斑馬魚是一種廣泛使用于科研與藥物研發(fā)的模型系統(tǒng)，由于其與人類疾病表型的相似性而廣受歡迎。許多基于成像的實驗可用來測定斑馬魚的表型變化，但是圖像的手動采集和分析非常繁瑣且耗時。這些過程的自動化會大大提高通量及數(shù)據(jù)質(zhì)量。在這里，我們展示了Operetta CLS?和Opera Phenix?如何進(jìn)行高通量的斑馬魚的成像和表型分析、篩選，使您能夠?qū)Ｗ⒂跀?shù)據(jù)評估而不是數(shù)據(jù)生成。

自動檢測高分辨率圖像-輕松鎖定斑馬魚

      用普通顯微鏡對96孔板中的斑馬魚進(jìn)行定位與成像非常耗時的。Harmony? 高含量分析軟件融合了PreciScan?智能圖像采集工具，集成低倍率預(yù)掃描工作流程，圖像分析，更高的放大倍率重新掃描，可完全實現(xiàn)自動化，以減少采集時間和無效的數(shù)據(jù)量，并顯著加快分析速度。斑馬魚的明場成像，通過PhenoLOGIC? 人工智能使圖像分割變得容易（圖1和圖2）。

通過機器自學(xué)習(xí)在微孔板中自動檢測斑馬魚

通過智能圖像識別提高檢測通量

通過自動水浸鏡頭獲取高分辨率共聚焦圖像

使用Harmony? 成像和分析軟件簡化與流程化圖像分析

圖1：自動定位：使用Harmony中的PhenoLOGIC功能對斑馬魚自動定位。A-5X明場預(yù)掃描。B-PhenoLOGIC經(jīng)過鼠標(biāo)點擊培訓(xùn)區(qū)分魚（綠點）和背景（紅點）C-以PhenoLOGIC為基礎(chǔ)的魚類識別，使用形狀進(jìn)一步優(yōu)化，過濾去除較小的錯誤識別的地區(qū)。

圖2：PreciScan預(yù)掃描定位下一步高倍鏡掃描的區(qū)域

以20x（1.0 NA水浸鏡頭）掃描預(yù)掃描的定位區(qū)域。Z軸共聚焦50層的Z大投影。700張圖像的采集時間<2分鐘。自動檢測和采集意味著無人值守。

表型的自動量化

分析基因表達(dá)模式

圖3：表達(dá)CFP，GFP，YFP和mCherry標(biāo)記蛋白的斑馬魚。樣品由維也納CCRI提供。

自動準(zhǔn)確地確定形態(tài)特征

Harmony? 成像與分析軟件可以輕松檢測熒光強度，形態(tài)和紋理的變化。示例（圖4）顯示單個熒光染料可用于識別不同的身體部分。根據(jù)寬度識別頭部與脊柱。等效橢圓用于描述脊柱的形狀并估計其曲率。尾軸（圖5）以類似的方式，自動檢測尾部曲率。

圖4：單一熒光染料，計算確定斑馬魚頭部/尾部比例

圖5：尾軸的自動檢測。

在3D圖像中，依舊看到細(xì)節(jié)

Harmony軟件提供了3D圖像的可視化樣品的工具， Opera Phenix和Operetta CLS高內(nèi)涵分析系統(tǒng)提供從1.25x到63x的各種放大倍數(shù)，63x并配備自動水浸鏡頭，提高靈敏度，減少深層樣本成像中的光學(xué)畸變。

圖6：斑馬魚尾部血管3D重構(gòu)

