一、熒光基礎(chǔ)知識(shí)

在顯微成像中，熒光指的是一種光致發(fā)光現(xiàn)象，某些分子能吸收特定波長(zhǎng)的光線，然后再發(fā)射出其他波長(zhǎng)的光線的物理現(xiàn)象，這種分子一般稱(chēng)為熒光團(tuán)。通常情況下，由于斯托克斯位移，熒光團(tuán)的激發(fā)峰值和發(fā)射光譜之間存在差值，發(fā)射光線能量低于吸收光線，波長(zhǎng)比激發(fā)光更長(zhǎng)。

熒光現(xiàn)象有兩種：自發(fā)熒光與繼發(fā)熒光。自發(fā)熒光也稱(chēng)固有熒光，是指經(jīng)照射后就能發(fā)出熒光；繼發(fā)熒光也稱(chēng)二次熒光，物質(zhì)經(jīng)照射后不能或只能部分發(fā)生微弱熒光，需先用熒光染料標(biāo)記處理，再經(jīng)照射才能發(fā)生熒光。目前在熒光顯微技術(shù)中，主要利用的是繼發(fā)熒光現(xiàn)象。

念珠藻葉綠體的自發(fā)熒光，明美MF52-N拍攝

熒光產(chǎn)生包含激發(fā)和發(fā)射兩個(gè)過(guò)程，在熒光顯微技術(shù)中具體體現(xiàn)為以下幾個(gè)關(guān)鍵部件：

（1）激發(fā)光源：主要包含以下兩個(gè)指標(biāo)

? 光源光譜覆蓋發(fā)射光譜：熒光團(tuán)在特定波段范圍才能被大部分激發(fā)，因此激發(fā)光源的光譜范圍要能匹配所觀察樣本中的熒光團(tuán)激發(fā)特征。

? 發(fā)射光譜波段的強(qiáng)度：熒光信號(hào)一般較弱，需要使用較高亮度的激發(fā)光以產(chǎn)生較強(qiáng)信號(hào)的發(fā)射熒光信號(hào)。

（明美-四通道LED光源MG120，寬光譜 + 高光功）

（2）激發(fā)塊：用于形成特異性激發(fā)/發(fā)射的一組濾光片，一般包含以下三個(gè)

? 激發(fā)濾光片EX：濾過(guò)光源中特定波段的光，用以激發(fā)樣本中特定染料

? 發(fā)射濾光片EM：允許熒光團(tuán)發(fā)射的特定波段的光通過(guò)

? 二向分色鏡DM：反射激發(fā)波段的光，透過(guò)發(fā)射波段的光。透射熒光顯微鏡沒(méi)有這個(gè)濾光片，但目前主流都是落射熒光顯微鏡，會(huì)有二向分光鏡。

（明美可定制適配四家品牌，不同波段需求的激發(fā)塊）

二、熒光顯微成像的應(yīng)用

熒光顯微鏡利用自發(fā)熒光或繼發(fā)熒光現(xiàn)象，廣泛用于生物（醫(yī)學(xué)）、礦物、材料科學(xué)等領(lǐng)域的顯微熒光觀測(cè)。①在生物學(xué)領(lǐng)域，主要借助熒光染料標(biāo)記，可準(zhǔn)確和詳細(xì)地識(shí)別細(xì)胞和亞微觀細(xì)胞成分。②在礦物學(xué)領(lǐng)域，通常用于研究有自發(fā)熒光特性的物質(zhì)，如石油、煤炭、氧化石墨烯等礦物。③在材料科學(xué)，可用于紡織工業(yè)或造紙業(yè)來(lái)分析基于纖維的材料，包括紡織品和紙張，在半導(dǎo)體領(lǐng)域，也可用來(lái)觀測(cè)具有熒光特性的材料如磁珠等。

