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  litianfu1990 2010-06-29 00:00:00

  一般采用柳樹，楊樹，冬青樹皮或獼猴桃果實等來提，當(dāng)然楊柳科的樹葉中水楊酸含量也是很高的。 水楊酸(salicylic acid，SA)是一種植物界廣泛存在的天然物質(zhì)，它不僅具有重要的藥理效應(yīng)，而且對植物生長發(fā)育過程以及植物抗病性方面有著廣泛的調(diào)控作用 。SA處理可以延緩多種果實的成熟衰老進(jìn)程。通過測定果實成熟衰老過程中組織內(nèi)源SA水平的變化，可以更好了解果實成熟衰老機(jī)理，為SA及其衍生物調(diào)控果實成熟衰老進(jìn)程積累基礎(chǔ)。但是植物組織中內(nèi)源SA水平很低，一般在1．0～8．4p~g／g之間_4-一-，果實組織中含量則相對更低，因此如何更有效地提取組織中的SA，并配以更靈敏的檢測方法，是研究SA對果實成熟衰老調(diào)控的重要內(nèi)容。 現(xiàn)有的植物組織內(nèi)源SA提取方法比較復(fù)雜，要經(jīng)過提取、液液分配、蒸干等多個步驟，回收率較低，一般在34．0％～80．7％之間，而血液中SA的提取是通過或與石油醚混合物一步萃取法，較現(xiàn)有的植物組織中SA提取法更為簡便。 1，提取方法： 取l0．0g葉片充分研磨后，置于50mL的離心管中， 加4．0mL 5％ 的三， 加水至20．0mL后再加入30．0mL，充分搖勻，浸提12h， 于l 000~g下離心5.0min，取出上部相，水相再經(jīng)重復(fù)提取2次，合并相，真空旋轉(zhuǎn)蒸干后，加入1．0mL 50％甲醇50％乙酸緩沖液(pH3．2)的混合液將其溶解，置于Ep— pendorf管中保存，即為游離態(tài)SA樣品。水相加l8．5％的HCI至終濃度為3．2％，于80cI=水浴中加熱1．0h，冷卻后用提取3次，合并相，蒸干后加入1．0mL 50％ 甲醇+50％乙酸緩沖液(pH3．2)的混合液溶解，置于Eppendorf管中保存，即為結(jié)合態(tài)SA樣品。樣品經(jīng)0，3 Ixm 的微孑L過濾器過濾后，用GX液相色譜(HPLC)進(jìn) 行檢測。 2，測定含量 1-2 主要儀器與試劑 主要儀器：BeckmanGX液相色譜儀(帶化學(xué)工作站)，島津熒光檢測器，Heidolp旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國)。 SA標(biāo)準(zhǔn)品，上海五聯(lián)化工廠生產(chǎn)；甲醇為色譜純，天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司生產(chǎn)；其余所用試劑均為分析純；水(二次蒸餾水，自制)。 HPLC檢測條件 Cl8柱，7．3mm~20cm；流動相： 甲醇：乙酸緩沖液(pH3．2)=50：50；島津熒光檢測器(激發(fā)波長為310nm，發(fā)射波長為415nm)；流速為1．0mIMmin；進(jìn)樣量為201xL。 1．5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 用50％甲醇+50％乙酸緩沖液(pH3．2)的混合液配制濃度為l，0m g／mL的SA溶液，再稀釋成0、0．25、0．5、l，0、2，01xg／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液用HPLC測定，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。 具體參考文獻(xiàn)： 題目：《獼猴桃果實中內(nèi)源水楊酸的提取、測定及其在采后研究中的應(yīng)用》獼猴桃果實中內(nèi)源水楊酸的提取、測定及其在采后研究中的應(yīng)用=Extraction and Determination of Endogenous Salicylic Acid from Kiwifruit and Its Application to Postharvest Research[刊，中]/張玉（浙江大學(xué)果實分子生理與生物技術(shù)實驗室，杭州 310029），陳昆松，張上隆//ZG食品學(xué)報.—2004，4（3）.—6～9 摘要：建立一種更有效的水楊酸（SA）提取、測定方法是了解SA對采后果實成熟衰老生理影響和調(diào)控機(jī)理的基礎(chǔ)。本文采用一步萃取法提取獼猴桃果實組織中內(nèi)源SA，用GX液相色譜法（熒光檢測器）測定其含量。結(jié)果顯示，本方法回收率為（96.4±3.0）%，顯著高于其它已報道的方法，Z低檢測限為0.9ng／g·FW。SA的熒光峰面積與濃度在0～2.0μg／mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，達(dá)到極顯著水平（r＝0.9991**），該方法簡便易行，樣品提取時間比以往報道的方法節(jié)省一半，因此可用于成熟果實組織中的內(nèi)源SA萃取和測定。