圖7：表達(dá)GFP和RFP的個體紅細(xì)胞

復(fù)制右邊括號鏈接進(jìn)行下載該方案完整版資料：（m.sdczts.cn/technology/file_157230.html）

關(guān)于珀金埃爾默：

珀金埃爾默致力于為創(chuàng)建更健康的世界而持續(xù)創(chuàng)新。我們?yōu)樵\斷、生命科學(xué)、食品及應(yīng)用市場推出獨特的解決方案，助力科學(xué)家、研究人員和臨床醫(yī)生解決Z棘手的科學(xué)和YL難題。憑借深厚的市場了解和技術(shù)專長，我們助力客戶更早地獲得更準(zhǔn)確的洞見。在，我們擁有12500名專業(yè)技術(shù)人員，服務(wù)于150多個國家，時刻專注于幫助客戶打造更健康的家庭，改善人類生活質(zhì)量。2018年，珀金埃爾默年營收達(dá)到約28億美元，為標(biāo)準(zhǔn)普爾500指數(shù)中的一員，紐交所上市代號1-877-PKI-NYSE。

了解更多有關(guān)珀金埃爾默的信息，請訪問www.perkinelmer.com.cn

尊敬的老師：

您好！我們誠摯地邀請您參加 5 月 26 日在上海舉辦的高內(nèi)涵成像技術(shù)與應(yīng)用研討會。本次應(yīng)用研討會旨在與科學(xué)家面對面的交流，分享使用高內(nèi)涵成像和分析技術(shù)的經(jīng)驗，期望為相關(guān)研究領(lǐng)域提供有用的信息，拓展思路。

高內(nèi)涵成像分析系統(tǒng)是一種集高分辨率、自動化、智能化、高通量于一體的通用檢測技術(shù)平臺，其為細(xì)胞水平的研究分析提供了高效的解決方案，是創(chuàng)新藥物研究、中藥藥效、腫瘤研究、神經(jīng)生物學(xué)、免疫學(xué)、干細(xì)胞研究等領(lǐng)域的重要研究工具。此次會議我們邀請企業(yè)、科研等專家學(xué)者共聚一堂，帶來 ImageXpress 高內(nèi)涵成像分析系統(tǒng)在各研究領(lǐng)域最 新進(jìn)展和應(yīng)用。

我們期待您的參與，并再次感謝您的關(guān)注和支持！

美谷分子儀器（上海）有限公司

時間

2023 年 5 月 26 日

地點：

上海浦東由由喜來登大酒店（上海市浦東新區(qū)浦建路 38 號）

推薦到達(dá)方式：

地鐵 4 號線塘橋站 3 號口右轉(zhuǎn) 20 米

報名方式：

掃一掃二維碼  即可報名參會

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斑馬魚身體延長而略呈紡錘形，頭小而稍尖，吻較短，全身布滿多條深藍(lán)色縱紋似斑馬，與銀白色或金黃色縱紋相間排列紋路比較有條理。在水族箱內(nèi)成群游動時猶如奔馳于非洲草原的斑馬群，故此得斑馬魚之美稱。斑馬魚和人類基因有著87%的高度相似性，作為模式生物的優(yōu)勢很突出，這意味著其實驗結(jié)果大多數(shù)情況下適用于人體，?？捎糜谒|(zhì)環(huán)境的監(jiān)測。

近期有位客戶需要一臺體視熒光顯微鏡用于斑馬魚研究，明美銷售經(jīng)理推薦體視熒光顯微鏡MZX81搭配顯微鏡相機MC50-S.

體視熒光顯微鏡MMZX81搭配顯微鏡MC50-S拍攝的斑馬魚

體視熒光顯微鏡MZX81采用優(yōu)異的無限遠(yuǎn)平行光路系統(tǒng)，LED熒光雙光路照明設(shè)計，性能優(yōu)越，是應(yīng)用于動物活體成像；果蠅屬的分類、熒光幼蟲及麻醉成蟲的篩選；線蟲有動能個體的鑒定篩選；以及斑馬魚、小鼠和雞胚胎的鑒定及胚胎觀察等研究的理想工具。