明美MF31-LED熒光顯微鏡觀察SBS改性瀝青

（MF43-N拍攝的磁珠熒光圖片）

熒光顯微技術(shù)在生物學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用是廣泛也是復(fù)雜的，主要是對(duì)細(xì)菌、細(xì)胞、組織或小型生物（如斑馬魚(yú)等模式生物）進(jìn)行標(biāo)記成像，它的微觀層面都是通過(guò)熒光染料對(duì)分子層面進(jìn)行標(biāo)記。從熒光染料的選擇看，通常需要考慮幾個(gè)因素，一是熒光染料標(biāo)記的位置，二是該染料對(duì)應(yīng)的激發(fā)特征，包括吸收光譜特征和發(fā)射光譜特征。借助熒光染料，熒光顯微技術(shù)不只局限于蛋白質(zhì)，它還可以對(duì)核酸、聚糖進(jìn)行染色，甚至鈣離子等非生物物質(zhì)也可以檢測(cè)。以下根據(jù)染料結(jié)合的位置列舉了一些常見(jiàn)的熒光染料及應(yīng)用范圍：

FITC熒光染色，MF52-N拍攝

（1）免疫熒光（IF）：主要標(biāo)記的是蛋白質(zhì)。免疫熒光技術(shù)利用抗體可以和相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的特性，主要有兩種方式：一是利用內(nèi)源熒光信號(hào)，即通過(guò)克隆技術(shù)用遺傳學(xué)方法將熒光蛋白與目的蛋白相連，如GFP等；二是利用熒光標(biāo)記的抗體與目的蛋白特異性結(jié)合。

? FITC（異硫氰酸熒光素）：是一種有機(jī)熒光染料，495/517 nm為該染料激發(fā)/發(fā)射峰值，可以和蛋白質(zhì)上的基團(tuán)結(jié)合，主要用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)中。

? TRITC（四甲基羅丹明-5(6)-異硫氰酸）：屬于羅丹明家族的衍生物，550/573 nm為該染料激發(fā)/發(fā)射峰值，可與蛋白質(zhì)結(jié)合。

? 花箐染料（cy3、cy3.5、cy5、cy5.5、cy7等系列）：非特異性吸附少，消光系數(shù)高，熒光量子產(chǎn)率高，從而讓標(biāo)記顯影時(shí)背景弱，信號(hào)強(qiáng)。除細(xì)胞顯影外，它們也常用于生物篩選、蛋白免疫印跡、生物醫(yī)學(xué)顯影、小動(dòng)物體內(nèi)成像等。

? Alexa Fluor系列：屬于帶負(fù)電荷且親水的熒光染料系列，是不同基礎(chǔ)熒光物質(zhì)的磺化形式。這些產(chǎn)品標(biāo)識(shí)涵蓋了對(duì)應(yīng)的激發(fā)波長(zhǎng)，相比于FITC等染料，具有更好的穩(wěn)定性和熒光亮度。

DAPI熒光染色，MF52-N拍攝

（2）DNA染色：主要標(biāo)記核酸。同蛋白質(zhì)一樣，對(duì)核酸進(jìn)行標(biāo)記與研究同樣有重要意義，如對(duì)細(xì)胞核（主要成分為核酸）進(jìn)行染色標(biāo)記可以判斷細(xì)胞的數(shù)量和位置。

? DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）：當(dāng)DAPI與雙股DNA結(jié)合時(shí)，在358nm處有一個(gè)吸收峰值，在461nm處有一個(gè)發(fā)射峰值，其發(fā)射光的波長(zhǎng)范圍含蓋了藍(lán)色至青綠色。DAPI也可與RNA結(jié)合，但產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度不及與DNA結(jié)合的結(jié)果。DAPI可以透過(guò)完整的細(xì)胞膜，因此被廣泛用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。

? Hoechst（33258、33342、34580）：這三種染料都可在350nm左右的紫外光激發(fā)，在461nm處發(fā)出藍(lán)靛色熒光。與DAPI類(lèi)似，Hoechst可透過(guò)完整細(xì)胞膜，被廣泛用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞染色。

? PI（碘化丙啶）：是一種不能透過(guò)細(xì)胞膜的DNA染色劑。與核酸結(jié)合后，激發(fā)波長(zhǎng)為538 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為617 nm。由于該染色劑無(wú)法進(jìn)入完整的細(xì)胞中，因此該染色劑常用于區(qū)分細(xì)胞群中的活細(xì)胞和死細(xì)胞。

