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  末*狼獄L 2013-03-13 00:00:00

  有時單菌落很多次，你可以從單細(xì)胞繁殖，它必須重復(fù)分離純種的方法有很多你diyi次面臨著非常全面的，可以看看。 微生物實驗室分離純化方法日期:2010-03-01瀏覽次數(shù)：18 混合微生物種群僅包含某一種或一個微生物過程稱為微生物的分離和純化。在分子生物學(xué)的研究和應(yīng)用，不僅 只包含一個特定的方法或微生物的過程稱為微生物的分離和純化，混合微生物種群中分離。在分子生物學(xué)的研究和應(yīng)用，不僅通過混合的天然微生物的分離和純化技術(shù)分離出特定的微生物，但也一定要注意保持微生物純培養(yǎng)物的“純潔”，以防止其他微生物的污染。 1，與固體培養(yǎng)基中分離和純化 單個微生物的合適的固體介質(zhì)的表面或內(nèi)部生長，繁殖，在一定程度上，可以形成可見的，是一個一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長組稱為菌落。即使當(dāng)表面的固體培養(yǎng)基許多菌落到細(xì)菌的草坪成為此。不同的微生物的生長和形成的菌落在一個特定的介質(zhì)或細(xì)菌草坪通常有穩(wěn)定的特點，可以成為微生物的分類和鑒定的重要依據(jù)。大多數(shù)細(xì)菌，酵母，以及許多真菌和單細(xì)胞藻類，形成孤立的固體培養(yǎng)基上的菌落，用一個合適的片劑分離方法是很容易獲得的純培養(yǎng)。所謂的平面，即培養(yǎng)板中提到的，它是指在固體培養(yǎng)基倒入無菌的陪替氏培養(yǎng)皿中，并冷卻和固化后，盛固體培養(yǎng)基平板。此方法包括一個單一的分離微生物，并固定在固體培養(yǎng)基的表面或內(nèi)部的。固體培養(yǎng)基凝固與瓊脂凝膠材料中，每一個獨立的活微生物的生長，繁殖，形成菌落，菌落形成可移植的。Z常見的分離，培養(yǎng)的微生物瓊脂固體培養(yǎng)基上是一個堅實的中小板。容易被科克成立100多年來，一直是Z常見的手段的不同菌株板分離微生物純培養(yǎng)。 1.1稀釋倒平板法 diyi個微生物懸浮液了一系列的稀釋（如1:10，1:100，1:1000，1:10000），然后稀釋劑一點，并已熔化和瓊脂培養(yǎng)基冷卻至50℃或約混合，振搖后，傾入消毒的陪替氏培養(yǎng)皿，直到在瓊脂凝固后，使細(xì)菌的瓊脂平板中，并培養(yǎng)一定的時間，可能會出現(xiàn)的菌落。如果稀釋適當(dāng)?shù)卦谄教沟谋砻嫔铣霈F(xiàn)或瓊脂培養(yǎng)基中，可以分散的單個菌落，菌落可能傳播由細(xì)菌細(xì)胞中，就形成了。然后挑取單個菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，就可以得到一個純粹的文化。 1.2擴(kuò)展板的方法可以很容易地導(dǎo)致死亡的一些熱敏感的菌株，并利用微生物懸浮液加入熱介質(zhì)，然后倒平板電腦也導(dǎo)致一些稀釋倒平板法嚴(yán)格的需氧細(xì)菌缺乏氧氣由于固定在瓊脂中間影響其生長，因此純種的分離方法是微生物學(xué)研究的擴(kuò)散板方法中使用。其做法是diyi熔融培養(yǎng)基傾入無菌的陪替氏培養(yǎng)皿中，以制備無菌的片劑，冷卻和固化后，一定量的微生物的懸浮液逐滴加入到在平板表面，然后作為一個無菌玻璃從整個板的表面均勻地分散涂布棒桿菌，拾取單個菌落培養(yǎng)后（圖1）。 圖1擴(kuò)展板的方法 1.3平板劃線法 Z簡單的方法分離的微生物平板劃線法，即接種環(huán)無菌精選小料要分開的連續(xù)劃線無菌平坦面（圖2），微生物細(xì)胞的數(shù)目將減少與劃線的數(shù)目增加，并且逐漸分散，如果越過如果合適，該微生物可以11分散后的培訓(xùn)，上述平面板的表面上，得到單菌落。有時單菌落，它必須重復(fù)多次，然后才能得到純種分離的單細(xì)胞繁殖。其原理是，微生物的樣品多次的固體培養(yǎng)基的表面達(dá)到分離的目的，從點到線“稀釋”。劃線的方法很多，常見的容易出現(xiàn)的單菌落劃線的斜杠法曲線法，網(wǎng)格法，輻射，四格的方法。 