如果您對斑馬魚體視熒光顯微鏡感興趣或有疑問，歡迎與我們聯(lián)系，期待與您相約！

來源：http://www.mshot.com.cn/kehuanli/20220929.html，轉(zhuǎn)載請保留出處，謝謝！

前言

斑馬魚與哺乳動物基因組和蛋白調(diào)控機制有高度同源性，而且個體小、生殖周期短、繁殖能力強、易于飼養(yǎng)、體外受精、胚胎透明且發(fā)育迅速等諸多方面的優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于藥物篩選、毒性檢測和發(fā)育研究等科學(xué)領(lǐng)域。由于硬骨魚和人類在骨骼發(fā)育過程中的基因、信號通路有高度同源性，而且與其他的動物模型相比，斑馬魚具有個體小適合高通量化學(xué)篩選、身體透明易于觀察骨骼發(fā)育的特定，所以近年來斑馬魚為模型的骨骼研究逐漸成為這一領(lǐng)域的熱點

結(jié)尾：

利用一定造模手段，使得斑馬魚的脊椎骨發(fā)生基因突變。由于外形上是看不出突變的形狀，需Micro CT掃描并重建，通過觀察斑馬魚的脊椎骨突變后的具體形態(tài)，來判斷造模是否符合預(yù)期。在研究骨骼形態(tài)的同時，也可以對骨骼的骨密度、肌肉和脂肪的比例進(jìn)行研究。在Micro-CT助力下，以斑馬魚為疾病模型的研究會有越來越多的突破！

倒置熒光顯微鏡應(yīng)用于斑馬魚切片觀察

斑馬魚的基因與人類基因的相似度達(dá)到87％，而且斑馬魚幼魚通體透明，容易觀察到毒性表型。近期，明美江蘇區(qū)域安裝倒置熒光顯微鏡MF52-N搭配1250萬像素顯微鏡相機MSX2，用于斑馬魚不同層面切片觀察。

倒置熒光顯微鏡MF52-N支持明場、相襯和熒光觀察，從切片中可見，正常對照組織結(jié)構(gòu)規(guī)則，細(xì)胞形態(tài)完整，細(xì)胞質(zhì)均勻，細(xì)胞核呈規(guī)則圓形。

斑馬魚染色切片 72-96hpf

斑馬魚觀察一般包括總體成像和切片觀察，通常需要體視顯微鏡和生物顯微鏡搭配。倒置顯微鏡可以直接觀察培養(yǎng)皿中的斑馬魚，搭配采用五孔物鏡轉(zhuǎn)盤、高分辨率、長工作距離物鏡和高靈敏度相機，能很好地滿足斑馬魚成像的挑戰(zhàn)。

倒置熒光顯微鏡MF52-N采用數(shù)顯LED熒光模塊，可提供簡單易用的熒光激發(fā)和高質(zhì)量相襯、熒光和明場成像。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制藥、醫(yī)療檢測等領(lǐng)域。

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來源：https://www.mshot.com/article/1713.html

引言

新陳代謝是生物體內(nèi)進(jìn)行的化學(xué)變化的總稱，是生物最基本的生命活動過程。細(xì)胞從環(huán)境汲取能量、物質(zhì)，在內(nèi)部進(jìn)行各種化學(xué)變化，維持自身高度復(fù)雜的有序結(jié)構(gòu)，保證生命活動的正常進(jìn)行。作為細(xì)胞的“能量工廠”，線粒體在維持能量穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用，可以調(diào)控蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、溶質(zhì)和代謝物產(chǎn)物的進(jìn)出，并保護(hù)細(xì)胞質(zhì)免受有害線粒體產(chǎn)物的影響。線粒體通過不斷的分裂和融合，維持線粒體形態(tài)、分布和數(shù)量，維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，該過程被稱為線粒體動力學(xué)。線粒體自噬是機體清除細(xì)胞內(nèi)功能異常的線粒體的過程，是線粒體質(zhì)量控制的主要機制。線粒體動力學(xué)的病理改變可導(dǎo)致生物能量功能受損和線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞死亡，并與多種病理機制相關(guān)，包括缺血性心肌病，糖尿病，肺動脈高壓，帕金森氏病，亨廷頓氏病，骨骼肌萎縮癥、阿爾茨海默病等。