Fura2鈣離子探針做的研究圖片， 引自公開(kāi)文獻(xiàn)
Front. Neural Circuits 11:11. doi: 10.3389/fncir.2017.00011

（3）離子成像：研究細(xì)胞中各種離子的流動(dòng)與分布對(duì)細(xì)胞活動(dòng)的深入理解有重要作用。通過(guò)各種離子指示劑，如鈣離子、鈉離子、鎂離子、鋅離子等指示劑與離子結(jié)合形成熒光團(tuán)，利用光譜特征檢測(cè)對(duì)應(yīng)離子的分布狀態(tài)。

三、熒光顯微成像的挑戰(zhàn)

應(yīng)用熒光顯微技術(shù)進(jìn)行成像的過(guò)程中，不僅要考慮成像的質(zhì)量，包括分辨率、對(duì)比度、熒光信號(hào)強(qiáng)弱、背景光、多通道成像等，還要考慮熒光染料、光照等對(duì)樣本的影響，比如熒光染料毒性、光毒性、光漂白等。以下列出了熒光顯微技術(shù)應(yīng)用中的常見(jiàn)挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)方法：

汞燈需搭配帶計(jì)時(shí)器的復(fù)雜控制箱來(lái)使用

（1）激發(fā)光源選擇和使用。傳統(tǒng)熒光成像使用的是高壓汞燈，具有特異性的光譜特征和較高的光強(qiáng)，但使用有很多麻煩，首先需要預(yù)熱，然后光強(qiáng)靠ND濾鏡調(diào)節(jié)，壽命較短可能就200小時(shí)，在壽命用完前還會(huì)有光強(qiáng)衰減問(wèn)題，需要調(diào)整ND濾鏡，替換燈泡后需要重新校中。目前很多應(yīng)用都用LED熒光光源取代汞燈作為熒光光源，如寬光譜大功率LED熒光光源MG-100，壽命長(zhǎng)單個(gè)可以頂50個(gè)汞燈，光強(qiáng)更穩(wěn)定可控，并且可以即開(kāi)即用，省事省心。

明美可定制適配四家品牌的濾光片組

（2）濾光片質(zhì)量和匹配度。激發(fā)塊中的濾光片質(zhì)量會(huì)影響激發(fā)光和發(fā)射光的透過(guò)率，影響熒光效率并帶來(lái)雜散光和背景噪聲問(wèn)題。同時(shí)，濾光片的參數(shù)能否匹配染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰，也會(huì)對(duì)熒光效果產(chǎn)生重大影響。對(duì)于簡(jiǎn)易熒光需求，明美建議使用數(shù)顯熒光模塊，整合光源和BGU等常用激發(fā)塊，可以為四家品牌顯微鏡升級(jí)熒光觀察，簡(jiǎn)單易用效果好。對(duì)于專(zhuān)業(yè)熒光需求，明美提供匹配四家品牌主流熒光顯微鏡的激發(fā)盒和濾光片組，可按需定制不同濾光片組合，如鈣離子Fura2探針需要用U激發(fā)G發(fā)射，一般的U激發(fā)B發(fā)射濾光片組并不適合。

（MF43-N+MC50-S拍攝的小鼠腦片熒光圖像）

（3）光毒性與熒光染料毒性：在生物學(xué)領(lǐng)域的熒光成像中，需考慮光毒性與熒光染料毒性對(duì)樣本的影響，如細(xì)胞內(nèi)的有機(jī)分子在與氧反應(yīng)時(shí)吸收光發(fā)生分解并產(chǎn)生自由基，部分熒光染料本身也能產(chǎn)生自由基，這是引起細(xì)胞等生物樣本損傷的主要來(lái)源。通常的應(yīng)對(duì)思路是：①使用具有較低能量（波長(zhǎng)較長(zhǎng)）激發(fā)光譜的熒光染料；②盡可能低的光強(qiáng)和盡可能短的激發(fā)時(shí)間，需要在成像質(zhì)量與樣本健康之間保持平衡；③降低幀速率，尤其在長(zhǎng)時(shí)間的熒光成像中，這種情況需要提高相機(jī)的靈敏度，保證捕獲微弱的熒光信號(hào)。

