1.利用ACE鍵合相的固定相選擇

分離度方程式可以確定影響分離度的參數(shù)：柱效（N）、容量因子（k）和選擇性（α）。

在過去幾年里，柱效和使用超GX色譜柱（被稱為“UHPLC”色譜柱）作為實現(xiàn)分離目標的手段已得到了極大的重視。

UHPLC已通過更快速的分離和更快速的方法開發(fā)提高實驗室生產(chǎn)力來證明了其價值。

然而，選擇性往往被忽視，且其重要性也被強調(diào)柱效所掩蓋。這是令人遺憾的。

在影響分離度的三個參數(shù)中，選擇性是Z為重要的。

（參見圖1）通過利用柱效和選擇性，通常可以實現(xiàn)更好和更快的分離。

圖 1：N、α和k對分離度（Rs）的影響

提高N，α或k可以提高分離度（Rs）。

然而，從這些圖中可以看出，隨著N或k值的提高，對分離度的改善效果也逐漸降低。

另一方面，提高選擇性（α）則沒有這個問題，因此其成為開發(fā)分離方法時的Z佳優(yōu)化變量。

在反相色譜中，固定相與分析物之間存在多種相互作用的機制，這可以用來實現(xiàn)分離。

這些相互作用機制包括：疏水性結(jié)合、π-π、氫鍵、偶極-偶極和形狀選擇性。

不同類型的鍵合相將提供其中一種或多種相互作用機制。表1列出了ACE鍵合相和每種可能的主要相互作用機制，這取決于分析物和流動相條件。

表1: 比較不同鍵合相的分離機制/相互作用                                                                                  

利用鍵合相的選擇性實現(xiàn)更好的分離。
圖2表明了兩種ACE鍵合相即C18-AR與苯基之間的選擇性差異。
盡管兩種鍵合相提供了強π-π和偶極-偶極相互作用的可能性，但是在其它可能的相互作用機制（特別是疏水性結(jié)合）的強度方面，它們存在顯著差異。

C18-AR可能具有其它不同的分離機制，可以為復(fù)雜的混合物帶來更好的分離效果。對于其他混合物，可能不是這種情況，這是ACE鍵合相的優(yōu)勢。

當(dāng)開發(fā)分離方法時，ACE鍵合相可以提供各種可供選擇的重要保留機制。

非常強大且獨特的C18-AR和C18-PFP相只有在ACE和ACE Excel色譜柱中可以獲得。
通過利用柱效和選擇性，可以實現(xiàn)更好的分離。

圖 2：C18-AR與苯基相之間選擇性差異的比較

色譜柱尺寸： 50 x 2.1 mm, 3 μm
流動相：

A= 20mM KH2PO4,pH 2.7（溶于水中）；
B= 20mM KH2PO4,pH 2.7（溶于甲醇/水中：65:35, v/v）
流速： 0.6 mL/min
溫度： 60 ℃
檢測： UV 214 nm
梯度： 5分鐘內(nèi)從3至B，并持續(xù)1分鐘。

樣品：
1. 甲硝唑
2. 3-羥基苯甲酸
3. 苯酚
4. 苯甲醇
5. 咖啡茵
6. 水楊酸
7. 喹喔啉
8. 苯甲酸
9. 奎寧
10. 非那西丁
11. 1,4-二硝基苯
12. 1,3,5-三硝基苯
13. 呋塞米
14. 1,3,5 -三甲氧基苯
15. 吡羅昔康
16. 卡維地洛
17. 苯甲酸乙酯
18. 去甲替林

C18-AR相的疏水性更大，這可以為色譜峰對（13,14）和（15,17）提供更多的保留值和更佳的選擇性。還要注意C18-AR與苯基相的洗脫順序有很多變化。

圖3給出了鍵合相選擇能力的另一實例。

一個分離是用C18鍵合相的UHPLC色譜柱完成，另一個分離是用C18-PFP鍵合相的UHPLC色譜柱完成。

C18-PFP鍵合相提供的額外分離機制，使得總體分離效果更佳出色。

圖 3：ACE Excel可以獲得zhuo越的分離度和峰形：藥物及其相關(guān)物質(zhì)的UHPLC結(jié)果

條件
色譜柱尺寸：50 x 2.1mm
流動相：

A = 5mM甲酸（溶于水中）
B = 5mM甲酸（溶于甲醇中）
梯度：5分鐘內(nèi)從3至B
流速：0.6 mL/min
溫度：40 ℃
檢測：UV 254 nm

