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- 夢夢19999 2017-12-15 00:00:00
- 目前公認(rèn)能夠精確測定血鉛水平的儀器和方法有:Z常用的是陽極溶出伏安法(ASV)和石墨爐原子吸收光譜法 (GFAAS)。 等離子體質(zhì)譜ICP-MS雖然可精確測定血鉛含量,但因成本太高,不適合做日常分析,只有一些專業(yè)實驗室才擁有這種設(shè)備。 陽極溶出伏安法(ASV)作為成功測定血鉛濃度的檢測方法,在國外應(yīng)用已有30年多的歷史。用陽極溶出伏安法分析血鉛是在1971年提出,其后顯示出它在微量測定中特有的優(yōu)勢。血液中的鉛離子,經(jīng)試劑處理,釋放成游離的鉛離子,當(dāng)在電極中施加一定的負(fù)電壓時,所有的鉛離子將被還原成鉛且附著在電極上,然后再在電極上施加更正的電壓,電極上的鉛再電離成的鉛離子,并釋放一定的電子,產(chǎn)生電流信號。此電流信號與溶液中鉛濃度成比例關(guān)系,從而測定出鉛離子的濃度。 美國ESA公司生產(chǎn)的3010B型血鉛分析儀使用的是轉(zhuǎn)換法,即用含(CH3COO)2Ca、CrCl3、Hg2+ 置換血蛋白中的2價鉛離子,其主要優(yōu)勢在于分析速度的提高,并可以得到比較可靠的結(jié)果。美國CDC項目的幾項比較結(jié)果顯示ASV和GFAAS的一致性很好。 石墨爐原子吸收光譜法(GFAAS)是目前國際上公認(rèn)的檢測血鉛的標(biāo)準(zhǔn)方法之一。但石墨爐原子吸收光譜受光散射和分子吸收的影響較大,此方法規(guī)定必須用塞曼背景修正系統(tǒng),并保證用于分析鉛的波長穩(wěn)定在283.3nm。而且此方法對樣品處理和工作環(huán)境的要求很苛刻,在操作時要注意以下幾點: 1. 在采血和對血樣進(jìn)行處理過程中,由于血樣是完全暴露在環(huán)境中,因此一定注意環(huán)境中的鉛污染血樣(如空氣中微粒帶來的鉛污染、使用了被污染的器具)。 2. 在采血后對血樣進(jìn)行硝化,硝化的作用是去除血液里的纖維素,使鉛以游離態(tài)的形式存在于溶液中。處理過程中如使用的硝酸本身的鉛含量就很高,甚至?xí)哂谘獦拥你U含量,因此有必要在使用硝酸對血樣進(jìn)行硝化處理前先檢測硝酸的鉛含量并采取措施降低硝酸的鉛的含量,避免血樣的二次污染,假陽性的出現(xiàn)。 3. 在使用塞曼效應(yīng)石墨爐原子吸收光譜來測定血鉛時必須要有專業(yè)技術(shù)人員來完成此操作過程。 火焰原子吸收光譜法(AAS)用火焰原子吸收法做人體血鉛含量分析是一種舊的技術(shù),由于對人體產(chǎn)生影響的血鉛是微量的,使用火焰原子吸收光譜,鉛的原子化率是非常低的,即在實際操作中表現(xiàn)為基線漂移非常嚴(yán)重。因此它的靈敏度是達(dá)不到檢測人體血鉛的檢測范圍,有可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果?;鹧嬖游赵诓僮魃鲜芡獠恳蛩赜绊戄^嚴(yán)重,尤其是人為因素的影響,不同的人操作可能會得到不同的結(jié)果。同時,由于在處理血樣的過程中是完全暴露在環(huán)境(如空氣中微粒帶來的鉛污染、使用了被污染的器具)中和血樣進(jìn)行硝化處理過程中使用的硝酸本身的鉛含量過高,因此可能造成對血樣的二次污染,會造成兒童實際血鉛水平較低而測量結(jié)果較高,即假陽性現(xiàn)象出現(xiàn)。此方法基本上已被石墨爐原子吸收法所取代。 紅細(xì)胞原卟啉法(EP)也稱為鋅卟啉法(ZPP)曾經(jīng)作為無癥狀兒童和其他高危人群的鉛篩查手段。有數(shù)據(jù)表明,鋅原卟啉法(EP/ZPP)并無足夠的靈敏度和準(zhǔn)確度測定低濃度的血鉛含量,因而不再用于血鉛篩查。鋅原卟啉法測定是用于說明由于鋅取代了在卟啉環(huán)中的鐵引起原卟啉含量(而此原因是由于鉛YZ了線粒體中的鐵絡(luò)合酶引起的)的一種方法。原卟啉只有在所有的循環(huán)的紅細(xì)胞完全更新后才能達(dá)到穩(wěn)定的水平,而達(dá)到此水平需要的時間為120天,且原卟啉的半衰期(68天)要比血中的鉛的半衰期(28-36天)要長。鋅原卟啉法并不能表明檢測期血鉛的含量,而只是一種對中度血鉛含量的間接的估計。依據(jù)大量的研究結(jié)果表明:鋅卟啉的含量通常低于35μg/dL,體內(nèi)新增的原卟啉的濃度和血鉛水平只有在30-80μg/dL才成比例(PorruAlessio 1996)。