（單通道熒光拍攝，經(jīng)軟件合成多色熒光圖像）

（4）多色熒光成像：在生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用較多，尤其是在對(duì)活細(xì)胞標(biāo)記成像時(shí)，需同時(shí)對(duì)多種物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記，并在一個(gè)圖像中顯示，而大多數(shù)熒光染料具有寬發(fā)射光譜，在使用多種染料標(biāo)記時(shí)會(huì)出現(xiàn)熒光光譜重疊現(xiàn)象。對(duì)于多色熒光成像，有兩種應(yīng)對(duì)思路，一是針對(duì)每種染料使用對(duì)應(yīng)的單通道窄帶濾光片，后通過(guò)軟件進(jìn)行合成，這種方式對(duì)成像速度及軟件圖像處理提出較高要求；二是使用寬光譜光源同時(shí)激發(fā)，選用雙通濾光片或多通濾光片，這種濾光片的的特點(diǎn)是允許兩種或以上波段熒光信號(hào)通過(guò)，可實(shí)現(xiàn)一組濾光片同時(shí)觀察兩種或以上熒光染料，這種方式要求相鄰的發(fā)射光譜范圍沒(méi)有重疊，所得到的熒光信號(hào)之間能較好的被區(qū)分。

（雙通濾光片熒光拍攝，鏡下可同時(shí)觀察到B\G兩種熒光信號(hào)）

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明美倒置LED熒光模塊助力升級(jí)熒光顯微鏡

顯微鏡LED熒光模塊助力升級(jí)熒光顯微鏡（無(wú)需重置熒光顯微鏡），作為熒光顯微鏡的重要附件，通過(guò)大功率的照明裝置發(fā)出較短波長(zhǎng)的激發(fā)光，誘發(fā)熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，經(jīng)過(guò)物鏡作用在樣品上，再通過(guò)顯微鏡觀察熒光物體的形狀及其所在位置，從而對(duì)這類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的研究。

明美倒置熒光模塊為三色四通道結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，標(biāo)配三個(gè)大視野熒光通道與一個(gè)明場(chǎng)通道。波段切換穩(wěn)定順暢。用戶(hù)可根據(jù)需求，自由選擇熒光波段、數(shù)量。采用LED冷光源，基于外形精簡(jiǎn)、操作簡(jiǎn)便的設(shè)計(jì)理念，將驅(qū)動(dòng)電源、LED激發(fā)光源及熒光濾光組一體化（可適配不同品牌倒置顯微鏡，如圖中搭配奧林巴斯倒置顯微鏡CKX41）

 有了顯微鏡LED熒光模塊的出現(xiàn)，逐漸替代高壓汞燈、金屬鹵素?zé)?、氙燈等光源，顯微鏡LED熒光模塊采用大功率LED作為照明光源，具有光效率高，發(fā)熱小，壽命長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，穩(wěn)定性高，為較長(zhǎng)時(shí)間的連續(xù)實(shí)驗(yàn)提供熒光照明，參數(shù)可視化、操作簡(jiǎn)單、視野升級(jí)，兼容性更好，推動(dòng)熒光顯微鏡在科研領(lǐng)域中使用的普及率。

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來(lái)源：https://www.mshot.com/article/1576.html

     熒光顯微鏡是由生物顯微鏡和落射熒光裝置組成，有消雜散光系統(tǒng)，可以將強(qiáng)烈的雜光導(dǎo)入至物鏡光路之外，并加以吸收，提高了顯微鏡的圖像信噪比。

     下面是熒光顯微鏡的燈泡的調(diào)中和熒光觀察的方法:

     一、燈泡調(diào)中的方法：

    （1）任選一塊標(biāo)本放在載物臺(tái)上；

    （2）轉(zhuǎn)動(dòng)鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移出光路，轉(zhuǎn)動(dòng)濾色片組轉(zhuǎn)換手輪，將紫光(V)或藍(lán)光(B)或綠光(G)激發(fā)濾色片組轉(zhuǎn)入光路，并將10X熒光物鏡轉(zhuǎn)入光路；

