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  726536317 2013-08-29 00:00:00

  培養(yǎng)細(xì)菌的要素：適合培養(yǎng)基，培養(yǎng)方法和無菌操作 培養(yǎng)基：Z簡單，Z常用的就是細(xì)菌肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)基，也稱LB培養(yǎng)基。聽這個(gè)名字，顧名思義，就是絕大多數(shù)的可培養(yǎng)細(xì)菌（還有不可培養(yǎng)細(xì)菌，或者稱未培養(yǎng)細(xì)菌，自然界中僅有1%不到的細(xì)菌能被我們培養(yǎng)出來）都能在這個(gè)培養(yǎng)基上培養(yǎng)出來。 LB的好處是能培養(yǎng)絕大多數(shù)可培養(yǎng)細(xì)菌，但是他的確定是沒有初步鑒定能力，如果需要初步鑒定的話可以選擇一些顯色培養(yǎng)基 培養(yǎng)方法，一般情況下分需氧和厭氧兩種； 下面簡述需氧型細(xì)菌培養(yǎng)： 將你要培養(yǎng)細(xì)菌的器材、試劑、培養(yǎng)基等拿去滅菌（是滅菌不是消毒）并烘干；然后準(zhǔn)備超凈工作臺，酒精棉等，將要培養(yǎng)的細(xì)菌用移液器（液體保種）、滅菌牙簽、接種環(huán)等物（注意不要用手直接拿）接種到培養(yǎng)基中。液體和半液體培養(yǎng)基正置培養(yǎng)，固體培養(yǎng)基倒置培養(yǎng)。放入培養(yǎng)箱中。 有什么不懂直接問吧，可能描述的不好....

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  Iucky益了個(gè)達(dá)v 2017-10-09 00:00:00

