 篩板選擇指導(dǎo) 物質(zhì)粒徑 篩板孔徑 3-4u 0.5u 5-20u 2u E、 檢測(cè)器漏液 原 因 解決方法 1、流通池墊片損壞 1、a、避免過大的背景壓力（壓力降） b、更換墊片 2、流通池窗破碎 2、更換窗口 3、手緊接頭漏液 3、擰緊或更換 4、廢液管阻塞 4、更換廢液管 5、流通池阻塞 5、重新安裝或更換 HPLC日常維護(hù)辦法之三：譜圖的各種問題 液相色譜系統(tǒng)的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。 A、 峰拖尾 原 因 解決方法 1、篩板阻塞 1、a、反沖色譜柱 b、更換進(jìn)口篩板 c、更換色譜柱 2、色譜柱塌陷 2、填充色譜柱 3、干擾峰 3、a、使用更長(zhǎng)的色譜柱 b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱 4、流動(dòng)相PH選擇錯(cuò)誤 4、調(diào)整PH值。對(duì)于堿性化合物，低PH值更有利于得到對(duì)稱峰 5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng) 圖 5、a、加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑 b、更改色譜柱 B、 峰前延 原 因 解決方法 1、柱溫低 1、升高柱溫 2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng) 2、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 3、樣品過載 3、降低樣品含量 4、色譜柱損壞 4、見A1、A2 C、 峰分叉 原 因 解決方法 1、 保護(hù)柱或分析柱污染 圖 1、取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。 2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相 2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。 D、 峰變形 原 因 解決方法 1、樣品過載 1、減少樣品載量 E、 早出的峰變形 原 因 解決方法 1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng) 1、a、減少進(jìn)樣體積 b、運(yùn)用低極性樣品溶劑 F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 原 因 解決方法 1、柱外效應(yīng) 1、a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路） b、使用小體積的流通池 G、 K’增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重 原 因 解決方法 1、二級(jí)保留效應(yīng)，反相模式 1、a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品） d、更換一支柱子 2、二級(jí)保留效應(yīng)，正相模式 2、a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入水（或多官能團(tuán)化合物） d、SY另一種方法 3、二級(jí)保留效應(yīng)，離子對(duì) 3、加入三乙胺（或堿性樣品） H、 酸性或堿性化合物的峰拖尾 原 因 解決方法 1、緩沖不合適 1、a、使用濃度50-100mM的緩沖液 b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液 I、 額外的峰 原 因 解決方法 1、樣品中有其他組份 1、正常 2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰 2、a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率 b、提高流速 3、空位或鬼峰 3、a、檢查流動(dòng)相是否純凈 b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 c、減少進(jìn)樣體積 J、 保留時(shí)間波動(dòng) 原 因 解決方法 1、溫控不當(dāng) 1、調(diào)好柱溫 2、流動(dòng)相組分變化 2、防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等） 3、色譜柱沒有平衡 3、在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱 K、 保留時(shí)間不斷變化 原 因 解決方法 1、流速變化 1、重新設(shè)定流速 2、泵中有氣泡 2、從泵中除去氣泡 3、流動(dòng)相選擇不恰當(dāng) 3、a、更換合適的流動(dòng)相 b、選擇合適的混合流動(dòng)相 L、 基線漂移 原 因 解決方法 1、柱溫波動(dòng)。（即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。） 1、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器 圖 2、流動(dòng)相不均勻。（流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。） 2、使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。 3、流通池被污染或有氣體 3、用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸） 4、檢測(cè)器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線） 4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。 5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化 5、更改配比或流速。為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。 