做ELISA實驗需要注意哪些問題?

　　Elisa實驗中應該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題.Elisa試劑盒有著準確性高、靈敏度高、特異性強的諸多優(yōu)點,深受廣大用戶朋友的喜愛.然而,在實驗過程中,也需要注意很多問題.對此,上海哈靈生物提醒你您,需要遵守一些規(guī)則,才能更好地進行實驗,取得較好的實驗成果.

　　Elisa方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定.在Elisa測定中影響因素較多,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果.引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：標本因素;試劑因素;操作因素.

　　1.樣品稀釋

　　一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性.酶聯(lián)免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應,出現(xiàn)假陽性.

　　2.試劑盒平衡

　　Elisa中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,ELISA反應不夠充分.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.

　　3.樣品和試劑的混勻

　　在稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性.

　　4.加樣

　　加樣是一項很重要的步驟.加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡.加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區(qū),易導致非特異吸附.

　　5.溫育

　　溫育是ELISA測定中影響測定成敗為關鍵的一個因素.ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間.

　　6.洗板

　　固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術,需以洗滌操作將特異結合于固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證ELISA測定的特異性.洗液盡量不要溢出孔外;加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干;及時更換吸水紙,尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結果.

　　7.顯色

　　顯色一定要控制時間,根據(jù)試劑盒說明操作即可.一般來說,顯色時間過短,結果偏低;顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加.

　　8.比色

　　比色要注意波長的選擇.以TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長為450nm,后者為492nm,濾光片需根據(jù)要求隨時更換.因此,容易出現(xiàn)濾光片錯用的問題.

　　做ELISA實驗需要注意哪些問題? 我司由具有行業(yè)背景和豐富市場經(jīng)驗的業(yè)人士組成，于為生命科學研究域提供產(chǎn)品，為廣大科研工作者提供服務。 既能滿足研發(fā)類客戶對產(chǎn)品種類、包裝的特殊要求，也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試、中試到規(guī)?；a(chǎn)各個階段的綜合需求。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

工程師在使用測試儀器的時候首先應該要了解測量儀器的基本原理才能正確的使用儀器，那么示波器的基本工作原理是什么呢？使用中需要注意的事項又有哪些呢？下面由安泰測試為大家介篩一些示波器的基本原理以及使用中的注意事項：

一、示波器--原理簡介

模擬示波器：在本質上，模擬示波器工作方式是直接測量信號電壓，并通過從左到右穿過示波器屏幕的電子束在垂直方向描繪電壓。

二、示波器--原理簡介

與模擬示波器不同，數(shù)字示波器通過模數(shù)轉換器（ADC）把被測電壓轉換為數(shù)字信息。它捕獲的是波形的一系列樣值（采樣定理），并對樣值進行存儲，處理。隨后，數(shù)字示波器在顯示屏上重構波形。

三、示波器--原理簡介

數(shù)字存儲示波器（DSO)：組成DSO的一些子系統(tǒng)與模擬示波器的一些部分相似。但是，DSO包含更多的數(shù)據(jù)處理子系統(tǒng)，它能夠收集顯示整個波形的數(shù)據(jù)，并以數(shù)字形式表示波形信息。這樣，利用示波器本身或外部計算機，方便對信號進行分析、存檔、打印和其他的處理。

從捕獲信號到在屏幕上顯示波形，DSO采用串行的處理體系結構。

四、示波器--原理簡介

數(shù)字熒光示波器（DPO)：DPO的diyi階段（輸入）與模擬示波器相似，第二階段與DSO相似（ADC）。但是，在模數(shù)轉換后，DPO與原來的示波器相比就有顯著的不同之處。

DPO使用并行體系結構來捕獲、顯示和分析信號。

五、示波器--特別注意：浮地測量

示波器的通道地、機殼都通過AC輸入地線與大地相連，在測量浮地目標（如電源輸出端，相對大地電平不可預計）時，可能會形成回路燒毀探頭/示波器。

通過斷開與大地的連接（使用2芯電源線/隔離變壓器），將示波器“浮地”。這種做法不但會導致測量結果不準確，會使示波器機殼帶電，容易造成人身安全問題。

六、示波器--浮地測量解決方法

使用差分探頭，可以通過大部分示波器進行浮地測量。但差分 探頭仍有仍有一條電阻路徑接地，存在很小的泄露電流；

“A-B”測量（偽差分測量）：使用傳統(tǒng)示波器和兩個相同型號的無源電壓探頭分別測量兩個測試點，兩個探頭的地線接到大地。CH1-CH2即可得到被測兩點之間的電壓波形；

選用TPS2000B/THS3000系列隔離輸入示波器。提供真正的、完整的通道到通道和通道到電源線隔離能力。在使用隔離輸入示波器進行浮地測量時，必須使用專門實際的無源探頭。

以上內(nèi)容轉載于安泰測試網(wǎng)，如果大家在使用示波器過程中有什么問題歡迎咨詢安泰測試。