樣品
1. 對乙酰氨基酚
2. 氫氯噻嗪
3. 甲基苯基亞砜
4. 甲基苯砜

在C18 UHPLC色譜柱和C18-PFP色譜柱上同樣快速地產(chǎn)生色譜圖。

然而，C18-PFP色譜柱可以為色譜峰對（13,14）和（15,17）提供更佳的選擇性，因此能夠提供優(yōu)越的總體分離性能。

2.ACE和ACE Excel硅膠基質(zhì)固定相幾乎消除了硅醇基對色譜分離的不利影響，并且在為堿性化合物提供zhuo越峰形方面贏得了口碑。  

峰拖尾可以降低分離度，降低靈敏度，甚至干擾準確度和精密度（圖4）。  

峰拖尾有許多潛在的原因，但分離堿性物質(zhì)時的主要原因是硅膠固定相載體顆粒表面上的酸性硅醇基與分析物上的氨基之間的相互作用（圖5）。  

圖 4：峰拖尾對分離度和靈敏度的影響  

隨著峰拖尾（Tf，拖尾因子）從1.0增加到2.0，分離度（Rs）從1.5下降到0.87。  

由于峰寬增加以及峰面積保持不變，靈敏度（峰高）也隨著峰拖尾的增加而下降。  

ACE色譜柱采用具有極低硅醇活性的超惰性硅膠制成。  

這種超純硅膠采用ZL技術(shù)進行有效鍵合和徹底封尾。  

導(dǎo)致這種硅膠基質(zhì)的固定相幾乎消除了硅醇基對色譜分離的不利影響。  

ACE色譜柱的超惰性特性使其成為分離極性堿性化合物的理想選擇。  

當(dāng)分離復(fù)雜堿性化合物時,與其他現(xiàn)代堿性去活色譜柱相比，ACE色譜柱總是能給出明顯更好的峰形和柱效（圖6）。  

圖 5：峰拖尾相互作用  

硅膠固定相載體表面上的酸性硅醇基可形成與堿性化合物相互作用的離子交換位點。  

這種離子交換的相互作用通?？梢詫?dǎo)致峰保留（二次保留），并當(dāng)采用反相HPLC分離胺類化合物時引起峰拖尾。  

一種幾乎消除了硅醇基對色譜分離不利影響的硅膠基質(zhì)固定相  

圖 6：峰拖尾比較  

條件
色譜柱尺寸：50 x 2.1 mm
流動相：40％甲醇，60％水
流速：0.2 mL/min
溫度：22oC
樣品：吡啶  

報告了堿性化合物（吡啶）在各種常見C18色譜柱上的塔板數(shù)。  

在10％峰高下測量塔板數(shù)，以使峰拖尾納入在測量中。  

ACE C18-PFP由于其超惰性性質(zhì)而達到了Z高塔板數(shù)。  

3.ACE Excel為UHPLC帶來了享有盛譽的ACE HPLC性能  

重要的是要認識到色譜柱的選擇性和柱效是獨立的變量，在開發(fā)分離方法時您不必選擇使用一種而不使用另一種。事實上，為了實現(xiàn)Z佳的總體分離效果，您應(yīng)當(dāng)對上述兩個變量以及保留值進
行優(yōu)化。當(dāng)需要實現(xiàn)高速分離時尤其如此。（參見圖7）  

圖 7：利用柱效和鍵合相選擇性來開發(fā)更快的分離方法  

條件：
流動相：  

A = 5mM甲酸（0.189）ml / L;
A = 5mM甲酸（溶于甲醇中）
柱溫：40℃
檢測：PDA, 254nm  

樣品：
1. 阿司匹林
2. 非那西丁
3. 1,3-二硝基苯
4. 苯甲酸乙酯  

5. 尼美舒利
6. 布洛芬
7. 吲哚美辛

利用UHPLC色譜柱更高的柱效，可在更高的流動相流速下使用更短的色譜柱，以使這種混合物的分離時間縮短80%（相比HPLC色譜柱）。
然而，也可以通過優(yōu)化鍵合相的選擇性來進一步縮短分離時間，在這個案例中，就是利用了C18-PFP鍵合相所具有的增強的選擇性。

與C18UHPLC色譜柱、C18 HPLC色譜柱相比，ACE Excel C18-PFP UHPLC色譜柱分別將混合物的分離時間縮短了80％以上以及96％，同時保持了所有峰的分離度。

