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做qpcr需要用無(wú)核酸梅的槍頭嗎

南冰青 2017-04-27 12:25:28 540  瀏覽

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全部評(píng)論(1條)

  • 戒565 2017-04-28 00:00:00
    做qpcr需要用無(wú)核酸梅的槍頭 一般來(lái)講，進(jìn)行real-time qPCR MasterMix都是2×的濃縮液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR靈敏度高，所以每個(gè)樣品至少要做3個(gè)平行孔，以防在后面的數(shù)據(jù)分析中，由于Ct相差較多或者SD太大，無(wú)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。通常來(lái)講，反應(yīng)體系的引 物終濃度為100-400mM；模板如果是總RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情況下是1ul或者1ul的10倍稀釋液，要根據(jù)目的基因 的表達(dá)豐度進(jìn)行調(diào)整。當(dāng)然這些都是經(jīng)驗(yàn)值，在操作過(guò)程中，還需要根據(jù)所用MasterMix，模板和引物的不同進(jìn)行優(yōu)化，達(dá)到一個(gè)Z佳反應(yīng)體系。在反應(yīng)體 系配置過(guò)程中，有下面幾點(diǎn)需要注意： 1. MasterMix不要反復(fù)凍融，如果經(jīng)常使用，Z好溶解后放在4度。 2. 更多的配制Mix進(jìn)行，減少加樣誤差。Z好能在冰上操作。 3. 每管或每孔都要換新槍頭！不要連續(xù)用同一個(gè)槍頭加樣！ 4. 所有成分加完后，離心去除氣泡。

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