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  十幾年x 2017-11-03 00:00:00

  PCR技術(shù)基本原理 類似于DNA 復(fù)制程其特異性依賴于與靶序列兩端互補寡核苷酸引物 PCR種體外DNA 擴增技術(shù)模板DNA、引物4種脫氧核苷酸存條件依賴于DNA聚合酶酶促合反應(yīng)待擴增DNA片段與其兩側(cè)互補寡核苷酸鏈引物經(jīng)高溫變性——低溫退火——引物延伸三步反應(yīng)循環(huán)使DNA片段數(shù)量呈指數(shù)增加短間內(nèi)獲我所需量特定基片段 PCR擴增儀 環(huán)境檢測靶核酸序列往往存于—復(fù)雜混合物細胞提取液且含量低于探測種復(fù)雜群體特異微物或某基雜交顯敏使用PCR技術(shù)靶序列放幾數(shù)量級再用探針雜交探測擴增序列作定性或定量研究析微物群體結(jié)構(gòu)PCR技術(shù)與其技術(shù)結(jié)合起使用 RT-PCR、競爭PCR、巢式PCR、RAPf)、ARDRA等 類別 聽語音 競爭性PCR種定量PCR通向PCR反應(yīng)體系加入工構(gòu)建帶突變競爭模板、控制競爭模板濃度確定目模板濃度目模板作定量研究 PCR技術(shù)限制酶切技術(shù)結(jié)合使用用限制酶酶切目基PCR擴增產(chǎn)物通酶切產(chǎn)物析探測該基態(tài)性 RAPD(randomly amplified polymorphic DNA， RAPD)應(yīng)用比較廣泛項技術(shù)RAPD用些某—特定基非特異性引物擴增某些片段RAPD析用于探測含混合微物種群各種物反應(yīng)器微物性用RAPD析所基組指紋圖譜比較段間內(nèi)微物種群變化及比較試規(guī)模試規(guī)模反應(yīng)器面用足用估測群落物性 步驟 聽語音 PCR由變性--退火--延伸三基本反應(yīng)步驟構(gòu)： 模板DNA變性 模板DNA經(jīng)加 熱至93℃左右定間使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形雙鏈DNA解離使單鏈便與引物結(jié)合輪反應(yīng)作準備； 模板DNA與引 物退火(復(fù)性) 模板DNA經(jīng)加熱變性單鏈溫度降至55℃左右引物與模板DNA單鏈互補序列配結(jié)合； 引物延伸 DNA模板--引物結(jié)合 物TaqDNA聚合酶作用dNTP反應(yīng)原料靶序列模板按堿基配與半保留復(fù)制原理合條新與模板DNA 鏈互補半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三程獲更半保留復(fù)制鏈且種新鏈循環(huán)模板每完循環(huán)需 2～4鐘2～3能待擴目基擴增放幾百萬倍達平臺期(Plateau)所需循環(huán)數(shù)取決于品模板拷貝

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