ACE Excel UHPLC色譜柱的設(shè)計旨在充分利用低擴散、超高壓UPLC?和UHPLC儀器（高達1000 bar），并可與所有市售UPLC和UHPLC系統(tǒng)相兼容。
ACE Excel UHPLC色譜柱可以為堿性化合物提供更佳的峰形，改善柱子與柱子之間的重現(xiàn)性，提供額外的利用多種分離機制的固定相，以及改善色譜柱的耐用性。

ACE Excel UHPLC色譜柱的可用性意味著色譜分析師在使用UPLC和UHPLC儀器時有更多的選擇來獲得更好的結(jié)果。

圖 8：ACE Excel色譜柱提供快速、高分辨率的分離

條件
色譜柱：ACE Excel C18, 2 μm, 3.0 x 50 mm
流動相：60秒內(nèi)從30%B至B
A =水+ 0.1％TFA B =乙腈
流速：2.5 mL/min
柱溫：40oC
壓力：703 bar (10,335 psi)
檢測：PDA, 254 nm
儀器：安捷倫1290 UHPLC
化合物
1. 乙酰苯胺
2. 苯乙酮
3. 苯丙酮
4. 苯丁酮
5. 二苯甲酮
6. 苯戊酮
7. 苯己酮
8. 苯庚酮
9. 苯辛酮

ACE Excel C18色譜柱可在不到60秒內(nèi)提供這9種分析物的基線分離。

4.已經(jīng)證實ACE HPLC色譜柱和ACE Excel UHPLC色譜柱具有持久耐用的、可靠的日常性能和zhuo越的色譜柱壽命。  

通過鍵合在硅膠固定相載體上的硅氧烷的酸化水解可以失去鍵合相，從而降低色譜柱的壽命。該酸水解隨著流動相pH的降低和柱溫的升高而增加。  

與C18相相比，較短的烷基相如C4和C3以及苯基相通常更容易失去鍵合相。此外，低純度的硅膠固定相載體和低表面覆蓋的固定相載體使得一些鍵合相更易于酸解。
由于使用超高純度的硅膠固定載體粒子以及鍵合相的極高表面覆蓋，ACE鍵合相表現(xiàn)出極高的穩(wěn)定性。（參見圖9）
盡管所有ACE鍵合相的穩(wěn)定性都很優(yōu)異，但是一些鍵合相并不像其它鍵合相那樣穩(wěn)定。例如，通常認為C18鍵合比柱長較短的烷基相、PFP相和苯基鍵合相更穩(wěn)定。  

實際上，典型的苯基固定相穩(wěn)定性不佳是該相在方法開發(fā)中不常被選擇的主要原因之一。
為了解決這個問題而開發(fā)了ACE C18-AR，其允許色譜分析利用強大的π-π和偶極-偶極分離機制，并仍然享有C18相的堅固性及耐用性。  

如圖10所示，ACE C18-AR不僅對典型的苯基鍵合相具有非常優(yōu)異的穩(wěn)定性，它甚至還比許多其他C18鍵合相表現(xiàn)出更佳的穩(wěn)定性。  

類似地，ACE C18-PFP提供了多種分離機制，可以利用它們實現(xiàn)更佳的總體分離效果，同時從C18相的穩(wěn)定性中受益。  

圖 9：酸穩(wěn)定性，pH 1.8  

條件
色譜柱：ACE 4.6 x 150 mm
流動相：50% CH3CN, 50%水
流速：1.0 mL/min
溫度：22 °C
分析物：菲  

酸性暴露條件：
流動相：50% CH3CN 50% 0.1%TFA（溶于水中）（pH 1.8）
流速：1.0 mL/min
溫度：22 ℃  

圖10：加速柱穩(wěn)定性研究：pH 1.9時80℃  

酸性暴露條件：
流動相：5:95 MeOH/0.1% TFA（溶于水中）（pH 1.9）
流速：0.20 mL/min
溫度：80 ℃
色譜柱尺寸：50 x 2.1mm
分析物：菲  

使用設(shè)計用于加速柱降解下的條件，ACE C18-AR相顯示保留損失極少，其壽命相當(dāng)于高度穩(wěn)定的ACE C18相。兩種固定相均由相同的超純硅膠而制成，而且比Zorbax SB-C18的耐久性更好(Zorbax SB-C18曾視作在高溫和低pH條件下具有極好穩(wěn)定性的固定相）。
正如預(yù)期的那樣，基于低純度硅膠（Waters Spherisorb ODS2）的C18鍵合柱在這些加速條件下壽命大大降低。
特別值得注意的是常規(guī)苯基色譜柱與ACE C18-AR的壽命比較結(jié)果。與ACE C18-AR相比，盡管使用高純度二氧化硅，苯基色譜柱的壽命仍降低，這表明ACE C18-AR可能適用于那些使用苯丙基色譜柱壽命短的應(yīng)用。  