6、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí) 6、用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。 7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成 7、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑 8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。 8、使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。 9、使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)整。 9、重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。 10、檢測(cè)器沒有設(shè)定在Z大吸收波長(zhǎng)處。 10、將波長(zhǎng)調(diào)整至Z大吸收波長(zhǎng)處 M、 基線噪音（規(guī)則的） 原 因 解決方法 1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣 1、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。 2、漏液 圖 2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。 3、流動(dòng)相混合不完全 3、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑 4、溫度影響（柱溫過高，檢測(cè)器未加熱） 4、減少差異或加上熱交換器 5、在同一條線上有其他電子設(shè)備 5、斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。 6、泵振動(dòng) 6、在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器 N、 基線噪音（不規(guī)則的） 原 因 解決方法 1、 漏液 圖 1、見第三部分。檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。 2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成 2、檢查流動(dòng)相的組成。 3、流動(dòng)相各溶劑不相溶 3、選擇互溶的流動(dòng)相 4、檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問題 4、斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源，檢查并更正。 5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡 5、用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng) 6、檢測(cè)器內(nèi)有氣泡 6、清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器 7、流通池污染（即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。） 7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池 8、檢測(cè)器燈能量不足 8、更換燈 9、色譜柱填料流失或阻塞 9、更換色譜柱 10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常 10、維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置 O、 寬峰 原 因 解決方法 1、流動(dòng)相組成變化 1、重新制備新的流動(dòng)相 2、流動(dòng)相流速太低 2、調(diào)節(jié)流速 3、漏液（特別是在柱子和檢測(cè)器之間） 3、見section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。 4、檢測(cè)器設(shè)定不正確 4、調(diào)整設(shè)定 5、柱外效應(yīng)影響 a、柱子過載 b、檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大 c、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大 d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng) 圖 5、 a、 小體積進(jìn)樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品 b、減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池 c、 使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路 d、減少響應(yīng)時(shí)間 6、緩沖液濃度太低 6、增加濃度 7、保護(hù)柱污染或失效 7、更換保護(hù)柱 8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低 8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。 9、柱入口塌陷 9、打開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子 10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被完全分離的物質(zhì)的峰 10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果 11、柱溫過低 11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過75℃ 12、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大 12、使用較小的時(shí)間常數(shù) P、 分離度降低 原 因 解決方法 1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間變化） 1、重新配置流動(dòng)相 2、保護(hù)柱或分析柱阻塞 圖 2、去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。 