圖2平板劃線法 1.4稀釋搖管 固體培養(yǎng)基分離嚴(yán)格厭氧菌的特殊性，，如果機(jī)體暴露在空氣中立即死亡，可以準(zhǔn)備通常的方法平板，然后放置在一個封閉的容器中培養(yǎng)，并在容器中的氧氣可以是化學(xué)，物理或生物的方法來清除。對于那些誰是更敏感的氧厭氧微生物純培養(yǎng)，分離培養(yǎng)法都不能動搖稀釋管，它是另一種形式的稀釋傾注法。管加熱的diyi串聯(lián)盛無菌瓊脂培養(yǎng)基瓊脂熔化后，冷卻并維持在50℃左右，梯度稀釋的材料，可以與這些管分離，管快速搖動均勻，冷凝后，在瓊脂表面傾倒滅菌的液體石蠟和固體石蠟，介質(zhì)和空氣的混合物的柱層被分離。培養(yǎng)后，形成的菌落在瓊脂上在中間的列。挑取單菌落，移植，需要使用無菌針頭蓋和用毛細(xì)管插入瓊脂和它們之間的壁進(jìn)入無菌無氧氣體中除去液體石蠟 - 石蠟，瓊脂柱吸出，放置在陪替氏菜用無菌刀瓊脂柱切成薄片觀察和殖民地移植。 2，用液體培養(yǎng)基中分離和純化 大多數(shù)細(xì)菌和真菌分離使用的板方法通常是令人滿意的，因為它們是在固體介質(zhì)中的大多數(shù)物種上看起來很不錯。然而，迄今為止，不是所有的微生物，可以在固體培養(yǎng)基上生長，例如，一些大的細(xì)菌的細(xì)胞，許多原生動物和藻類等，這些微生物需要使用液體介質(zhì)中分離，得到的純培養(yǎng)。使用液體培養(yǎng)基中分離和純化的 稀釋法。在液體培養(yǎng)基中，接種物的順序稀釋以獲得高程度的稀釋效應(yīng)，少于一個微生物是在試管中分配。大多數(shù)的管子，如果稀釋后沒有微生物的生長，并在體外培養(yǎng)中得到的微生物的生長可能然后有一個純培養(yǎng)。稀釋后管的比例將大幅增加微生物的生長，獲得純培養(yǎng)的降水。因此，稀釋法，固液分離，必須在許多平行試管稀釋，大部分（一般應(yīng)不超過95％）表明沒有增長。 3， 分離的單細(xì)胞（孢子）只能從該總數(shù)的類型的混合微生物種群的優(yōu)點是被隔離的稀釋方法的一個重要的缺點。在自然界中，許多微生物在混合組是少數(shù)。在這種情況下，您可以采取的顯微切割法直接分離細(xì)胞或單個個體進(jìn)行培養(yǎng)，獲得純培養(yǎng)物，被稱為單細(xì)胞（或單孢子）分離方法，從一個混居的。單細(xì)胞分離難度和細(xì)胞或個人的大小成反比，較大的微生物，如藻類，原生動物更容易，個別的小細(xì)菌是困難得多。的 較大的微生物，可以使用毛細(xì)管提取單個個體，并在大量的滅菌介質(zhì)轉(zhuǎn)印洗滌數(shù)次除去較小的微生物污染。此操作可以在低倍率的顯微鏡進(jìn)行，如在解剖顯微鏡下。相對小的單個微生物，需要在顯微鏡下使用顯微操作使用毛細(xì)管或微觀的針，鉤，環(huán)拾取一個單一的微生物細(xì)胞或孢子，得到純培養(yǎng)。在顯微鏡下的顯微操作在沒有單細(xì)胞分離，也有一些替代的方法可以使用??，例如，可以通過適當(dāng)稀釋的樣品制備后成小液滴，在顯微鏡下觀察到的，并只選擇一個單元格含有液體純培養(yǎng)分離。分離的單細(xì)胞操作技術(shù)有更高的要求，使用大多限于高度專業(yè)化的科研。分離 4，選擇培養(yǎng)的培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件沒有能夠滿足所有的微生物的生長的需要，所有的培養(yǎng)基中選擇在一定程度上性質(zhì)。如果在某種微生物的生長需要是已知的，可以設(shè)計適合于該微生物的生長的特定的環(huán)境，從而能夠以該微生物選自混合微生物種群進(jìn)行培養(yǎng)，雖然在混合微生物種群種微生物可能是是少數(shù)。等的分離，在被稱為選擇培養(yǎng)分離，特別是適合于從自然界分離的，找到有用的微生物的微生物的純培養(yǎng)的技術(shù)通過選擇培養(yǎng)。自然，在大多數(shù)場合中的微生物群落是由各種各樣的微生物，分離所需的特定的微生物是非常困難的，尤其是當(dāng)存在時相比，以非常小的其他微生物的量和一定的微生物種，單用途板在一般的稀釋方法幾乎是不可能的。這種微生物的分離，必須基于的特性的微生物，包括營養(yǎng)，生理，生長條件，培養(yǎng)菌株。