DNA分子雜交的southern blotting的過程是什么？
2019-07-26 10:25:44
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DNA分子雜交的southern blotting的過程是什么？
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- 2019-07-26 10:29:44
- <p>1、制備樣品DNA<br/>2、限制性內(nèi)切酶消化樣品DNA<br/>3、凝膠電泳分離消化產(chǎn)物<br/>4、如果靶序列>5kb，在0.25M的HCl中進(jìn)行震蕩脫嘌呤10min，ddH2O洗一次<br/>5、用變性液震蕩處理30min，ddH2O洗一次<br/>6、中和液震蕩處理30min<br/>7、裁取合適大小的尼龍膜或硝酸纖維素膜進(jìn)行轉(zhuǎn)膜操作，可用真空轉(zhuǎn)膜儀或者搭濾紙橋，需要20×SSC<br/>8、制備探針，可用地 高 辛標(biāo)記（以地 高 辛為例）<br/>9、將膜放入雜交瓶，42°C預(yù)雜交30min<br/>10、倒掉預(yù)雜交液，加入雜交液，適當(dāng)?shù)臏囟冗M(jìn)行雜交4h至過夜<br/>11、洗膜，先用2×SSC+0.1%SDS，20-25°C洗2×5min，再用0.5×SSC+0.1%SDS洗2×15min。然后用washing buffer洗1-5min，接著用blocking solution洗30min后，用antibody solution洗30min，再用washing buffer洗2×15min，再用detection buffer洗2-5min后，取出膜，放于保鮮膜上，在結(jié)合有DNA的一面滴加CSPD ready-to-use后，立刻蓋上保鮮膜，讓CSPD ready-to-use均勻的布滿膜表面，室溫放置5min后，37°C溫育10min以上<br/>12、放射自顯影，可用成像系統(tǒng)信號累積模式顯影或用X-ray顯影</p>
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