    （3）調(diào)節(jié)粗微調(diào)手輪，將標(biāo)本像調(diào)焦清晰；

    （4）前后推動(dòng)垂直照明器右邊的聚光鏡調(diào)焦推桿，使視場(chǎng)光欄成像清晰，轉(zhuǎn)動(dòng)視場(chǎng)光欄撥桿將視場(chǎng)光欄收小，調(diào)節(jié)視場(chǎng)光欄調(diào)中螺釘使視場(chǎng)光欄居中，然后再將視場(chǎng)光欄開(kāi)至較大；

    （5）轉(zhuǎn)動(dòng)鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移入光路，前后調(diào)節(jié)燈箱上的聚光鏡撥桿，使汞燈的弧光在視場(chǎng)內(nèi)成像清晰；

    （6）調(diào)整燈箱上的燈泡水平調(diào)節(jié)螺釘和垂直調(diào)節(jié)螺釘，使汞燈的弧光居中；

    （7）調(diào)整反光鏡水平調(diào)節(jié)螺釘和垂直調(diào)節(jié)螺釘，使光源的反射像與汞燈的弧光分開(kāi)；

    （8）轉(zhuǎn)動(dòng)聚光鏡旋鈕把聚光鏡移出光路，此時(shí)視場(chǎng)照明均勻。

    二、如何進(jìn)行熒光觀察：

    （1）將熒光染色標(biāo)本放到載物臺(tái)上。

    （2）將10X平場(chǎng)物鏡或40X熒光物鏡轉(zhuǎn)入光路，調(diào)節(jié)載物臺(tái)縱橫移動(dòng)手輪，將標(biāo)本移入光路。

    （3）轉(zhuǎn)動(dòng)濾光片轉(zhuǎn)換撥輪，將熒光染色標(biāo)本所需要的激發(fā)濾光片組轉(zhuǎn)入光路。激發(fā)濾光片組編號(hào)刻在濾片組轉(zhuǎn)換撥輪上。濾光片選擇正確與否，是熒光顯微鏡能否得到正確應(yīng)用的關(guān)鍵。選用濾光片時(shí)，必須遵守斯托克斯定律：激發(fā)濾光片的透射波長(zhǎng)<雙色束分離器的透射波長(zhǎng)<阻斷濾光片的透射波長(zhǎng)。由于激發(fā)濾光片、雙色束分離器和阻斷濾光片，出廠時(shí)已按其用途和本身的光學(xué)特性進(jìn)行了嚴(yán)格的組合匹配，在觀察和攝影時(shí)，只需選擇濾光片組即可。

    （4）調(diào)節(jié)粗調(diào)手輪，當(dāng)看清熒光圖像輪廓后，再用微調(diào)手輪調(diào)焦，直至看到清晰的熒光圖像。

    （5）當(dāng)需要得到較強(qiáng)的熒光圖像時(shí)，可轉(zhuǎn)動(dòng)聚光鏡旋鈕把聚光鏡移入光路，可獲得較明亮的熒光圖像。

    （6）當(dāng)需要使用40X或100X熒光物鏡觀察時(shí)，應(yīng)在標(biāo)本和物鏡間加上甘油，油中不能有影響觀察的小泡或雜質(zhì)。使用時(shí)可使甘油慢慢浸潤(rùn)一會(huì)兒，然后輕輕左右來(lái)回轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器以排除氣泡。

    熒光顯微鏡對(duì)于物質(zhì)的檢出能力是非常高的，具有放大的作用；而且對(duì)于被檢測(cè)物質(zhì)的細(xì)胞的刺激也是非常小的，可以檢測(cè)活體的染色體；還有就是可以進(jìn)行多個(gè)步驟的染色。對(duì)于熒光素的構(gòu)造觀察是非常好的，一般的顯微鏡是看不出來(lái)的。而且對(duì)于一些物質(zhì)是否有熒光，熒光是什么色調(diào)的進(jìn)行判斷，還能看出是不是抗體的熒光。此款顯微鏡對(duì)于物體的定性、定量分析都是可以測(cè)定的。