圖4表1參12。 水楊酸(salicylic acid，SA)是一種植物界廣泛存在的天然物質(zhì)，它不僅具有重要的藥理效應(yīng)，而且對植物生長發(fā)育過程以及植物抗病性方面有著廣泛的調(diào)控作用 。SA處理可以延緩多種果實的成熟衰老進(jìn)程。通過測定果實成熟衰老過程中組織內(nèi)源SA水平的變化，可以更好了解果實成熟衰老機(jī)理，為SA及其衍生物調(diào)控果實成熟衰老進(jìn)程積累基礎(chǔ)。但是植物組織中內(nèi)源SA水平很低，一般在1．0～8．4p~g／g之間_4-一-，果實組織中含量則相對更低，因此如何更有效地提取組織中的SA，并配以更靈敏的檢測方法，是研究SA對果實成熟衰老調(diào)控的重要內(nèi)容。 現(xiàn)有的植物組織內(nèi)源SA提取方法比較復(fù)雜，要經(jīng)過提取、液液分配、蒸干等多個步驟，回收率較低，一般在34．0％～80．7％之間，而血液中SA的提取是通過或與石油醚混合物一步萃取法，較現(xiàn)有的植物組織中SA提取法更為簡便。 1，提取方法： 取l0．0g葉片充分研磨后，置于50mL的離心管中， 加4．0mL 5％ 的三， 加水至20．0mL后再加入30．0mL，充分搖勻，浸提12h， 于l 000~g下離心5.0min，取出上部相，水相再經(jīng)重復(fù)提取2次，合并相，真空旋轉(zhuǎn)蒸干后，加入1．0mL 50％甲醇50％乙酸緩沖液(pH3．2)的混合液將其溶解，置于Ep— pendorf管中保存，即為游離態(tài)SA樣品。水相加l8．5％的HCI至終濃度為3．2％，于80cI=水浴中加熱1．0h，冷卻后用提取3次，合并相，蒸干后加入1．0mL 50％ 甲醇+50％乙酸緩沖液(pH3．2)的混合液溶解，置于Eppendorf管中保存，即為結(jié)合態(tài)SA樣品。樣品經(jīng)0，3 Ixm 的微孑L過濾器過濾后，用GX液相色譜(HPLC)進(jìn) 行檢測。 2，測定含量 1-2 主要儀器與試劑 主要儀器：BeckmanGX液相色譜儀(帶化學(xué)工作站)，島津熒光檢測器，Heidolp旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國)。 SA標(biāo)準(zhǔn)品，上海五聯(lián)化工廠生產(chǎn)；甲醇為色譜純，天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司生產(chǎn)；其余所用試劑均為分析純；水(二次蒸餾水，自制)。 HPLC檢測條件 Cl8柱，7．3mm~20cm；流動相： 甲醇：乙酸緩沖液(pH3．2)=50：50；島津熒光檢測器(激發(fā)波長為310nm，發(fā)射波長為415nm)；流速為1．0mIMmin；進(jìn)樣量為201xL。 1．5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 用50％甲醇+50％乙酸緩沖液(pH3．2)的混合液配制濃度為l，0m g／mL的SA溶液，再稀釋成0、0．25、0．5、l，0、2，01xg／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液用HPLC測定，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。 具體參考文獻(xiàn)： 題目：《獼猴桃果實中內(nèi)源水楊酸的提取、測定及其在采后研究中的應(yīng)用》獼猴桃果實中內(nèi)源水楊酸的提取、測定及其在采后研究中的應(yīng)用=Extraction and Determination of Endogenous Salicylic Acid from Kiwifruit and Its Application to Postharvest Research[刊，中]/張玉（浙江大學(xué)果實分子生理與生物技術(shù)實驗室，杭州 310029），陳昆松，張上隆//ZG食品學(xué)報.—2004，4（3）.—6～9 摘要：建立一種更有效的水楊酸（SA）提取、測定方法是了解SA對采后果實成熟衰老生理影響和調(diào)控機(jī)理的基礎(chǔ)。本文采用一步萃取法提取獼猴桃果實組織中內(nèi)源SA，用GX液相色譜法（熒光檢測器）測定其含量。結(jié)果顯示，本方法回收率為（96.4±3.0）%，顯著高于其它已報道的方法，Z低檢測限為0.9ng／g·FW。SA的熒光峰面積與濃度在0～2.0μg／mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，達(dá)到極顯著水平（r＝0.9991**），該方法簡便易行，樣品提取時間比以往報道的方法節(jié)省一半，因此可用于成熟果實組織中的內(nèi)源SA萃取和測定。圖4表1參12。

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