如何減少ELISA試劑盒實驗中背景因素?

　　ELISA試劑盒實驗的原理在我們平時看來覺得很簡單，無非就是固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和閉。然而，即使是平常的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能影響整個實驗。在做完實驗時，我們是否能獲得有用的信息，這在很大程度上取決于結果的信噪比。背景噪音會直接關系到結果的判斷。那么怎樣才能降低ELISA試劑盒實驗中的背景因素呢，我們一起來了解。

　　洗滌很重要

　　洗滌步驟看似很無聊，其實很重要，因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。如有必要，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結合反應。如果背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

　　封閉更關鍵

　　封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高，懷疑封閉不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。但它們只在存在時起作用，因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%)，它會降低特異結合，產(chǎn)生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液，后者可協(xié)助洗滌過程中的封閉。蛋白封閉液則有所不同。它們與開放位點結合并封閉，同時穩(wěn)定與微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。

　　抗體濃度須優(yōu)化

　　如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住，非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。

　　檢測試劑要適量

　　另一點也很顯而易見：切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應加入終止液。

　　相信在注意這些細節(jié)后，我們就可以降低ELISA試劑盒實驗中背景因素，才可以獲得我們想要的結果信息。

　　本生(天津)健康科技有限公司由具有行業(yè)背景和豐富市場經(jīng)驗的專業(yè)人士組成，于為生命科學研究領域提供產(chǎn)品，為廣大科研工作者提供服務。  既能滿足研發(fā)類客戶對產(chǎn)品種類、包裝的特殊要求，也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試、中試到規(guī)?；a(chǎn)各個階段的綜合需求。

　　產(chǎn)品涵蓋有熒光定量PCR耗材(八聯(lián)管,單管,96孔板,384孔板,封板膜,輔助器等)，ELISA試劑盒，移液器吸嘴，離心管，凍存管，培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，培養(yǎng)基，抗體，血清，色譜耗材，針頭過濾器及實驗室常用耗材。  品種類超過萬種，廣泛應用于科研院校、ZX實驗室、分子生物學等科研領域。

　　如何減少ELISA試劑盒實驗中背景因素?本生一直視質量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

“曼”談光譜——熒光效應

大家好，我是曼曼，

好久不見，甚是想念。

之前在介紹拉曼光譜的波長選擇時，

我們曾提到過“熒光效應”

日常生活中熒光類物品隨處可見，

熒光筆、熒光粉、熒光燈等等，

這些日常用品在為我們帶來便捷

的同時也給予了我們美的視覺享受。

熒光效應是光與物質

之間的一種作用方式，

當紫外-可見光照射到物質時，

物質可以重新釋放出吸收的光，

并且其波長大于入射光的波長。

有色樣品和大生物分子的熒光特性非常強，熒光分析法可以直接利用這些物質自身發(fā)射的熒光進行測定分析；還可以通過熒光試劑把不發(fā)射熒光的物質轉化成能發(fā)射熒光的物質，再進行測定。

但對于拉曼光譜而言，熒光卻是一個致命的干擾，由于拉曼信號很弱，熒光信號又寬又強，會覆蓋拉曼信號。所以選擇適當?shù)姆绞結Z熒光效應尤為重要。

安東帕Cora家族YZ熒光的方式

【1064nm激發(fā)光波長】

熒光物質在長波長激光照射下不容易發(fā)出熒光，圖中藍色曲線為785nm下物質的拉曼光譜圖，拉曼信號幾乎全部被熒光覆蓋，紅色曲線是1064nm下該物質的拉曼光譜圖，沒有熒光的干擾。

【基線校正】

拉曼光譜基線校正的示意圖引自“白靜. 拉曼光譜預處理關鍵技術研究[D].合肥工業(yè)大學,2019. ”

熒光背景并不像拉曼峰那樣的尖銳，一般較為平

緩，可以通過多項式擬合或是其它方式擬合出熒光背景曲線，然后在光譜圖中將其扣除，達到去除熒光干擾的目的。

但是，該方法只能處理一些拉曼信號本身比較強的光譜，由于擬合誤差的影響，系統(tǒng)會將一些強度弱小的拉曼峰誤判為熒光背景加以扣除。

安東帕Cora系列拉曼光譜儀

安東帕Cora系列拉曼光譜儀專為快速質量控制、識別、定量和半定量分析而設計。該系列產(chǎn)品廣泛應用于化學，生物，安全，制藥，刑偵，食品，材料，地質領域以及其他科研領域。

倒置顯微鏡背景如何調?