明美倒置熒光顯微鏡助力山東農(nóng)大食品學(xué)院熒光活細(xì)胞觀察

細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)在越來(lái)越多領(lǐng)域的研究中成為基礎(chǔ)技術(shù)，而為了進(jìn)行進(jìn)一步的研究，往往需要使用熒光標(biāo)記技術(shù)，如近期，山東農(nóng)大食品學(xué)院需要一套倒置熒光顯微鏡供研究生研究使用，用于熒光活細(xì)胞觀察。

活細(xì)胞成像有較多注意事項(xiàng)，如將活細(xì)胞暴露于光線下會(huì)導(dǎo)致光毒性和樣本生理機(jī)能變化，因此獲得的結(jié)果可能與健康生物體的實(shí)際情況不符。 如果需要觀察熒光轉(zhuǎn)染細(xì)胞，寬場(chǎng)熒光顯微鏡通常是活細(xì)胞成像的好選擇。明美倒置熒光顯微鏡MF53-N選用觸屏控制LED冷光源，UV紫外波段單獨(dú)控制，光毒性更低。

倒置熒光顯微鏡MF53-N可擴(kuò)展性強(qiáng)，標(biāo)配轉(zhuǎn)盤(pán)式六孔熒光模塊，可自主選擇需要的熒光波段，還能擴(kuò)展三軸高精度電動(dòng)平臺(tái)和TIRF全內(nèi)反射觀察，實(shí)現(xiàn)更高的Z軸分辨率和更清晰銳利的熒光成像。

您若對(duì)倒置熒光顯微鏡MF53-N感興趣或存在疑問(wèn)，歡迎與我們聯(lián)系

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熒光顯微鏡怎么調(diào)熒光：專(zhuān)業(yè)指南

熒光顯微鏡作為現(xiàn)代生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究和材料科學(xué)中不可或缺的工具，廣泛應(yīng)用于觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)、分子定位以及各類(lèi)熒光標(biāo)記物的追蹤。如何調(diào)節(jié)熒光顯微鏡中的熒光信號(hào)，以獲得清晰且高對(duì)比度的圖像，常常是初學(xué)者和有經(jīng)驗(yàn)的使用者都會(huì)遇到的挑戰(zhàn)。本文將詳細(xì)介紹熒光顯微鏡的熒光調(diào)節(jié)方法，包括如何選擇合適的濾光片、設(shè)置激發(fā)光源、優(yōu)化熒光強(qiáng)度等方面，幫助用戶(hù)提升實(shí)驗(yàn)效果和圖像質(zhì)量。

熒光顯微鏡的基本構(gòu)成

在調(diào)節(jié)熒光顯微鏡的熒光效果之前，了解其基本構(gòu)成至關(guān)重要。熒光顯微鏡主要由光源、濾光片系統(tǒng)、樣品載物臺(tái)、反射鏡和相機(jī)等部分組成。光源提供激發(fā)光，而濾光片系統(tǒng)則用來(lái)過(guò)濾特定波長(zhǎng)的光線，使得激發(fā)光照射到樣品上，進(jìn)而激發(fā)樣品發(fā)出熒光。為了優(yōu)化熒光圖像的質(zhì)量，正確調(diào)節(jié)每一個(gè)組成部分都是必要的。

選擇合適的激發(fā)光源

激發(fā)光源是熒光顯微鏡的核心之一，合適的激發(fā)波長(zhǎng)能夠大化樣品的熒光信號(hào)。常見(jiàn)的激發(fā)光源包括氙燈、汞燈和LED燈等。選擇激發(fā)源時(shí)，首先要根據(jù)熒光染料的激發(fā)波長(zhǎng)范圍來(lái)選定。不同的熒光染料對(duì)不同波長(zhǎng)的激發(fā)光有佳響應(yīng)，因此確保激發(fā)源的波長(zhǎng)與樣品的激發(fā)要求相匹配，是調(diào)節(jié)熒光顯微鏡的步。

