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  xiaofeitiandg 2012-07-04 00:00:00

  DNA分子雜交技術(shù)。

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  CH68453622 2012-07-04 00:00:00

  DNA檢測(cè)技術(shù)有很多，主要分為定性和定量方法。 給你舉幾個(gè)： 1，分子雜交技術(shù)，（包括southern雜交，northern雜交，基因芯片等） 分子雜交分析的基本原理是基于DNA探針檢測(cè)變性而且固定在硝酸纖維素膜上的宿主細(xì)胞DNA。這些探針可以不依賴宿主細(xì)胞DNA來(lái)制備，例如用隨機(jī)引物制備探針。探針上標(biāo)記酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑（Dig）等。由于標(biāo)記核酸探針，操作方便、靈敏度高，已標(biāo)記的探針在4℃貯存可達(dá)兩年之久，方便隨時(shí)應(yīng)用，所以現(xiàn)在常采用標(biāo)記核酸探針，用光標(biāo)記法將光敏Dig標(biāo)記到探針上，制成光敏-Dig-核酸探針，再與固定在硝酸膜上的靶核酸進(jìn)行靶DNA分子雜交，使之與抗Dig-堿性磷酸酶結(jié)合，Z后可用不同的檢測(cè)方式進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)光檢測(cè)和顯色檢測(cè)均可，靈敏度可達(dá)10pg以下 2，基于DNA結(jié)合蛋白的方法 Threshold® Immunoassay分析系統(tǒng)是基于兩種DNA序列非特異性蛋白，單鏈DNA（ssDNA）結(jié)合蛋白（SSB）和抗ssDNA 的單抗。檢測(cè)的基本過(guò)程是當(dāng)生物素—DNA單鏈結(jié)合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的單抗與變性的宿主細(xì)胞DNA結(jié)合Z終形成復(fù)合物，通過(guò)親合素將此復(fù)合物連接到生物素—硝酸纖維素膜，在通過(guò)洗滌所有非特異性的被洗脫掉，Z后放于有尿素溶液的讀數(shù)儀，尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 導(dǎo)致PH值發(fā)生變化，讀數(shù)儀根據(jù)PH值的變化換算成DNA的量，從而達(dá)到檢測(cè)殘余DNA含量的目的。 3，PCR法，其中以實(shí)時(shí)定量PCR法Z為突出 熒光定量PCR是基于PCR擴(kuò)增時(shí)，在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，產(chǎn)物的增加可以通過(guò)熒光信號(hào)指示，通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)控PCR體系中的熒光信號(hào)，對(duì)樣本中初始模板進(jìn)行定量分析。定量PCR可實(shí)時(shí)檢測(cè)產(chǎn)物量，通過(guò)加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)待測(cè)樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的位置推算初始模板的濃度，從而達(dá)到檢測(cè)殘余DNA含量的目的。 此外，對(duì)DNA的定量技術(shù)也有很多，可以看下這篇文章《核酸定量技術(shù)及其在生物檢測(cè)中的應(yīng)用》

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