線粒體大小和形狀取決于它們在細(xì)胞內(nèi)的位置以及不同細(xì)胞對能量的需求。當(dāng)線粒體發(fā)生損傷時，它的形態(tài)和完整性會發(fā)生改變，如線粒體的數(shù)量、大小、長度和形狀等。線粒體形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的檢測對于了解線粒體的穩(wěn)態(tài)以及功能狀態(tài)有重要意義。

高內(nèi)涵成像分析系統(tǒng)非常適合進(jìn)行線粒體表型和結(jié)構(gòu)的研究。共聚焦成像和水鏡可以提高成像質(zhì)量并更好地顯示線粒體結(jié)構(gòu)，高內(nèi)涵的圖像分析工具可以幫助科研工作者獲得不同表型的數(shù)字特征，線粒體表型和結(jié)構(gòu)重排的分析模塊可用于線粒體動力學(xué)為基礎(chǔ)的細(xì)胞研究。

結(jié)果展示

使用不同濃度的化合物，包括氯喹（抑 制線粒體循環(huán)），魚藤酮（氧化磷酸化抑 制劑）和纈氨霉素（鉀離子載體）處理 PC12（人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）。將活細(xì)胞用線粒體染料 MitoTracker Orange  和 Hoechst 進(jìn)行染色，利用 ImageXpress Micro Confocal 系統(tǒng)（Molecular Devices）進(jìn)行成像，使用共聚焦模式和 40X 水鏡拍攝活細(xì)胞的圖像，分辨單個線粒體并檢測線粒體形態(tài)變化。使用 MetaXpress 高內(nèi)涵圖像采集和分析軟件中的 Custom Module Editor（自定義模塊編輯器）分析圖像，使用“Granularity”模塊和“Find Fibers”模塊識別圓形顆粒和細(xì)長的線粒體（圖 1）。

圖 1 .線粒體形狀的表型分析。

Molecular Devices 高內(nèi)涵成像分析系統(tǒng)適用于各種細(xì)胞模型中化合物的藥物開發(fā)或毒性評估。不同化合物處理會導(dǎo)致線粒體形態(tài)變化，膜電位的損失、以及細(xì)胞的程序性死亡等。MetaXpress 軟件非常適合進(jìn)行線粒體形態(tài)的測定，可以定義每個對象的數(shù)量、面積、強度、長度和形狀（表1，2）。使用具有共聚焦模式的 40X 水鏡對細(xì)胞進(jìn)行成像，MetaXpress 自定義模塊編輯器分析圖像（圖 2）。這些檢測結(jié)果可以計算劑量反應(yīng)和各種化合物的有效濃度，以及用數(shù)字來表征線粒體結(jié)構(gòu)動力學(xué)（圖 3）。

圖 2 .化合物對線粒體的作用。使用MitoTracker Orange對線粒體進(jìn)行染色（ 黃色 ），對照組（A）、纈霉素（B）、魚藤酮（C）。

使用特定濃度的化合物（氯喹，魚藤酮和纈氨霉素）處理 PC12 細(xì)胞，對細(xì)胞進(jìn)行染色和成像。通過圖像分析將線粒體結(jié)構(gòu)確定為“纖維”（頂部）或“顆?！保ㄖ胁浚?，底部為線粒體染色后熒光強度的變化。EC50的值取決于四個濃度依賴性復(fù)本和參數(shù)曲線的擬合（圖 3）。

圖 3 .使用氯喹（綠色），魚藤酮（紅色）和纈氨霉素（藍(lán)色）處理 PC12 細(xì)胞。EC50的值取決于四個濃度依賴性復(fù)本和參數(shù)曲線的擬合。