將HPLC和UHPLC連接到通常被稱為LC-MS的質(zhì)譜儀上已經(jīng)相當(dāng)普遍。  

然而，質(zhì)譜對可能從HPLC/UHPLC色譜柱上洗脫下來的微量的鍵合相（稱為柱“流失”）非常敏感。柱  

流失可能會干擾分析結(jié)果，并且重要的是，LC-MS應(yīng)用中所選擇的色譜柱具有足夠穩(wěn)定的鍵合相以避免過量的柱流失。  

圖11表明ACE C18-PFP色譜柱幾乎沒有“流失”干擾LC-MS分析。  

C18-PFP（以及ACE C18和ACEC18-AR）的穩(wěn)定性使得這些色譜柱更適合LC-MS應(yīng)用。  

圖 11：ACE C18-PFP色譜柱的低柱流失使其成為LC/MS應(yīng)用中的理想選擇  

條件
色譜柱尺寸：50 x 3.0 mm
流動相：梯度：在5分鐘內(nèi)從5至95% B，95% B時持續(xù)5分鐘
A: 0.1％甲酸(溶于水中)
B: 0.1％甲酸(溶于乙腈中)
流速：0.43 mL/min
溫度：60oC
檢測：安捷倫1100 MSD ESI正離子快速掃描模式,快速掃描全50 – 1000 m/z
樣品：空白運行  

柱流失可能會干擾LC-MS應(yīng)用中目標分析物的檢測和測量。  

ACE C18-PFP色譜柱未顯示柱流失。  

所有ACE色譜柱的低流失特性使其非常適合LC-MS應(yīng)用。  

UHPLC色譜柱可能缺乏耐用性。加上入口篩板堵塞的可能性，您可能面臨色譜柱的耐用性不如HPLC色譜柱的問題。  

ACE Excel色譜柱非常寬容，并提供您期望從HPLC色譜柱中獲得的相同耐用性和使用壽命。  

ACE Excel將改變您對UHPLC色譜柱耐用性的看法。  

ACE Excel色譜柱不僅填裝的更好，還采用了ZL的入口篩板設(shè)計，使其比其它UHPLC色譜柱更不容易被堵塞。  

仍建議您像使用任何UHPLC色譜柱一樣過濾樣品和流動相，但ACE Excel色譜柱比其他UHPLC色譜柱更為寬容，并提供與HPLC色譜柱相同的耐用性和使用壽命。  

圖 12：ACE Excel色譜柱在耐用性方面有良好的口碑  

將2.1×100mm ACE Excel C18 UHPLC色譜柱在平均1,000 bar（14,500 psi）壓力下進行2000多個梯度的運行。  

在該穩(wěn)定性研究結(jié)束時，柱效（塔板數(shù)）和保留時間基本保持不變。  

5.ACE Excel色譜柱具有口碑zhuo越的可重現(xiàn)性。  

柱子與柱子之間的可重現(xiàn)性受硅膠固定相載體的生成、固定相與固定相載體的鍵合以及色譜柱中固定相的填充的影響。  

在色譜柱的制備過程中，每個階段被控制得越好，色譜柱的可重現(xiàn)性和質(zhì)量則越好。
ACE色譜柱在色譜柱制備過程中的每個階段均得到了全面控制。  

這些控制措施確保ACE色譜柱在柱間以及批次之間產(chǎn)生可靠且可預(yù)測的性能。  

圖13提供了典型批次驗證測試的實例。  

硅醇活性的細微變化是柱子與柱子之間選擇性變化的主要原因之一。  

ACE和ACE Excel色譜柱由于使用超純試劑和嚴格的制造工藝控制（可以獲得具有均一表面特性的高純度硅膠固定相載體）而具有出色的可重現(xiàn)性。  

將這種高純度硅膠與先進的鍵合技術(shù)相結(jié)合，可以產(chǎn)生一系列高惰性的固定相，這些固定相幾乎消除了色譜中的硅醇干擾，從而提供zhuo越的柱子與柱子之間的可重現(xiàn)性。  

6.ACE色譜柱可以提供從UHPLC到HPLC再到制備型HPLC的易擴展性。  

相同的質(zhì)量控制，可以確保不同批次色譜柱的高重現(xiàn)性，也可以保證您更容易地在UHPLC和HPLC方法之間進行轉(zhuǎn)換，或需要分離和純化目標化合物時放大到制備應(yīng)用上。  

