從1985年至今的30多年時(shí)間里，PCR分析經(jīng)歷了三代技術(shù)的發(fā)展。DY代傳統(tǒng)PCR技術(shù)，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行定性分析。第二代熒光定量PCR技術(shù)，通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)的積累實(shí)時(shí)監(jiān)控PCR進(jìn)程，ZH用Cq值對(duì)基因進(jìn)行定量分析。第三代數(shù)字PCR技術(shù)，通過將PCR反應(yīng)液進(jìn)行有限稀釋，實(shí)現(xiàn)核酸分子的單分子擴(kuò)增，ZZ采取終點(diǎn)法檢測(cè)陽性微滴的熒光信號(hào)，有熒光信號(hào)的微滴判讀為 1；沒有熒光信號(hào)的微滴判讀為 0，因此該技術(shù)被稱為數(shù)字PCR。

PCR技術(shù)在不斷地蛻變卻從未淡出我們的視野，如今已經(jīng)滲透到分子生物學(xué)領(lǐng)域的各種研究層面。尤其在今年大流行疾病中，展現(xiàn)了PCR技術(shù)的強(qiáng)大之處。那在科學(xué)研究中，我們?cè)撊绾芜x擇傳統(tǒng)PCR 、熒光定量 PCR與數(shù)字 PCR呢？

首先我們要清楚，三代PCR技術(shù)所有的基礎(chǔ)源于PCR反應(yīng)的基本原理和PCR反應(yīng)的3個(gè)重要階段，分別是指數(shù)期、線性期和平臺(tái)期。

指數(shù)期

指數(shù)期內(nèi)，每個(gè)循環(huán)PCR產(chǎn)物量大約增加1倍（假定 100%反應(yīng)效率），該階段的擴(kuò)增反應(yīng)具有高度特異性和精確度。

線性期（高變異性）

隨著PCR反應(yīng)體系成分的消耗，其中的一個(gè)或者多種成分限制反應(yīng)，導(dǎo)致反應(yīng)開始減緩，并且每個(gè)循環(huán)的PCR 產(chǎn)物不再加倍。

平臺(tái)期

反應(yīng)停止，不再產(chǎn)生更多的產(chǎn)物。因?yàn)槊總€(gè)樣品具有不同的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，所以每個(gè)反應(yīng)將在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)入平臺(tái)期，平臺(tái)期內(nèi)可以看到這些差異。

傳統(tǒng) PCR

傳統(tǒng)PCR通過瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR終產(chǎn)物進(jìn)行分析（圖2），它的局限性就在于只能做定性分析。在圖3中，3個(gè)反應(yīng)孔含有相同量的 DNA模板，但到達(dá)平臺(tái)期后產(chǎn)生的熒光信號(hào)卻不同，說明擴(kuò)增產(chǎn)物的量存在不同（反應(yīng)動(dòng)力學(xué)變化所致）。這也表明了傳統(tǒng)PCR平臺(tái)期測(cè)量時(shí)結(jié)果存在變異，產(chǎn)出的DNA量不一定能反映最初情況，所以無法進(jìn)行定量。

熒光定量 PCR

同樣在圖3中，發(fā)現(xiàn)在指數(shù)期內(nèi)，3個(gè)反應(yīng)孔的擴(kuò)增曲線完全重合，說明指數(shù)期內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)將更加精確，可實(shí)現(xiàn)更加準(zhǔn)確的定量。閾值線是擴(kuò)增產(chǎn)物熒光強(qiáng)度超過背景時(shí)的一個(gè)熒光強(qiáng)度值，樣品達(dá)到此熒光強(qiáng)度值所經(jīng)過的循環(huán)數(shù)稱為Cq值。通過比較未知濃度的樣品與一系列標(biāo)準(zhǔn)品的Cq值，可以精確測(cè)定未知反應(yīng)中的模板 DNA數(shù)量。

數(shù)字 PCR

數(shù)字 PCR 是通過將樣本DNA隨機(jī)分布至獨(dú)立的反應(yīng)單元中，每個(gè)反應(yīng)單元中包含或者不包含1個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分子，所有獨(dú)立的反應(yīng)單元進(jìn)行平行擴(kuò)增后，對(duì)每個(gè)反應(yīng)單元的陰性或者陽性熒光信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，就可以計(jì)算出原始樣本的拷貝數(shù)，無需參考標(biāo)準(zhǔn)品或內(nèi)源性對(duì)照品，也不需要標(biāo)準(zhǔn)曲線。

傳統(tǒng)PCR 、熒光定量 PCR與數(shù)字 PCR的選擇

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Naica?微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國(guó)Stilla Technologies Naica數(shù)字PCR平臺(tái)是實(shí)現(xiàn)高靈敏DNA/RNAJD定量的技術(shù)工具，只需一步移液操作，即可自動(dòng)生成單層平鋪的微滴，同一反應(yīng)液進(jìn)行多基因的單分子模板擴(kuò)增，通過三色或六色熒光通道檢測(cè)，自動(dòng)QC質(zhì)控，識(shí)別多色熒光中有效的陰陽性微滴，從而達(dá)到目的DNA/RNA的高JZjuedui定量。同時(shí)提供原始數(shù)據(jù)、單微滴追溯等功能，確保數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。

參考文獻(xiàn)：

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5. Whale AS, Huggett JF, Cowen S, et al. Comparison of microfluidic digital PCR and conventional quantitative PCR for measuring copy number variation. Nucleic Acids Res. 2012;40(11):e82.