在血鉛濃度為10μg/dL-30μg/dL時,用EP法檢測,其診斷的靈敏度和精度都是非常低的。而這一血鉛水平已明確對兒童健康有害。因此鋅原卟啉法的靈敏度不足以測定低血鉛水平中的鉛暴露狀況,所以用EP法檢測會造成兒童實際血鉛水平較高而測量結(jié)果較低,易引起假陰性的結(jié)果。在黃疸及缺鐵性貧血癥,鐮形血球及其他溶血性貧血癥病人中,EP值會升高,易引起診斷上的假陽性。所以,此方法在應(yīng)用于兒童血鉛的檢測上在國外已被禁止,見CDC的1991版“防止兒童鉛中毒(Preventing Lead Poisoning in Young Children)”及美國衛(wèi)生和人類服務(wù)部有毒物質(zhì)和疾病注冊處健康教育和促進(jìn)分部“鉛的毒害(Lead Toxicity)”一書(2000年10月改版本)。
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本文聚焦葉綠素含量測定儀在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用,圍繞其工作原理、檢測流程、數(shù)據(jù)解讀與日常維護(hù)展開,旨在幫助科研與生產(chǎn)人員實現(xiàn)快速、穩(wěn)定的葉綠素檢測,以便更評估植物健康與營養(yǎng)狀況。
原理概述 葉綠素含量測定儀通常分為SPAD型與分光型兩大類。SPAD儀通過對比葉片在可吸收光與近紅外光兩種波段下的反射特性,得到一個相對的葉綠素含量指標(biāo),適合田間快速篩選與現(xiàn)場判斷。分光型設(shè)備則以特定波長的吸收特征為基礎(chǔ),通過與標(biāo)準(zhǔn)樣品比對,獲得葉綠素a、葉綠素b及總?cè)~綠素含量的定量值,適用于實驗室級別的精確分析與研究。
檢測流程與要點
- 準(zhǔn)備與校正:使用前清潔探頭,按儀器說明進(jìn)行白板或?qū)φ諛悠返某醪叫U?
- 環(huán)境條件:盡量在無直射日光、室溫穩(wěn)定的環(huán)境下測量,避免溫度與光線波動影響讀數(shù)。
- 樣品選擇:取中部健康、無病斑的葉片,盡量避免邊緣葉片與受機(jī)械損傷的區(qū)域。
- 測量步驟:將探頭輕觸葉表,確保接觸均勻,按廠家指引在同一葉片不同部位多點測量,取平均值作為樣品葉綠素水平。
- 數(shù)據(jù)記錄:記錄樣品編號、測點位置、環(huán)境溫度和濕度等,以便進(jìn)行后續(xù)比較與回歸分析。
儀器選型與使用場景
- 田間場景:SPAD型便攜儀最具優(yōu)勢,操作簡便、讀數(shù)快速,適合育種篩選和日常監(jiān)測。
- 實驗室場景:分光測定儀可提供葉綠素a、b的定量值,適用于生理研究、營養(yǎng)診斷和定量比較。不同場景應(yīng)根據(jù)需求選擇合適的波段與分析模式。
標(biāo)準(zhǔn)化與校準(zhǔn)要點
- 日常校準(zhǔn):遵循儀器說明進(jìn)行白板或標(biāo)準(zhǔn)樣品校準(zhǔn),確保不同批次數(shù)據(jù)可比。
- 對照與回歸:建立本地葉綠素含量與儀器讀數(shù)的回歸關(guān)系,降低批次間誤差。
- 存放與維護(hù):探頭與光路保持清潔,避免長時間高溫、濕度與振動干擾;避免將儀器暴露在強(qiáng)光環(huán)境中。
數(shù)據(jù)解讀與應(yīng)用
- 數(shù)據(jù)類型:SPAD值與分光法定量值具有不同的單位與 interprétation,需要建立本地關(guān)系模型來轉(zhuǎn)化為葉綠素含量。
- 應(yīng)用場景:在氮營養(yǎng)診斷、灌溉管理、作物育種和生理研究中,葉綠素含量是評估光合能力與養(yǎng)分狀態(tài)的重要指標(biāo)。合理解讀可輔助決策,提升產(chǎn)量與品質(zhì)。
維護(hù)與常見問題
- 常見問題及排查:讀數(shù)波動、對比度降低、光路污染等,應(yīng)檢查探頭清潔度、樣品表面狀態(tài)及環(huán)境條件是否穩(wěn)定。
- 預(yù)防性措施:定期校準(zhǔn)、妥善存放、避免掉落和劇烈振動,確保儀器長期穩(wěn)定運(yùn)行。
結(jié)語 通過規(guī)范的選型、標(biāo)準(zhǔn)化的操作與持續(xù)的校準(zhǔn),葉綠素含量測定儀能夠在田間監(jiān)測、科研分析與農(nóng)業(yè)中發(fā)揮穩(wěn)定作用,為植物健康評估與產(chǎn)量提升提供可靠的數(shù)據(jù)支撐。
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