柱效當(dāng)然會改變，但可以預(yù)料的是，譜帶間距（選擇性）將相同。  

圖14闡明了當(dāng)使用相同的ACE鍵合相但不同粒徑填充的色譜柱進行操作時，可以預(yù)見到分析物一致的譜帶間距類型（選擇性）。  

圖 14：將ACE固定相從UHPLC（2μm）擴展到HPLC（3μm和5μm）再至制備型HPLC（10μm）時，選擇性得到了保留與保證。

條件
流動相：35:65 MeCN/0.1%TFA（溶于水中）
溫度：22 ℃
波長：254 nm

分析物
1. 尿嘧啶
2. 4-羥基苯甲酸
3. 乙酰水楊酸
4. 苯甲酸
5. 2-羥基苯甲酸
6. 對羥基苯甲酸乙酯

試驗樣品的這些色譜圖在填充有相同的鍵合相但不同粒徑的色譜柱上以相同的流動相條件運行，結(jié)果闡明分離從UHPLC擴展到HPLC再到制備型HPLC的容易程度。

當(dāng)使用ACE Excel UHPLC色譜柱進行快速方法開發(fā)，且該方法必須可轉(zhuǎn)移到HPLC時，易擴展性則顯得特別有價值。

圖 15：ACE固定相可以提供相同的選擇性，無論它們是UHPLC、HPLC還是制備型HPLC色譜柱

條件
色譜柱：2.1 x 50 mm
流動相：1.4分鐘內(nèi)從30% B至90% B
A = 20mM甲酸銨+ 0.1％甲酸
B =乙腈+ 0.1％甲酸
梯度：在30％B時持續(xù)0.30分鐘，在1.10分鐘內(nèi)從30至90％B，在90％B時持續(xù)0.40分鐘
流速：0.5 mL/min
柱溫：30oC
檢測：AB Sciex Triple Quad（TM）5500 MS，以ESI（+）模式運行
儀器：島津Prominence UFLC系統(tǒng)

分析物
1. 甲苯咪唑
2. 普羅替林
3. 阿米替林
4. 洛哌丁胺

試驗樣品的這些色譜圖在ACE Excel C18 2μmUHPLC色譜柱、ACE C18 3μmHPLC色譜柱和ACE C185μm色譜柱上以相同的流動相條件運行，結(jié)果闡明ACE固定相的選擇性一致，無論填充粒徑如何。

這使得從UHPLC到HPLC或HPLC再到UHPLC的方法轉(zhuǎn)移更加容易。同時也使得從分析型應(yīng)用擴展到制備型應(yīng)用更加容易。

         液相色譜儀除了日常維護保養(yǎng)外，使用高純度溶劑不僅能保護液相系統(tǒng)，也能增加結(jié)果的可靠性。HPLC級表示化學(xué)試劑的純度，是可在GX液相色譜中使用的試劑的純度，制備色譜法、平行分析或梯度分析需要使用到不同的HPLC級試劑。

         樣品在注入液相系統(tǒng)前，必須選擇一種合適的HPLC溶劑。在反相GX液相色譜中，當(dāng)樣品溶劑與流動相的洗脫強度有差異,尤其是前者的洗脫強度較強時,就會產(chǎn)生峰的變形及柱效的降低。解決該問題最有效的方法是使用流動相作為溶劑溶解樣品,這樣既可以避免樣品溶劑和流動相之間任何強度或粘度的不匹配，也可以減少樣品分析時基線的漂移。溶劑在流動相中起著重要的作用，并有助于將進樣品通過分離柱后輸送到檢測器。為了滿足不同的分析要求，可以購買不同純度等級的溶劑來使用，HPLC分析需要使用高純度的溶劑，但是同時也要考慮成本和實用性等方面。

         HPLC級溶劑的純度通常超過99.9％，并且瓶身標簽上還會標明其他雜質(zhì)的含量。但是雜質(zhì)會導(dǎo)致多余的峰，從而干擾色譜圖中的主峰，對我們的分析結(jié)果產(chǎn)生干擾。雜質(zhì)產(chǎn)生的原因有很多，可能溶劑純度不夠，可能是瓶身不干凈或者軟管不干凈，還可能是溶劑吸濾頭的過濾雜質(zhì)效果不好。恒譜生不銹鋼流動相進樣口過濾器能安全有效地保護泵和止回閥，尺寸小，適用于各種品牌的HPLC系統(tǒng)和多種小瓶口的存儲池容器。吸濾阻力較小，幾乎沒有背壓和形成空化，兼容多種流動相管路，無需換吸濾頭即可配不同規(guī)格的吸管，過濾微粒污染物效果好，無氣泡，溶劑利用率高。