設(shè)置合適的濾光片系統(tǒng)

濾光片系統(tǒng)在熒光顯微鏡中起著至關(guān)重要的作用。濾光片通常分為激發(fā)濾光片、放射濾光片和透射濾光片，分別用于選擇性地控制激發(fā)光的通過(guò)、分離樣品發(fā)出的熒光以及去除雜散光。在選擇濾光片時(shí)，應(yīng)根據(jù)染料的吸收和發(fā)射波長(zhǎng)來(lái)確定合適的激發(fā)和發(fā)射濾光片。例如，對(duì)于綠色熒光蛋白(GFP)，選擇與其激發(fā)波長(zhǎng)(488 nm)和發(fā)射波長(zhǎng)(510 nm)相匹配的濾光片是十分必要的。

優(yōu)化熒光強(qiáng)度

在調(diào)整熒光顯微鏡時(shí)，熒光強(qiáng)度是影響圖像質(zhì)量的另一個(gè)關(guān)鍵因素。過(guò)低的熒光強(qiáng)度會(huì)導(dǎo)致圖像對(duì)比度不清晰，而過(guò)高的強(qiáng)度則可能導(dǎo)致信號(hào)飽和。通過(guò)調(diào)整激發(fā)光源的強(qiáng)度、曝光時(shí)間以及光學(xué)增益，可以獲得合適的熒光強(qiáng)度。樣品的濃度、染料的質(zhì)量以及熒光標(biāo)記物的穩(wěn)定性也會(huì)對(duì)熒光強(qiáng)度產(chǎn)生影響，因此在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)時(shí)刻注意這些變量。

調(diào)整焦距和圖像對(duì)比度

調(diào)整焦距是確保熒光圖像清晰的必要步驟。使用熒光顯微鏡時(shí)，焦距的精確調(diào)整能幫助獲得清晰的圖像。適當(dāng)?shù)膱D像對(duì)比度調(diào)整有助于突出熒光信號(hào)，減少背景噪音。通過(guò)微調(diào)曝光時(shí)間和亮度，也可以增強(qiáng)對(duì)比度，使得樣品的熒光信號(hào)更加鮮明。

總結(jié)

調(diào)節(jié)熒光顯微鏡的熒光效果是一個(gè)精細(xì)且復(fù)雜的過(guò)程，涉及到多個(gè)因素的協(xié)調(diào)。選擇合適的激發(fā)光源、濾光片系統(tǒng)的優(yōu)化、熒光強(qiáng)度的調(diào)整以及圖像的焦距與對(duì)比度設(shè)置，都是確保高質(zhì)量熒光圖像的重要步驟。通過(guò)深入理解并熟練掌握這些調(diào)節(jié)技巧，可以顯著提升實(shí)驗(yàn)的效果和圖像的清晰度。希望本文能為使用熒光顯微鏡的科研人員提供有價(jià)值的指導(dǎo)，幫助大家在熒光成像中獲得佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

活細(xì)胞通常用倒置熒光顯微鏡看起來(lái)方便，細(xì)胞在下面，離物鏡近，還可以用油鏡，成像質(zhì)量要比正置好，分辨率高。老師需要對(duì)活細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況以及熒光需要觀察清楚，同時(shí)使用上希望比較方便。

解決方案：

明美工程師給客戶(hù)推薦高性?xún)r(jià)比的倒置熒光顯微鏡MF52-N,可更方便的通過(guò)多種方法觀察樣品，同時(shí)操作簡(jiǎn)單、方便，減少工作中的疲勞，也無(wú)需擔(dān)心調(diào)焦過(guò)度而損壞物鏡，另外根據(jù)客戶(hù)要求搭配進(jìn)口帶通濾色片，熒光效果好。同時(shí)推薦了高像素相機(jī)MSX2，這款顯微鏡相機(jī)像素達(dá)到了1250萬(wàn)，能夠使顯微成像效果更加清晰，細(xì)節(jié)展示更加豐富，滿(mǎn)足客戶(hù)的要求。

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