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- 開(kāi)機(jī)6154645 2015-10-27 00:00:00
- 本人在表達(dá)一個(gè)多肽（一種KJ肽），成熟肽只有26個(gè)AA，所以采用了三個(gè)重復(fù)片段串聯(lián)表達(dá)，問(wèn)題是26個(gè)AA中有8個(gè)半胱氨酸，三個(gè)重復(fù)片段90個(gè)AA中就有24個(gè)C，中間加上羥胺的識(shí)別位點(diǎn)，可以純化后化學(xué)方法切割成單體。 目前我試過(guò)真核表達(dá)（畢赤酵母SMD1168 ，表達(dá)載體Invitrogen pPizaA 3.5k），原核表達(dá):表達(dá)載體 PET28，PET-HIS， 表達(dá)菌株有BL21（DE3 ），Rosseta（DE3） 都沒(méi)有表達(dá)，做了好幾個(gè)月了，都抓狂了！?。?！ 我分析是半胱氨酸含量太高所致，導(dǎo)師說(shuō)不排除KJ肽的毒性作用，主要是還得接著往下做！！ 請(qǐng)教大家有沒(méi)有在表達(dá)載體，菌株，或是方法上好的建議或者幫我分析表達(dá)不出來(lái)的愿意也可以啊 ，麻煩大家了 呵呵
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