Q、 所有的峰面積都太小 原 因 解決方法 1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過高 1、減少衰減的設(shè)定 2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大 2、設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù) 3、進(jìn)樣量太少 3、增大進(jìn)樣量 4、記錄儀連接不當(dāng) 4、使用正確的連接 R、 所有的峰面積都太大 原 因 解決方法 1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過低 1、采取較大的衰減 2、進(jìn)樣過多 2、減少進(jìn)樣量 3、記錄儀連接不正確 3、正確連接記錄儀 HPLC日常維護(hù)辦法之四：進(jìn)樣閥的問題 以下問題在使用進(jìn)樣閥過程中有可能發(fā)生。 A、 手動(dòng)進(jìn)樣閥，轉(zhuǎn)動(dòng)不靈 原 因 解決方法 1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1、更換或調(diào)整轉(zhuǎn)子密封 2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度 B、 手動(dòng)進(jìn)樣閥，載樣困難 原 因 解決方法 1、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng) 1、重新安裝 2、定量環(huán)阻塞 2、清洗或更換定量環(huán) 3、進(jìn)樣器污染 3、清洗或更換進(jìn)樣器 4、管路阻塞 4、清洗或更換管路 C、 自動(dòng)進(jìn)樣閥，不能轉(zhuǎn)動(dòng) 原 因 解決方法 1、無壓力（或電源） 1、提供恰當(dāng)?shù)膲毫Γ娫矗? 2、轉(zhuǎn)子太緊 2、調(diào)整轉(zhuǎn)子的松緊度 3、進(jìn)樣閥安裝不當(dāng) 3、重新安裝 D、 自動(dòng)進(jìn)樣閥，其它問題 原 因 解決方法 1、阻塞 1、清洗或更換阻塞部件 2、機(jī)械故障 2、見隨機(jī)維修手冊(cè) 3、控制器故障 3、維修或更換控制器 HPLC日常維護(hù)辦法之五：由氣味、景象和聲音可以發(fā)現(xiàn)的問題 由氣味、景象和聲音可以發(fā)現(xiàn)的問題 你需要運(yùn)用你所有的感官去發(fā)現(xiàn)液相色譜的問題。你Z好養(yǎng)成習(xí)慣，每天花上幾分鐘運(yùn)用你的感官（除了味覺）來“感覺”你的液相色譜是否存在問題，這樣可以幫助你迅速找到問題所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先聞到它的氣味。大部分的問題是可以通過眼睛看到。 A、 溶劑的氣味 原 因 解決方法 1、漏液 1、見section 3 2、濺出 2、a、檢查廢液瓶是否已滿 b、找到濺出的部位并清洗干凈 B、 熱氣味 原 因 解決方法 1、儀器過熱 1、a、檢查并調(diào)節(jié)通風(fēng)設(shè)施 b、檢查并調(diào)節(jié)溫度設(shè)定 c、關(guān)掉儀器，查找維修手冊(cè) C、 讀數(shù)不正常 原 因 解決方法 1、壓力不正常 1、見section 2 2、柱溫箱問題 2、 a、檢查并調(diào)節(jié)設(shè)定 b、參照用戶手冊(cè) 3、檢測(cè)器燈失效 3、更換燈 D、 燈警告 原 因 解決方法 1、壓力超出極限值 1、 a、檢查是否阻塞 b、檢查并調(diào)節(jié)極限值的設(shè)定 2、其它警示燈 2、見用戶手冊(cè) E、 警告音 原 因 解決方法 1、溶劑泄漏/濺出 1、找到并解決 2、其它警告音 2、見用戶手冊(cè) F、 刺耳的短音或長(zhǎng)音 原 因 解決方法 1、軸承失效 1、見用戶手冊(cè) 2、潤(rùn)滑不夠 2、進(jìn)行恰當(dāng)?shù)臐?rùn)滑 3、機(jī)械故障 3、見用戶手冊(cè) HPLC日常維護(hù)辦法之六：常見故障及日常維護(hù) 常見故障及日常維護(hù) 下表中列出了液相色譜常見的一些問題，右側(cè)中則列出的日常維護(hù)的方法可以減少問題出現(xiàn)的頻率。括號(hào)中的數(shù)字是建議進(jìn)行維護(hù)的時(shí)間間隔。用戶手冊(cè)則提供您更多的維護(hù)方法。 溶劑瓶 問 題 維 護(hù) 1、進(jìn)口篩板阻塞 1、 a、更換（3-6個(gè)月） b、過濾流動(dòng)相，0.5u濾膜 2、氣泡 2、流動(dòng)相脫氣 泵 問 題 維 護(hù) 1、氣泡 1、流動(dòng)相脫氣 2、泵密封損壞 2、更換（3個(gè)月） 3、單向閥損壞 3、過濾流動(dòng)相，運(yùn)用在線過濾，準(zhǔn)備備用單向閥 進(jìn)樣閥 問 題 維 護(hù) 1、轉(zhuǎn)子密封損壞 1、 a、不要擰的過緊 b、過濾樣品 色譜柱 問 題 維 護(hù) 1、篩板阻塞 1、a、過濾流動(dòng)相 b、過濾樣品 c、運(yùn)用在線過濾或保護(hù)柱 2、柱頭塌陷 2、a、避免使用PH>8的流動(dòng)相（針對(duì)大部分硅膠的柱子） b、使用保護(hù)柱 c、使用預(yù)柱（飽和色譜柱） 檢測(cè)器 問 題 維 護(hù) 1、燈失效，檢測(cè)器響應(yīng)降低，噪音增大 1、更換（6個(gè)月）或準(zhǔn)備備用燈 2、流通池有氣泡 2、a、保持流通池清潔 b、池后使用反壓YZ器 c、流動(dòng)相脫氣 一般 問 題 維 護(hù) 1、腐蝕/摩擦損壞 1、在不使用時(shí)保持系統(tǒng)緩沖液的清潔

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