參與評(píng)論

評(píng)論

登錄后參與評(píng)論

全部評(píng)論(2條)

• 

  lisayanggao 2017-01-11 00:00:00

  還是微生物

  贊(6)

  回復(fù)(0)

  評(píng)論

  評(píng)論

  登錄后參與評(píng)論

• 

  融雪白梅 2017-01-11 00:00:00

  其通自選育工選育兩類單獨(dú)使用交叉進(jìn)行 DNA Shuffling技術(shù) 編輯 隨著PCR技術(shù)發(fā)展應(yīng)用1994美stemmer提全新工進(jìn)化技術(shù)——DNA Shuffling（稱洗牌技術(shù)）該技術(shù)能模擬物數(shù)百間發(fā)進(jìn)化程并短實(shí)驗(yàn)循環(huán)定向篩選特定基編碼酶蛋白性提高幾百倍甚至萬倍功能性突變基其基本原理源同功能相同組同源基用DNA核酸酶I進(jìn)行消化 產(chǎn)隨機(jī)片段由些片段組文庫使互引物模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增基拷貝片段作另基拷貝引物引起模板轉(zhuǎn)換重組發(fā)導(dǎo)入體內(nèi)選擇突變體作新輪體外重組般通2-3循環(huán)課獲產(chǎn)物幅度提高重組突變體 2自選育 編輯 自界微物未經(jīng)工誘變或雜交處理情況進(jìn)行離純化（見微物離純化）進(jìn)行純培養(yǎng)測(cè)定（見微物測(cè)定）擇優(yōu)選取微物菌種種簡單易行獲優(yōu)良菌種幾率般難滿足產(chǎn)需要 3工選育 編輯 誘變育種雜交育種兩種 誘變育種 誘發(fā)基突變手段微物育種技術(shù)1927H.J. 馬勒發(fā)現(xiàn)X射線增加突變率效；1944C.奧爾巴克首發(fā)現(xiàn)誘變效應(yīng)；隨陸續(xù)發(fā)現(xiàn)許物理（紫外線、γ射線、快等）化誘變素化誘變素3種：①誘變劑與或核酸堿基發(fā)化變化使DNA復(fù)制堿基置換引起變異羥胺亞硝酸、硫酸二乙酯、甲基磺酸乙酯、硝基胍、亞硝基甲基脲等；②誘變劑堿基結(jié)構(gòu)類似物復(fù)制參入DNA引起變異5-溴尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、8-氮鳥嘌呤2-氨基嘌呤等；③誘變劑DNA減少或增加1～2堿基使堿基突變點(diǎn)全部遺傳密碼轉(zhuǎn)錄翻譯發(fā)錯(cuò)誤導(dǎo)致碼組移突變體現(xiàn)吖啶類物質(zhì)些氮芥衍物（ICR）等誘變育種操作簡便突變率高突變譜廣僅能提高產(chǎn)量改進(jìn)質(zhì)量擴(kuò)產(chǎn)品品種簡化工藝條件1943自界離青霉素產(chǎn)菌效價(jià)20單位/毫升經(jīng)系列誘變育種效價(jià)已達(dá)40000單位/毫升；金霉素產(chǎn)菌經(jīng)誘變發(fā)酵液積累甲基金霉素；谷氨酸棒桿菌1299經(jīng)紫外線誘變能產(chǎn)賴氨酸能產(chǎn)纈氨酸增加產(chǎn)品種類；土霉素產(chǎn)菌經(jīng)誘變選能減少泡沫突變菌株提高發(fā)酵罐利用率誘變育種足缺乏定向性 雜交育種 