  根據(jù)培養(yǎng)細(xì)菌的目的和培養(yǎng)物的特性培養(yǎng)方法分為一般培養(yǎng)法，二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法三種. 　　1. 一般培養(yǎng)法 將已接種過的培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)18-24小時(shí)，需氧菌和兼性厭氧菌即可于培養(yǎng)基上生長.少數(shù)生長緩慢的細(xì)菌，需培養(yǎng)3-7天直至一個(gè)月才能生長.為使培養(yǎng)箱內(nèi)保持一定濕度，可在其內(nèi)放置一杯水.培養(yǎng)時(shí)間較長的培養(yǎng)基，接種后應(yīng)將試管口塞棉塞后用石臘凡士林封固，以防培養(yǎng)基干裂. 　　2. 二氧化碳培養(yǎng)法 某些細(xì)菌，如牛流產(chǎn)布氏桿菌和胎兒弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空氣中才能生長，尤其是初代分離培養(yǎng)要求更為嚴(yán)格.將已接種的培養(yǎng)基置于二氧化碳環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)的方法即二氧化碳培養(yǎng)法，常用方法有以下幾種: 　?。?） 二氧化碳培養(yǎng)箱 可將已接種的培養(yǎng)基直接放入箱內(nèi)孵育，即可獲得二氧化碳環(huán)境. 　　（2） 燭缸法 將已接種的培養(yǎng)基，置于容量為2 000ml的磨口標(biāo)本缸或干燥器內(nèi).缸蓋或缸口處均需涂以凡士林，然后點(diǎn)燃蠟燭直立置入缸中，密封缸蓋.待燃自行熄滅時(shí)，容器內(nèi)約含5-10%的CO2 容器置37℃培養(yǎng). 　?。?） 重碳酸鈉-鹽酸法 每升容積的容器內(nèi)，重碳酸鈉與鹽酸按0.4g與3.5ml的比例，分別將兩種藥各置一器皿內(nèi)（如平皿內(nèi)），連同器皿置于標(biāo)本缸或干燥器內(nèi)，蓋嚴(yán)后使容器傾斜，兩種藥品接觸后即可產(chǎn)生二氧化碳. 　　3. 厭氧培養(yǎng)法 目前常用的厭氧培養(yǎng)方法有厭氧罐法，氣袋法及厭氧箱三種. 　　（1） 厭氧罐法 是目前應(yīng)用較廣泛的一種方法，共分為以下幾種. 　　抽氣換氣法:該法適用于一般實(shí)驗(yàn)室，其特點(diǎn)是較經(jīng)濟(jì)并可迅速建立厭氧環(huán)境.標(biāo)本接種后，將平板放入?yún)捬豕?，擰緊蓋子，用真空泵抽出罐中空氣，使壓力真空表至-79.98KPa，停止抽氣，充入高純氮?dú)馐箟毫φ婵毡碇羔樆?位，連續(xù)反復(fù)3次，Z后在罐內(nèi)-79.98KPa的情況下，充入70%的N2 ，20%H2 ，10%CO2 （有人改用20%CO2 及80%H2 ，亦可獲得好結(jié)果）.罐中需放入冷催化劑鈀粒，可催化罐中殘余的O2 和H2 化合成水.同時(shí)罐中應(yīng)放有美藍(lán)指示管，美藍(lán)在有氧的環(huán)境下呈藍(lán)色，無氧時(shí)為紅色.臨用前首先將美藍(lán)煮沸使變成無色，放入罐中先呈淺藍(lán)色，待罐中無氧環(huán)境形成，美藍(lán)即可持續(xù)無色. 　　氣體發(fā)生袋法:氣體發(fā)生袋系由錫箔密封包裝，其中含有兩種藥片，一種為含枸椽酸和重碳酸氫鈉的藥片，另一種是含有硼氫化鈉的藥片.前者遇水放出二氧化碳，后者可釋放氫.使用時(shí)在袋的右上角剪一小口，灌進(jìn)10ml蒸餾水，立即放入含有鈀粒，指示劑及平板培養(yǎng)基的厭氧罐中，擰緊蓋子經(jīng)2-3分鐘后，可感到蓋子微熱并有少量水蒸氣出現(xiàn).密封后1小時(shí)左右罐中的O2 的含量可低于<1%. 　?。?） 氣袋法 此種方法不需要特殊設(shè)備，操作簡單，使用方便，不但實(shí)驗(yàn)室中可用，而且外出采樣，現(xiàn)場接種也可用.原理與氣體發(fā)生袋完全相同，只是采用塑料袋代替了厭氧罐，氣袋為一透明而密閉的塑料袋，內(nèi)裝有氣體發(fā)生安瓿，指示劑安瓿，含有催化劑的帶孔塑料管各一支.其操作方法為首先將接種的平板培養(yǎng)基放入袋中，用彈簧夾夾緊袋口，然后用手指壓碎氣體安瓿，20分鐘后再壓碎指示劑安瓿，如果指示劑不變藍(lán)色，說明袋內(nèi)達(dá)到厭氧狀態(tài)，即可放入37℃進(jìn)行培養(yǎng). 　?。?） 厭氧培養(yǎng)箱 使用之前須仔細(xì)檢查厭氧裝備有無漏氣等問題，以及催化劑，指示劑質(zhì)量等.使用時(shí)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，保證箱內(nèi)氣體比例合理.

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  368班田孟藝 2017-09-18 00:00:00

