做RT-PCR的時(shí)候?yàn)槭裁匆O(shè)置標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系和管家基因反應(yīng)體系?
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還有就就是，為什么要制備用于繪制梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線的DNA模板？ 這些步驟在實(shí)驗(yàn)中有什么作用？
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- lily55215 2012-06-01 00:00:00
- 標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系里面有引物，dNTP，Taq酶，等PCR所必須的東西，所以必須有反應(yīng)體系，引物有可能形成二聚體，在PCR 過程中即可看到，一般位于MARKERZ小帶的上面（也就是說很小，是指引物之間互相配對(duì)兒），管家反應(yīng)體系我不懂了……DNA模板梯度的設(shè)置時(shí)為了選取DNA模板Z合適的濃度，濃度過低可能得不到結(jié)果，濃度過高則特異性不強(qiáng)，雜帶會(huì)多
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- chenxsong521 2012-06-12 00:00:00
- 在做QRT-PCR時(shí)，一定要有內(nèi)參，即在PCR時(shí)，每個(gè)標(biāo)本都要做對(duì)應(yīng)的內(nèi)參，而且每次都是看家基因，一般用bate-actin，有時(shí)也用GAPDH。 內(nèi)參的選擇：普通PCR內(nèi)參的大小沒有多大要求，但real time一般選擇300bp以下。 它的作用在于你提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA時(shí)，加入的濃度可能會(huì)不一致，即使用分光廣度計(jì)測(cè)其濃度，也會(huì)有儀器誤差，跑出的條帶要進(jìn)行灰度分析。用目的基因的積分光密度比上內(nèi)參的光密度就是你這個(gè)基因?qū)嶋H表達(dá)的量。 希望對(duì)你有所幫助。
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