        在整個紫外線可見波長范圍內(nèi)，沒有溶劑是100％透明的，常用的HPLC溶劑在一定波長范圍內(nèi)顯示出透明性。大多數(shù)應(yīng)用中會使用紫外線檢測器，因此所選的溶劑應(yīng)該盡可能具有低的紫外線截止波長，讓大多數(shù)的樣品組分在高于截止值的波長處顯示出可測量的吸收度。除此之外，溶劑的粘度越高，填充柱中固定相的阻力將導(dǎo)致背壓越高，因此所選溶劑也應(yīng)具有低粘度才是比較理想的。

        大多數(shù)的溶劑在密封瓶中才能維持它的穩(wěn)定性，但某些溶劑的保存期限有限。使用時要注意查看使用期，注意在有效期內(nèi)使用，不要購買過多的溶劑避免ZH用不完產(chǎn)生了浪費行為。

      作為ZH的建議，所有溶劑在使用前通過進樣口過濾器過濾并脫氣，這樣的預(yù)防措施將提高HPLC系統(tǒng)的使用壽命，也有助于增加分析結(jié)果的可靠性。

LC-MS的強大功能已經(jīng)得到了生物醫(yī)學(xué)實驗室的認可。1,2現(xiàn)在的LC-MS儀器已經(jīng)從研究到常規(guī)臨床實驗室范圍廣泛使用，并有效應(yīng)用于以下領(lǐng)域：

· ZL藥物監(jiān)測 - 測量血漿，血液或組織中的藥物（例如免疫YZ劑） 

· 濫用藥物測試 - 測量在尿液或唾液中的藥物（例如哌替啶，等等） 

· 激素測試 - 測量血清或血漿中的激素（例如類固醇或甲狀腺激素） 

· 生物胺分析 - 測量血漿或尿液中的生物胺（如兒茶酚胺） 

· 新生兒篩查 - 通過使用LC-MS水平監(jiān)測氨基酸和?；鈮A檢測可ZL的疾病

LC-MS儀器相對于其他分析工具具有很強的吸引力，原因在于該技術(shù)能夠以非常高的靈敏度同時測量多種復(fù)雜分析物。此外，速度和信任也是患者護理的關(guān)鍵因素，同時成功的LC-MS生物醫(yī)學(xué)分析具有高度靈敏度，可追溯性強和數(shù)據(jù)可靠的特性。因此，對于生物醫(yī)學(xué)用LC-MS工作流程中的試劑水及其水在LC-MS成功分析實踐中的作用將通過以下三個方面進行介紹。

 靈敏度 

超純水被廣泛用于LC-MS流程的各個環(huán)節(jié)（圖1），所以是導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)鬼峰，基線噪音和高MS背景等這些原因的主要污染源。同時也會使儀器或方法的靈敏度下降，使一些低濃度分析變的困難3。為了避免干擾，確保檢測到的分析物是來自樣品，而非來自實驗用水4，實驗過程需要使用高質(zhì)量的超純水，避免數(shù)據(jù)偏差和再次污染5。

Figure 1. The role of water in the LC-MS laboratory 

超痕量分析是LC-MS生物醫(yī)學(xué)分析中的一個應(yīng)用領(lǐng)域，在激素檢測中，相較于其他實驗成分，其中水的使用量是非常大的。因此將Milli-Q水（電阻率18.2MΩ·cm（25℃），TOC<5ppb）作為激素中雌二醇分析的實例進行分析。這個實驗的結(jié)果如圖2所示，其中MRM色譜圖顯示Milli-Q?水中不存在雌二醇，確保了分析方法的低檢出限，使用標準加入法測得雌二醇濃度為265.40ng/L。 

前體離子273m/z和碎片離子255m/z用多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）ESI+轉(zhuǎn)換。HPLC和MS以及LC-MS/MS的儀器參數(shù)以及制備Milli-Q?水所用水源，見圖2。

Figure 2. MRM chromatogram (ESI+) of estradiol in a sample and in Milli-Q?water.