同基型品系或種屬間通交配或體細(xì)胞融合等手段形雜種或者通轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)導(dǎo)形重組體再些雜種或重組體或代篩選優(yōu)良菌種通種離具新基組合重組體選由于具雜種優(yōu)勢(shì)旺盛、物量、適應(yīng)性強(qiáng)及某些酶性提高新品系雜交育種式實(shí)驗(yàn)菌株殖式同異性雜交、準(zhǔn)性重組、原質(zhì)體融合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、雜種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化等；選擇親株、離群體代培養(yǎng)、擇優(yōu)劣雜種遺傳析程基本相同雜交般指交配反應(yīng)菌株進(jìn)行交配或接合形雜種種適用范圍廣酒類、面包、YY飼料酵母育種鏈霉菌青霉菌抗素產(chǎn)量提高曲霉酶性增強(qiáng)等面均已獲功 體細(xì)胞融合具性反應(yīng)品系或種屬間細(xì)胞融合染色體重組先用酶溶解細(xì)胞壁再用氯化鈣-聚乙二醇處理原質(zhì)體促使融合獲雜種工業(yè)微物菌種改良積極作用 轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)導(dǎo)首先應(yīng)用于細(xì)菌現(xiàn)已廣泛用于鏈霉菌酵母菌等隨著重組DNA技術(shù)發(fā)展重組質(zhì)粒構(gòu)建轉(zhuǎn)化系統(tǒng)確立已目基轉(zhuǎn)移受體細(xì)胞內(nèi)能產(chǎn)具重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值物性物質(zhì)（疫苗、酶等）株系 微物與釀造工業(yè)、食品工業(yè)、物制品工業(yè)等關(guān)系非密切其菌株優(yōu)良與否直接關(guān)系種工業(yè)產(chǎn)品壞甚至影響質(zhì)量所培育優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)微物菌株十必要微物育種目要物合代謝途徑朝所希望向加引導(dǎo)或者促使細(xì)胞內(nèi)發(fā)基重新組合優(yōu)化遺傳性狀使某些代謝產(chǎn)物量積累獲所需要高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)低耗菌種作途徑誘變育種直廣泛應(yīng)用目前內(nèi)微物育種界主要采用仍規(guī)物理及化等誘變外原質(zhì)體誘變技術(shù)已廣泛應(yīng)用于酶制劑、抗素、氨基酸、維素等菌種選育并且取許重應(yīng)用意義 4誘變育種 編輯 1.1物理誘變 1.1.1紫外照射 紫外線照射用物理誘變誘發(fā)微物突變種非用工具DNA RNA 嘌呤嘧啶吸收峰260nm260nm 紫外輻射效致死劑紫外輻射作用已種解釋比較確定作用使DNA 形嘧啶二聚體[1]二聚體形阻礙堿基間配所能導(dǎo)致突變甚至死亡[2] 紫外照射誘變操作簡單經(jīng)濟(jì)實(shí)惠般實(shí)驗(yàn)室條件都達(dá)且現(xiàn)突變幾率較高酵母菌株誘變采用種 1.1.2電離輻射 γ- 射線電離物應(yīng)用廣泛電離射線具高能量能產(chǎn)電離作用，直接或間接改變DNA 結(jié)構(gòu)其直接效應(yīng)氧化脫氧核糖堿基或者脫氧核糖化鍵糖- 磷酸相連接化鍵其間接效應(yīng)能使水或機(jī)產(chǎn)自由基些自由基與細(xì)胞溶質(zhì)發(fā)化變化導(dǎo)致DNA 缺失損傷[2] 除γ- 射線外電離輻射X- 射線、β- 射線快等電離輻射定局限性操作要求較高且定危險(xiǎn)性通用于能使用其誘變劑誘變育種程 1.1.3離注入 離注入20 世紀(jì)80 代初興起項(xiàng)高新技術(shù)主要用于金屬材料表面改性1986 逐漸用于農(nóng)作物育種近微物育種逐漸引入該技術(shù)[3] 離注入物吸收能量并且引起復(fù)雜物理化變化些變化間體各類性自由基些自由基引起其物損傷使細(xì)胞染色體突變DNA 