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  xwc_2013 2016-12-21 00:00:00

  沒有微生物生長的平皿需要滅菌 培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料.由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之實驗和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長素以及水分等.另外，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓. 瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì)，是應(yīng)用Z廣的凝固劑.加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固.但多次反復(fù)融化，其凝固性降低. 任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時徹底滅菌，以備純培養(yǎng)用.一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌. 3材料 3.1器皿及材料 天平、稱量紙、牛角匙、精密pH試紙、量筒、刻度搪瓷杯、試管、三角瓶、漏斗、分裝架、移液管及移液管筒、培養(yǎng)皿及培養(yǎng)皿盒、玻璃棒、燒杯、試管架、鐵絲筐、剪刀、酒精燈、棉花、線繩、牛皮紙或報紙、紗布、乳膠管、電爐、滅菌鍋、干燥箱. 3.2藥品試劑 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、瓊脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麥芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽計、磷酸銨、5%NaOH溶液、5%HCl溶液. 4流程 稱藥品→溶解→調(diào)pH值→融化瓊脂→過濾分裝→包扎標(biāo)記→滅菌→擺斜面或倒平板. 5步驟 5.1培養(yǎng)基的制備 5.1.1稱量藥品 根據(jù)培養(yǎng)基配方依次準(zhǔn)確稱取各種藥品，放入適當(dāng)大小的燒杯中，瓊脂不要加入.蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速. 5.1.2溶解 用量筒取一定量(約占總量的1/2)蒸餾水倒入燒杯中，在放有石棉網(wǎng)的電爐上小火加熱，并用玻棒攪拌，以防液體溢出.待各種藥品完全溶解后，停止加熱，補足水分.如果配方中有淀粉，則先將淀粉用少量冷水調(diào)成糊狀，并在火上加熱攪拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，補足水分. 5.1.3調(diào)節(jié)pH 根據(jù)培養(yǎng)基對pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液調(diào)至所需pH.測定pH可用pH試紙或酸度計等. 5.1.4溶化瓊脂 固體或半固體培養(yǎng)基須加入一定量瓊脂.瓊脂加入后，置電爐上一面攪拌一面加熱，直至瓊脂完全融化后才能停止攪拌，并補足水分(水需預(yù)熱).注意控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦. 5.1.5過濾分裝 先將過濾裝置安裝好（圖3-1）.如果是液體培養(yǎng)基，玻璃漏斗中放一層濾紙，如果是固體或半固體培養(yǎng)基，則需在漏斗中放多層紗布，或兩層紗布夾一層薄薄的脫脂棉趁熱進(jìn)行過濾.過濾后立即進(jìn)行分裝.分裝時注意不要使培養(yǎng)基沾染在管口或瓶口，以免浸濕棉塞， 引起污染.液體分裝高度以試管高度的1/4左右為宜.固體分裝裝量為管高的1/5，半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜；分裝三角瓶，其裝量以不超過三角瓶容積的一半為宜. 5.1.6包扎標(biāo)記 培養(yǎng)基分裝后加好棉塞或試管帽，再包上一層防潮紙，用棉繩系好.在包裝紙上標(biāo)明培養(yǎng)基名稱，制備組別和姓名、日期等. 5.1.7滅菌 上述培養(yǎng)基應(yīng)按培養(yǎng)基配方中規(guī)定的條件及時進(jìn)行滅菌.普通培養(yǎng)基為121℃20min，以保證滅菌效果和不損傷培養(yǎng)基的有效成份.培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，如需要作斜面固體培養(yǎng)基，則滅菌后立即擺放成斜面(圖3-2)，斜面長度一般以不超過試管長度的1/2為宜；半固體培養(yǎng)基滅菌后，垂直冷凝成半固體深層瓊脂. 5.1.8倒平板 將需倒平板的培養(yǎng)基，于水浴鍋中冷卻到45～50℃，立刻倒平板. 5.2滅菌方法 滅菌是指殺死或消滅一定環(huán)境中的所有微生物，滅菌的方法分物理和化學(xué)滅菌法兩大類.本實驗主要介紹物理方法的一種，即加熱滅菌. 加熱滅菌包括濕熱和干熱滅菌兩種.通過加熱使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)凝固變性，從而達(dá)到殺菌目的.蛋白質(zhì)的凝固變性與其自身含水量有關(guān)，含水量越高，其凝固所需要的溫度越低.在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大，因為在濕熱情況下，菌體吸收水分，使蛋白質(zhì)易于凝固；同時濕熱的穿透力強(qiáng)，可增加滅菌效力.

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