或YZ大多數(shù)微生物不能生長，或造成這種微生物的成長環(huán)境，有利于社區(qū)的數(shù)量的增加，因此，在一定的時間來培養(yǎng)板稀釋的純培養(yǎng)??分離細(xì)菌。 4.1使用在選擇平板 直接分離，根據(jù)被分離微生物功能選擇不同的培養(yǎng)條件下，也有各種方法可以使用??。要分開，例如，嗜熱菌，可以在高溫條件下培養(yǎng);分離某些抗生素的耐藥菌株，并用抗生素，可以分離成板，一些微生物，如螺旋體，粘細(xì)菌，藍(lán)藻等在的瓊脂平板的表面。或的士車廂內(nèi)，他們可以利用的滑動特性的分離和純化，因為滑行可以讓自己和其他微生物不能單獨移動。板的微生物群落，使微生物在跑道上滑行滑行前挑接種反復(fù)進(jìn)行，以獲得一個純粹的文化。 4.2富集培養(yǎng) 富集培養(yǎng)的原則和方法是很簡單的，不同利用不同的微生物的生命活動的特點，制定具體的環(huán)境條件下，唯yi的條件相適應(yīng)的微生物強(qiáng)勁的增長，它在社會上，可以很容易地分離到所需的特定微生物數(shù)量大大增加。富集條件可以根據(jù)需要分離的物理，化學(xué)，生物，和集成的許多方面，如溫度，pH，紫外線，高的壓力，光，氧氣，營養(yǎng)等許多方面的微生物的特性選擇。在相同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，它是容易反復(fù)移位的物種的菌株后，在固體培養(yǎng)基上生長，并Z終濃縮的單個菌落。如果你想分開一段寄生菌的樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群體，有很大的增長。通過反復(fù)移動的物種可以得到純寄生菌。 5，二元文化 分離，得到純培養(yǎng)的目的。然而，在某些情況下，這是很難做到的。但可用的二進(jìn)制文化作為替代品的純化和培養(yǎng)。文化包含兩個或更多種微生物混合培養(yǎng)作為一個已知的，并僅含有2種微生物的培養(yǎng)，但也有是同時保持意識文化稱為二進(jìn)制文化之間的特定關(guān)系。如二進(jìn)制文化是Z有效的方式來保存病毒，因為病毒是細(xì)胞生物的嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生。有些細(xì)胞和微生物也有嚴(yán)格的生物細(xì)胞內(nèi)寄生物，或特殊的共生關(guān)系。這些微生物，二元文化是Z接近的純培養(yǎng)物的培養(yǎng)方法，在控制的條件下，可以在實驗室中實現(xiàn)。此外，原生動物大鱷微小的微生物很容易在實驗室培養(yǎng)的方法與雙文化，文化的微生物原生動物和狩獵。例如，纖毛蟲，變形蟲和粘菌。 幾種方法如上所述，平板分離方法一般用于實驗室微生物的分離和純化。在固體培養(yǎng)基上的單個菌落的微生物的生長和形成，通常是由一個細(xì)胞組件制成的復(fù)制品。單菌落被選中，并獲得一個純粹的文化。可以通過稀釋涂布平板或板裸奔技術(shù)的方法，以獲得單個菌落。值得注意的是，通過在平板上生長的單個菌落，分離從微生物種群不一定可以保證的純培養(yǎng)。因此，純文化的決心，除了觀察菌落特征，但也與顯微鏡檢查，以確定個體的形態(tài)特征，一些純培養(yǎng)的微生物通過一系列的分離和純化過程，以及各種特性，以獲得。

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  zhaipintiao 2013-03-12 00:00:00

  每個菌落的細(xì)菌都是由同一個細(xì)菌分裂繁殖出來的。它們的遺傳物質(zhì)基本上一樣。而不同菌落的細(xì)菌則有可能因為在平板培養(yǎng)之前的步驟（如質(zhì)粒的重組及轉(zhuǎn)化）而導(dǎo)致遺傳物質(zhì)有所差異。如質(zhì)粒重組時對DNA有所損傷的話，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后DNA被酶修復(fù)時有可能出錯。 所以需要使用同一個菌落的細(xì)菌來做后續(xù)實驗，以確保菌株遺傳物質(zhì)的同一性。

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