鏈斷裂使質(zhì)粒DNA 造斷裂由于離注入射程具控性隨著微束技術(shù)精確定位技術(shù)發(fā)展定位誘變能[4] 離注入進(jìn)行微物誘變育種般實(shí)驗(yàn)室條件難達(dá)目前應(yīng)用相較少 1.1.4 激光 激光種光量流稱光微粒激光輻射通產(chǎn)光、熱、壓力電磁場(chǎng)效應(yīng)綜合應(yīng)用直接或間接影響機(jī)體引起細(xì)胞染色體畸變效應(yīng)、酶激或鈍化及細(xì)胞裂細(xì)胞代謝改變光量細(xì)胞內(nèi)含物任何物質(zhì)旦發(fā)作用都能導(dǎo)致物機(jī)體細(xì)胞遺傳特性發(fā)變異同種類激光輻射物機(jī)體所表現(xiàn)細(xì)胞遺傳變化同[5] 激光作種育種具操作簡單、使用安全等優(yōu)點(diǎn)近應(yīng)用于微物育種取少進(jìn)展 1.1.5 微波 微波輻射屬于種低能電磁輻射具較強(qiáng)物效應(yīng)頻率范圍300MHz~300GHz物體具熱效應(yīng)非熱效應(yīng)其熱效應(yīng)指能引起物體局部溫度升引起理化反應(yīng)；非熱效應(yīng)指微波作用物體產(chǎn)非溫度關(guān)聯(lián)各種理化反應(yīng)兩種效應(yīng)綜合作用物體產(chǎn)系列突變效應(yīng)[6] ，微波用于領(lǐng)域誘變育種農(nóng)作物育種、禽獸育種工業(yè)微物育種并取定 1.1.6 航育種 航育種稱空間誘變育種利用高空氣球、返式衛(wèi)星、飛船等航器作物種、組織、器官或命體搭載宇宙空間利用宇宙空間特殊環(huán)境使物基產(chǎn)變異再返面進(jìn)行選育培育新品種、新材料作物育種新技術(shù)空間環(huán)境素主要微重力空間輻射及其誘變素交變磁場(chǎng)超真空環(huán)境等些素交互作用導(dǎo)致物系統(tǒng)遺傳物損傷使物發(fā)諸突變、染色體畸變、細(xì)胞失、發(fā)育異等 航育種較其育種特殊航技術(shù)與微物育種技術(shù)機(jī)結(jié)合技術(shù)含量高本高體研究者或般研究單位都難實(shí)現(xiàn)能與航技術(shù)相結(jié)合由家完 1.1.7 壓室溫等離體誘變育種 壓低溫等離體（Atmospheric and Room Temperature Plasma）簡稱ARTP指能夠氣壓產(chǎn)溫度25-40 °C間、具高性粒（包括處于激發(fā)態(tài)氦原、氧原、氮原、OH自由基等）濃度等離體射流ARTP技術(shù)作種新型物理微物誘變育種領(lǐng)域著廣闊應(yīng)用前景 等離體適劑量性粒作用于微物能夠使微物細(xì)胞壁/膜結(jié)構(gòu)及通透性改變并引起基損傷菌株現(xiàn)遺傳物質(zhì)損傷微物啟SOS修復(fù)機(jī)制其誘導(dǎo)產(chǎn)DNA聚合酶ⅣV具3ˊ核酸外切酶校功能于DNA鏈損傷部位即使現(xiàn)配堿基復(fù)制仍能繼續(xù)前進(jìn)情況允許錯(cuò)配增加存機(jī)ARTP遺傳物質(zhì)造損傷性較高；SOS誘導(dǎo)修復(fù)本身容錯(cuò)性修復(fù)ARTP性損傷能修復(fù)程包容于DNA鏈微物進(jìn)行復(fù)制修復(fù)其能帶性錯(cuò)配能 ARTP應(yīng)用于微物突變育種本低、操作便沒物理誘變?cè)O(shè)備（離束注入等）所需離或電加速、真空制冷等附屬設(shè)備；ARTP遺傳物質(zhì)損傷機(jī)制具較高突變率突變性能于真菌、細(xì)菌、藻類等都效；ARTP環(huán)境污染保證操作者身安全論用何種氣體放電其均害氣體產(chǎn)[1] 