 可追溯性 

水純化系統(tǒng)的在線監(jiān)測功能使科學(xué)家們確定他們所使用的水是否符合LC-MS分析的要求。但是，當(dāng)問題產(chǎn)生時，說明LC-MS分析過程中已經(jīng)出現(xiàn)了污染，找到并消除其來源至關(guān)重要，因為污染隱患來源非常多，使用LC-MS實驗時收集記錄的水質(zhì)參數(shù)的數(shù)據(jù)可以在特定的日期與污染源聯(lián)系起來，從而促進水質(zhì)評估和問題的排查。

而且，在所有臨床實驗室中，可追溯性都是質(zhì)量管理體系中的重要需求，能使實驗室符合認證，例如，ISO15189：2007標準或CLSI?C3—A4。所以，在這種情況下用電子方式記錄水質(zhì)參數(shù)的方法是一種確保高質(zhì)量認證的解決方案。

 可靠性 

為了滿足LC-MS生物醫(yī)學(xué)實驗室的要求，水源必須可靠。所以水純化系統(tǒng)不僅要生產(chǎn)高質(zhì)量的實驗用水，而且這個質(zhì)量必須始終如一。為確保水質(zhì)的一致性，使用在線監(jiān)測工具。水中的離子含量通過電阻率測量來評估，通常電阻率18.2MΩ·cm（25℃）的水表示不含離子雜質(zhì)。 

為了檢測有機污染物程度，可用可氧化總有機碳（TOC）計算;TOC低于5ppb的水（或μg/L）適用于LC-MS實驗。因此，要檢測水質(zhì)的穩(wěn)定性需要連續(xù)監(jiān)測Milli-Q?水質(zhì)的電阻率和TOC參數(shù)。圖3顯示了Milli-Q?系統(tǒng)提供的水質(zhì)穩(wěn)定性在線監(jiān)測數(shù)據(jù)。

Figure 3. Levels of Resistivity (MOhm·cm) measured continuously and TOC (ppb) measured every 3 minutes as a function of volume produced by a Milli-Q? water system. Di?erent colors refer to data obtained for three di?erent sets of consumables installed by turns. 

 結(jié)論 

超純水適用并符合LC-MS生物醫(yī)學(xué)分析實驗的要求，而且良好的水質(zhì)對實驗的高質(zhì)量和穩(wěn)定性至關(guān)重要。臨床實驗室LC-MS實驗 可以使用Milli-Q?水凈化系統(tǒng)即能符合LC-MS儀器高靈敏度的要求還可以獲得可靠和可追溯的分析結(jié)果。

References

1. K. S-Y. Leung, B. M-W. Fong, LC–MS/MS in the routine clinical laboratory: has its time come? Analytical and Bioanalytical Chemistry, 406, 2289-2301 (2013). 

2. M. Himmelsbach, 10 years of MS instrumental developments--impact on LC-MS/MS in clinical chemistry, J. Chromatogr. B, 883– 884, 3– 17 (2012). 

3. A. Khvataeva-Domanov, S. Mabic, Four Ways to Better Water Quality in LC-MS, R&D Magazine, (2015); http://www.rdmag.com/articles/2015/09/four-ways-better-water-quality-lc-ms 

4. CLSI?C62-A - Liquid-Chromatography-Mass Spectrometry methods; approved guideline, Johns Hopkins Medical Institutions, First Edition, 5.3.1, 34, (2014); http://shop.clsi.org/chemistry-documents/C62.html 

5. Controlling Contamination in UltraPerformance LC?/MS and HPLC/MS Systems, Waters Corporation; http://www.waters.com/webassets/cms/support/docs/715001307d_cntrl_cntm.pdf 

6. B. Keller, J. Sui, A.B. Young, R.M. Whittal, Interferences and contaminants encountered in modern mass spectrometry, Anal. Chim. Acta, 627, 71-81 (2008). 

7. M. Vogeser, C. Seger, Pitfalls associated with the use of liquid chromatography-tandem mass spectrometry in the clinical laboratory, Clin. Chem. 56, 1234-1244 (2010). 

8. Millitrack? e-Solutions, A unique set of data management and monitoring software solutions for water purification systems, MilliporeSigma; www.emdmillipore.com/millitrack-esolutions

前天的文章介紹了賽默飛針對GB2763-2019 食品中農(nóng)藥Z大殘留限量，推出了市場上wei一的集GC-MS/MS、LC-MS/MS和IC-MS/MS三大技術(shù)平臺為一體的全流程解決方案。（鏈接：http://m.sdczts.cn/zt5210/news_43033.html）今天就要給大家繼續(xù)介紹LC-MS方案的技術(shù)特點。