  細(xì)菌培養(yǎng)是一種用人工方法使細(xì)菌生長繁殖的技術(shù)。大多數(shù)細(xì)菌可用人工方法培養(yǎng)，即將其接種于培養(yǎng)基上，使其生長繁殖。培養(yǎng)出來的細(xì)菌用于研究、鑒定和應(yīng)用。 具體培養(yǎng)步驟： 以光合細(xì)菌培養(yǎng)方法為例。光合細(xì)菌培養(yǎng)的方法，按次序分為容器、工具的消毒，培養(yǎng)基的制備，接種和培養(yǎng)管理四個(gè)步驟。 （一）容器、工具的消毒參考、此處從略。 （二）培養(yǎng)基的制備 1．培養(yǎng)用水 如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是淡水種，菌種培養(yǎng)可用蒸餾水，生產(chǎn)培養(yǎng)可用消毒的自來水（或井水）配制。如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是海水種，則用天然海水配制培養(yǎng)基，注意在海水中加入磷元素時(shí)，不能用磷酸氫二鉀，應(yīng)用磷酸二氫鉀，不然會(huì)產(chǎn)生大量沉淀。 2．滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養(yǎng)可把配好的培養(yǎng)液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉淀砂濾后的水用漂（或漂白液）消毒后使用。 3．培養(yǎng)基配制根據(jù)所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量，逐一溶解，混合，配成培養(yǎng)基。也可先配成母液，使用時(shí)按比例加入一定的量即可。 （三）接種培養(yǎng)基配好后，應(yīng)立即進(jìn)行接種。光合細(xì)菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的按種量比較高，一般為20%～50%，即菌種母液量和新配培養(yǎng)液雖之比為1∶4～1∶1，不應(yīng)低于20%，尤其是微氣培養(yǎng)，接種量更應(yīng)高些，否則光合細(xì)菌在培養(yǎng)液中很難占優(yōu)勢，影響培養(yǎng)的Z終產(chǎn)量和質(zhì)量。 （四）培養(yǎng)管理光合細(xì)菌的培養(yǎng)過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問題的分析處理等三個(gè)方面。 日常管理和測試： （1）攪拌和充氣：光合細(xì)菌培養(yǎng)過程中必須充氣或攪拌，作用是幫助沉淀的光合細(xì)菌上浮獲得光照，保持菌細(xì)胞的良好生長。小型厭氣培養(yǎng)常用人工搖動(dòng)培養(yǎng)容器的方法使菌細(xì)胞上浮，每天至少搖動(dòng)三次，定時(shí)進(jìn)行。大型厭氣培養(yǎng)則用機(jī)械攪拌器或使用小水泵使水緩慢循環(huán)運(yùn)轉(zhuǎn)，保持菌體懸浮。微氣培養(yǎng)是通過充氣幫助菌體上浮，因?yàn)榕囵B(yǎng)液中溶解氧含量增加，光合細(xì)菌繁殖受到Y(jié)Z，產(chǎn)量下降，所以必須嚴(yán)格控制充氣量。一般采用定時(shí)斷續(xù)充氣，充氣量控制在1～1.5升/（升·h）之間，溶解氧量保持在1×10-6以下。 （2）調(diào)節(jié)光照度：培養(yǎng)光合細(xì)菌需要連續(xù)進(jìn)行照明。在日常管理工作中，應(yīng)根據(jù)需要經(jīng)常調(diào)整光照度。白天可利用太陽光培養(yǎng)，晚上則需要人工光源照明，或完全利用人工光源培養(yǎng)。人工光源一般使用碘鎢燈或白熾燈泡。不同的培養(yǎng)方式所要求的光照強(qiáng)度有所不同。一般培養(yǎng)光照強(qiáng)度應(yīng)控制在2000～5000lx之間。如果光合細(xì)菌生長繁殖快，細(xì)胞密度高，則光照強(qiáng)度應(yīng)提高到5000～10000lx。光照強(qiáng)度可通過調(diào)整培養(yǎng)容器與光源的距離或使用可控電源箱調(diào)節(jié)。 （3）調(diào)節(jié)溫度：光合細(xì)菌對溫度的適應(yīng)范圍很廣，一船在23～39℃的范圍內(nèi)均能正常生長繁殖，可不必調(diào)整溫度。在常溫下培養(yǎng)也可通過調(diào)整，將溫度控制在光合細(xì)菌生長繁殖Z適宜的范圍內(nèi)，使光合細(xì)菌更好地生長。 （4）酸堿度的測定和調(diào)整：在培養(yǎng)光合細(xì)菌的過程中，必須注意酸堿度的變化。由于光合細(xì)菌的大量繁殖，菌液的pH值上升，這意味著光合細(xì)菌正處于指數(shù)生長期。但當(dāng)pH值超過Z適范圍甚至生長的適應(yīng)范圍時(shí)，光合細(xì)菌的生長達(dá)到頂點(diǎn)，隨后生長下降。如果能及時(shí)調(diào)整菌液的酸堿度，使pH值保持在Z適范圍，則光合細(xì)菌能繼續(xù)生長繁殖。為了延長光合細(xì)菌的指數(shù)生長期，提高培養(yǎng)基的利用率和單位水體的產(chǎn)量，測定和調(diào)整PH值是非常重要的。一船采用加酸的辦法來降低菌液的酸堿度，醋酸、乳酸和鹽酸部可使用，Z常用的是醋酸。在日常的管理工作中，必須每天或隔天測定菌液的pH值，當(dāng)pH值上升超出Z適范圍，即加酸調(diào)整。如果在培養(yǎng)過程中不測定、調(diào)整酸堿度，當(dāng)光合細(xì)菌的生長達(dá)到一定密度后pH值也上升到9以上，細(xì)菌生長受阻，此時(shí)應(yīng)采收或再擴(kuò)大培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中不調(diào)整PH值，獲得的Z終產(chǎn)量低。

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