5化誘變 編輯 2.1.1 烷化劑 烷化劑能與或幾核酸堿基反應(yīng)引起DNA 復(fù)制堿基配轉(zhuǎn)換發(fā)遺傳變異用烷化劑甲基磺酸乙酯、亞硝基胍、乙烯亞胺、硫酸二乙酯等 甲基磺酸乙酯（ethylmethane sulphonate，EMS) 用烷化劑誘變率高誘導(dǎo)突變株數(shù)點(diǎn)突變?cè)撐镔|(zhì)具強(qiáng)烈致癌性揮發(fā)性用5%硫代硫酸鈉作終止劑劑 N- 甲基- N'- 硝基- N- 亞硝基胍（NTG) 種超誘變劑應(yīng)用廣泛定毒性操作應(yīng)該注意堿性條件NTG 形重氮甲烷（CH2N2）引起致死突變主要原效應(yīng)能CH2N2 DNA 烷化作用引起[2] 硫酸二乙酯（DMS) 用由于毒性太強(qiáng)目前少使用乙烯亞胺產(chǎn)較少難買使用濃度0.0001%~0.1%高度致癌性使用需要使用緩沖液配置 2.1.2 堿基類似物 堿基類似物結(jié)構(gòu)類似堿基摻入DNA 導(dǎo)致DNA 復(fù)制產(chǎn)錯(cuò)配mRNA 轉(zhuǎn)錄紊亂功能蛋白重組表型改變?cè)擃愇镔|(zhì)毒性相較負(fù)誘變率高往往易突變體主要5- 氟尿嘧啶（5- FU) 、5- 溴尿嘧啶（5- BU) 、6- 氯嘌呤等程世清等[25]用5- BU 產(chǎn)色素菌（枝桿菌T17- 2- 39） 細(xì)胞進(jìn)行誘變物量平均提高22.5%. 2．1.3 機(jī)化合物 誘變效般危險(xiǎn)性較用氯化鋰白色結(jié)晶使用配0.1%~0.5%溶液或者直接加誘變固體培養(yǎng)基作用間30min～2d亞硝酸易解所現(xiàn)配現(xiàn)用用亞硝酸鈉鹽酸制取亞硝酸鈉配0.01~0.1mol/L 濃度使用加入等濃度等體積鹽酸即 2.1.4 其 鹽酸羥胺種原劑作用于C 使G- C 變A- T較用，使用濃度0.1%～0.5%作用間60min～2h 外誘變兩種或種誘變復(fù)合使用或者重復(fù)使用同種誘變效更佳顧華等[7]谷氨酸棒桿菌ATCC- 13761 發(fā)菌株經(jīng)DMS NTG 誘變處理獲株L- 組氨酸產(chǎn)菌 2、誘變劑 2.1 誘變劑選擇 選擇誘變劑需要注意誘變劑專性即某誘變劑或誘變處理優(yōu)先使基組某些部發(fā)突變別部即使少發(fā)突變誘變劑專性基礎(chǔ)十解萬盡管關(guān)修復(fù)途徑必定影響關(guān)系并簡單其各種素包括誘變處理環(huán)境條件能影響突變類型 工業(yè)遺傳家難確預(yù)言改良某菌種需要何種類型水平突變產(chǎn)類型盡能突變體適采用幾種互補(bǔ)類型誘變處理遠(yuǎn)紫外疑所誘變劑合適似乎誘導(dǎo)所已知損傷類型采取效、安全預(yù)防容易化誘變劑液體試劑比粉末試劑更易進(jìn)行安全操作另利素產(chǎn)緊密連鎖突變叢趨勢(shì)盡管種效應(yīng)某些體系能利條件必須認(rèn)識(shí)能某些特異菌系用某些誘變劑能誘變點(diǎn)通測(cè)定易檢突變體抗藥性突變體或原養(yǎng)型復(fù)突變體誘變力相容易驗(yàn)證[8] 2.2 誘變劑劑量 隨機(jī)篩選佳效看誘變劑適劑量用于篩選存群體高比例所需要突變體使測(cè)定效價(jià)階段更省力 菌株改良前決定所用誘變劑適劑量并突變性增強(qiáng)技術(shù)打基礎(chǔ)聰明做通測(cè)定同誘變劑處理同菌種突變力用高單位突變本身測(cè)定適劑量能種突變檢測(cè)困難使用容易檢標(biāo)記耐藥標(biāo)記要估計(jì)局限性提供些價(jià)值資料

  贊(10)

  回復(fù)(0)

  評(píng)論

  評(píng)論

  登錄后參與評(píng)論