LC-MS方案的技術(shù)特點

一、一個前處理一針進樣一天完成

本解決方案通過一次 QuEChERS 樣品前處理，在 LC-MS/MS上一針進樣，25min內(nèi)完成正負模式同時采集，可在一天內(nèi)實現(xiàn)篩查和確證超過 460 種農(nóng)藥，其中GB2763-2019 監(jiān)管范圍內(nèi)的近400種，大大節(jié)省了人力、物力和成本。

二、二維方法包： 儀器方法包、耗材包

1.成熟的方法包

多目標物的檢測，儀器方法的優(yōu)化十分的繁瑣，從每個化合物質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化，到整體液相條件的選擇，從數(shù)據(jù)庫到定量方法的建立，每個實驗室都要耗費巨大的精力。這些工作，賽默飛的工程師們已替您完成，為您精心準備了基于強大的TraceFinder軟件的database及采集、定量方法包，為您分析的全流程保駕護航。您所需要做的，就是動動鼠標，把方法導(dǎo)入即可。

賽默飛針對GB2763的database中包括了每個農(nóng)藥的名稱、分子式、分子量、CAS號，以及保留時間、加和模式等信息，便于使用和查找。對于有多種加和模式的農(nóng)藥品種，根據(jù)其響應(yīng)，數(shù)據(jù)庫中盡可能的給出響應(yīng)較強的多種加和模式的SRM條件。

同時由于食品的多樣性，復(fù)雜的基質(zhì)有時會對某個子離子的響應(yīng)產(chǎn)生干擾，進而影響定性和定量的準確性。這一點賽默飛也給大家提供了備選方案，對于每個農(nóng)藥品種，提供了多個子離子的Z優(yōu)SRM質(zhì)譜條件，同時整合在database中，便于根據(jù)不同食品基質(zhì)來選擇Z適合的監(jiān)測離子對。

2.全系列的耗材包

除了儀器方法包，賽默飛還貼心的為您提供色譜耗材和前處理耗材包：

三、三大技術(shù)保障：掃描速度快、選擇性高、前所未有的穩(wěn)定

1.wu與倫比的掃描速度(600 SRM/秒)

——更多化合物/樣本，更多樣本/天

2.高選擇性SRM帶來優(yōu)良的選擇性

——0.2 Da FWHM, 0.4 Da FWHM

3.前所未有的穩(wěn)定性

——保證每一次分析運行，保障您的每一次投資

蘋果基質(zhì)中1μg/kg加標水平，一針進樣，超過460種農(nóng)藥正負離子同時采集，輕松獲得足夠的掃描點數(shù)，提供高質(zhì)量數(shù)據(jù)的同時，保證了定性定量的準確性。

茶葉基質(zhì)中連續(xù)進樣100針，峰面積變化趨勢

四、四大技術(shù)特點：高靈敏度、優(yōu)異的回收率和重復(fù)性、出色的線性關(guān)系

面對復(fù)雜基質(zhì)中的多殘留檢測，賽默飛的三重四極桿質(zhì)譜表現(xiàn)從來沒有讓您失望。在蘋果基質(zhì)中1 μg/kg的加標水平下，超過80%的農(nóng)藥品種的回收率和重現(xiàn)性可以滿足歐盟Z新的SANTE 12682/2019的苛刻要求；10 μg/kg的加標水平下，超過95%的農(nóng)藥品種回收率在70~120%之間，RSD<20%。

增強型雙模式離散打拿極檢測器，在掃描范圍內(nèi)提供ji致的線性范圍及動態(tài)范圍，同時延長電子倍增器使用壽命，保證長時間有效工作！如下圖所示，農(nóng)藥在基質(zhì)樣品中輕松獲得優(yōu)異的線性關(guān)系，即使在1~5 ng/mL低濃度范圍，也實現(xiàn)了良好的擬合，保證了在整個線性范圍內(nèi)定量的準確性。

GX快速地農(nóng)藥多殘留檢測

上述結(jié)果表明，賽默飛針對GB2763-2019推出的LC-MS/MS多農(nóng)殘解決方案，基于一套簡單的QuEChERS樣品前處理流程，利用Vanquish超GX液相色譜系統(tǒng)對復(fù)雜樣品強大的分離能力，加上TSQ三重四極桿質(zhì)譜wu與倫比的掃描速度（600 SRM/秒）、靈敏度和穩(wěn)定性，實現(xiàn)了一個前處理、一針進樣正負同時分析超過 460 種農(nóng)藥，其中近400 種為 GB2763 監(jiān)管的農(nóng)藥，只需一天便可得出分析結(jié)果，從而使GX快速地農(nóng)藥多殘留檢測成為可能。

hplc熒光檢測器的優(yōu)點是什么？