英國(guó)進(jìn)口PCR耗材,PCR八聯(lián)管 實(shí)驗(yàn)室耗材本生生物公司供應(yīng)：分光光度計(jì)，熒光定量PCR耗材，移液器吸嘴，微量離心管，進(jìn)口凍存管，細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，色譜耗材，針頭過濾器。

英國(guó)進(jìn)口PCR耗材,PCR八聯(lián)管

0.1ml PCR八聯(lián)管pp材質(zhì)，薄壁設(shè)計(jì)，適用于使用100ul反應(yīng)體系模塊的熒光定量PCR儀及普通/梯度PCR儀。

產(chǎn)品介紹：  
>以高品質(zhì)生物級(jí)聚丙烯為原料，超潔凈生產(chǎn)環(huán)境生產(chǎn)。
>管壁薄而且壁厚均勻，保證了快速的傳熱效率和樣品的受熱均勻。  
>管蓋專業(yè)級(jí)超亮光學(xué)平面區(qū)域，保證了檢測(cè)光的通過率。
>與PCR儀導(dǎo)熱槽配合設(shè)計(jì)，與導(dǎo)熱槽配合性能好，更加利于熱傳導(dǎo)。
>獨(dú)特設(shè)計(jì)，與熒光定量PCR光學(xué)平蓋配合適中，有效防止樣品蒸發(fā)。
>高精度模具制造及精密注塑工藝，保證了產(chǎn)品的品質(zhì)及批次間產(chǎn)品均一性和穩(wěn)定性。  
>正面?？套帜笜?biāo)識(shí)，方便樣品識(shí)別區(qū)分。
適用儀器：
適用于ABI7500fast、stepone/plus；BIO-RADCFX96、MJ；Roche480等100ul反映體系的熒光定量PCR儀及普通PCR儀

英國(guó)進(jìn)口PCR耗材,PCR八聯(lián)管 0.2ml PCR八聯(lián)管

產(chǎn)品介紹：
適用于常規(guī)PCR溫度循環(huán)系統(tǒng)和定量PCR系統(tǒng)，包括8聯(lián)PCR管和96/384孔PCR板。 純度高達(dá)99.9%的聚丙烯、超薄設(shè)計(jì)、壁厚*均勻的工藝使得熱傳導(dǎo)精確、控溫準(zhǔn)確、減少實(shí)驗(yàn)循環(huán)時(shí)間。通過嚴(yán)格的質(zhì)控和認(rèn)證確保產(chǎn)品無DNase 、無RNase 、無蛋白酶，內(nèi)毒素含量控制在安全標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)。獨(dú)有的長(zhǎng)法蘭管蓋設(shè)計(jì)，減少樣品蒸發(fā)；PCR板裙邊上已標(biāo)記編號(hào)，可以方便加樣。

進(jìn)口PCR耗材,PCR八聯(lián)管

　　產(chǎn)品標(biāo)題

　　堿性蛋白豚水(AP ) Alkaline Peptone Water

　　農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)儀(干式法)

　　微量離心管

　　尿沉渣管(螺旋蓋) 12ML

　　量筒

　　發(fā)泡式帶蓋冰桶/冰盒

　　迷你型勻漿機(jī)

　　凍存盒Freezer Storage Box

　　1.8ml凍存管，自立，內(nèi)旋蓋，帶O型圈，印刷刻度區(qū)

　　PCR板硅膠片，適用于384孔PCR板，“+”開口，圓形孔，化學(xué)耐受型

　　細(xì)菌培養(yǎng)皿，100x15mm,滅菌，加厚

　　24孔帶蓋細(xì)胞培養(yǎng)板，貼壁，平底，透明，單個(gè)滅菌包裝

　　12孔帶蓋細(xì)胞培養(yǎng)板，貼壁，平底，透明，單個(gè)滅菌包裝

　　6孔帶蓋細(xì)胞培養(yǎng)板，貼壁，平底， 透明，單個(gè)滅菌包裝

　　T-175, 650ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶，斜口，密封蓋

　　15-425 螺紋口頂空瓶

　　24-400 EPA/VOA螺紋口樣品瓶及配套瓶蓋和隔墊

　　棕色/透明 微量?jī)?chǔ)存瓶

　　圓底螺紋樣品管

　　Qubit試劑耗材

　　50ml離心管錐底,綠色蓋,綠色印刷標(biāo)記區(qū)

　　封板膜 100張/10盒/箱

　　進(jìn)口Western 孵育盒 Half mini-gel size,75 x 52 x 35mm

　　Tip 0.5-10ul, 短吸嘴 ,無色, 盒裝

　　5.0ml凍存管

　　蠕動(dòng)泵

　　100*20mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，貼壁培養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)

　　100*20mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，貼壁培養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)，滅菌

　　60*15mm細(xì)胞培養(yǎng)皿，懸浮培養(yǎng)，滅菌

　　10ml離心管，PP(聚柄烯)圓底

　　2ml 卡口透明帶書寫處樣品瓶

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
1、可替代羅氏、伯樂、ABI、安捷倫、耶拿、艾本德、TaKaRa、力康、天隆、博日、達(dá)安、宏石、福生等各熒光定量PCR儀用的單管、八聯(lián)管、96孔板、384孔板。
2、PCR耗材品種全，可替代儀器原廠耗材，性價(jià)比高，質(zhì)量穩(wěn)定，對(duì)用戶可以節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本，對(duì)公司每月都有訂單，現(xiàn)貨庫存，順豐快遞配送，下單3個(gè)工作日即可到達(dá)用戶手中。
適應(yīng)客戶：醫(yī)院檢驗(yàn)科PCR實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室；第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)，科研院所，大專院校，制藥廠，試劑生產(chǎn)廠家，疾控中心，檢驗(yàn)檢疫。