在分析過程中，我們比較了水鏡和空氣鏡對圖像質(zhì)量和分析的影響。結(jié)果顯示，使用水鏡可以提高圖像質(zhì)量，并且通常會導(dǎo)致 Z' 值增加（ 表 3 ）。圖 4 顯示了使用自定義模塊編輯對線粒體表型進(jìn)行計數(shù)和分析，以評估線粒體的健康、代謝、循環(huán)、復(fù)合效應(yīng)和疾病狀態(tài)等。并且，自定義模塊編輯可以針對特定的細(xì)胞類型或疾病模型進(jìn)行進(jìn)一步的調(diào)整和修改。

表 1 .用圖 3 所示的曲線定量 EC50。

表 2 .不同的對照和化合物處理方法的比較。上面四列數(shù)據(jù)分別是對照，10 um 的氯喹，300 nm 的魚藤酮，和 10 nm 的纈氨酸霉素。

表 3 .與空氣鏡相比，水鏡可以提高圖像質(zhì)量，獲得更高的Z’值。

圖 4 .自定義模塊編輯器（CME）。

總結(jié)

Molecular Devices 高內(nèi)涵成像分析系統(tǒng)適用于各種細(xì)胞模型中化合物的藥物開發(fā)或毒性評估。使用高內(nèi)涵成像和高級圖像分析的線粒體動力學(xué)分析方法不僅可以量化線粒體的表型變化，而且這種多參數(shù)方法也可用于研究正常和病理結(jié)構(gòu)變化以表征疾病模型或復(fù)合效應(yīng)。

 主要特點 

• 獲得高質(zhì)量的圖像，更好地顯示線粒體形狀和結(jié)構(gòu)的變化

• 以更有效、更精確的方式量化和測量線粒體的表型變化

• 了解疾病的機制并評估各種細(xì)胞模型中的化合物毒性

參考文獻(xiàn)：

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[2]. Yoon Y, Krueger EW , Oswald BJ , et al. The Mitochondrial Protein hFis1 Regulates Mitochondrial Fission in Mammalian Cells through an Interaction with the Dynamin-Like Protein DLP1. Molecular & Cellular Biology, 2003, 23(15):5409-5420.

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       老師此前買過明美體視顯微鏡MZ62，目前通過三目鏡筒連接顯微鏡相機與圖像系統(tǒng)，實現(xiàn)對鏡下成像的保存、分析等。老師想重新購買一套數(shù)碼體視顯微鏡，要求達(dá)到發(fā)表論文的水平，主要是用來觀察基因敲除觀察斑馬魚體色，對斑馬魚體色的影響從而推導(dǎo)某個基因突變。

解決方案：

明美工程師通過參加廈門大學(xué)儀器巡展，老師現(xiàn)場看到明美的儀器的體視顯微鏡MZ62和顯微鏡相機MSX1，現(xiàn)場溝通后需求確切，馬上就進(jìn)行樣機SY，效果理想！明美顯微鏡MSX1是1000萬高分辨率顯微相機，內(nèi)置硬件ISP圖像處理芯片，zhuo越的細(xì)節(jié)處理和色彩還原，GX數(shù)據(jù)處理，全分辨下可達(dá)到36fps。

（來源：http://www.mshot.com/kehuanli/20191220.html廣州市明美光電技術(shù)有限公司）

老師此前買過明美體視顯微鏡MZ62，目前通過三目鏡筒連接顯微鏡相機與圖像系統(tǒng)，實現(xiàn)對鏡下成像的保存、分析等。老師想重新購買一套數(shù)碼體視顯微鏡，要求達(dá)到發(fā)表論文的水平，主要是用來觀察基因敲除觀察斑馬魚體色，對斑馬魚體色的影響從而推導(dǎo)某個基因突變

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【本文的標(biāo)題和網(wǎng)址】明美顯微鏡相機應(yīng)用于廈門大學(xué)環(huán)境與生物工程斑馬魚觀察；https://mshot.com/article/754.html