全部評(píng)論(2條)
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- iypoctnm 2016-09-23 00:00:00
- 佳學(xué)基因的試劑盒為什么這么高級(jí)啊。
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- 姍迪959 2016-12-02 00:00:00
- 全血基因組DNA提取試劑盒作用原理：全血基因組DNA提取試劑盒特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，提取全血基因組DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為新型材料，能夠GX、專(zhuān)一吸附DNA，可Z大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。全血基因組DNA提取試劑盒使用說(shuō)明：使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。樣品的處理(本產(chǎn)品適用于處理新鮮的或已經(jīng)添加抗凝劑的0.lmL-1mL血液樣品)：a、在血液樣品中加入2-3倍體積的紅細(xì)胞裂解液，充分顛倒混勻，12000rpm離心1min，小心吸去上清，沉淀應(yīng)為白色或淡紅色，如果裂解不徹底，可重復(fù)以上述步驟一次。向沉淀中加200μL溶液YA，振蕩至徹底混勻。b、 如果處理的血樣為禽類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、兩棲類(lèi)或更低級(jí)生物的血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量為5-20μL，不需要再用紅細(xì)胞裂解液處理，直接加200μL溶液YA，振蕩至徹底混勻。向懸浮液中加入20μL 的RNase A (10mg/mL)，充分顛倒混勻，室溫放置10min。加入20μL的蛋白酶K( 10mg /mL )，充分顛倒混勻，65℃水浴消化30-60min，消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化完全為止。加入200μL溶液YB，再加入200μL無(wú)水乙醇，充分顛倒混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，室溫放置2min。12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。向吸附柱中加入600μL漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。12000rpm離心2min，將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜ZY懸空滴加50-200μL經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心1min。離心所得洗脫液可再加入吸附柱中，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的基因組DNA。全血基因組DNA提取試劑盒注意事項(xiàng):本試劑盒置于室溫( 15 -25℃) 干燥條件下可保存12個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2 -8℃。常用的血液抗凝劑有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如欲制備大分子量血液基因組DNA，可優(yōu)先考慮使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因?yàn)橛酶嗡乜鼓难禾崛〉幕蚪MDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，有PCR擴(kuò)增YZ現(xiàn)象。樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。4、如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響效果。絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物全血中的紅細(xì)胞無(wú)核，故在提取基因組DNA時(shí)需去除不含DNA的無(wú)核紅細(xì)胞，以免影響白細(xì)胞裂解和DNA釋放。如果處理的血樣為禽類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、兩棲類(lèi)或更低級(jí)生物的血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量減少為5-20μL，不需要再用紅細(xì)胞裂解液來(lái)裂解紅細(xì)胞。洗脫緩沖液的體積Z好不少于50μL，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率:洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響；若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH 值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。
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